甜瓜屬remap分子標記系統(tǒng)的建立和應用(中國科技論文在線)(編輯修改稿)
2025-07-12 23:38 本頁面
【文章內容簡介】 r， 2mmol/L Mg2+， mmol/L dNTP，Taq 酶 1 U， 6pmol引物，模板 DNA 50ng，以 ddH2O 補足 20 微升。 2%瓊脂糖凝膠電泳檢測結果 圖 1 甜瓜屬 46 份不同生態(tài)型材料 REMAP 標記檢測結果 Fig. 1 REMAP pro?le of DNA from 46 different materials in Cucumis. 圖 1 為甜瓜屬 46 份不同生態(tài)型材料的 REMAP 標記產物的瓊脂糖凝膠電泳結果。黃瓜共出現(xiàn) 7 條多態(tài)性條帶，條帶集中在 100bp750bp 之間。在 250bp750bp 之間有 5 條共有條帶，差異率為 %。黃瓜各個材料均得到 56 條條帶。在 23 份甜瓜材料中共擴增得到 8 條多態(tài)性條帶，條帶集中在 100bp500bp 間有 3 條共有帶型，差異率表現(xiàn)為 %。 REMAP 瓊脂糖凝膠電泳與聚丙烯酰胺凝膠電泳比較 100bp 250bp 500bp 750bp 1000bp p 2021bppp M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 100bp 250bp 500bp 750bp 1000bp 2021bp M 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 1000bp 2021bp M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 750bp 500bp 250bp 5 中國 科技論文在線 圖 2 REMAP 聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測 46 份甜瓜屬材料 結果 Fig. 2 REMAP pro?le of DNA from 46 different materials in Cucumis. 圖 2 REMAP 檢測結果中，共呈現(xiàn)出 33 條不同帶型，明顯多于瓊脂糖凝膠電泳檢測出的條帶數(shù)。例如在甜瓜材料中，瓊脂糖凝膠電泳結果中只有 8 個條帶。而在聚丙烯酰胺凝膠電泳中則出現(xiàn) 31 個。在 100bp250bp 間顯現(xiàn)出 21 種帶型，在瓊脂糖凝膠電泳中只有 4 條帶。表明 REMAP標記擴增中，產生大量大小相近條帶以及弱帶，這對于分辨率較低的 瓊脂糖凝膠電泳而言，很難得到清晰詳盡的指紋圖譜。瓊脂糖膠電泳適合一般核酸檢測，但相對于 REMAP，擴增條帶較多，則需要分辨率高的電泳。由此可見，為了得到更加準確的指紋圖譜， 6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳應優(yōu)先選擇，這也與王利英等 [9]的分析結果一致。 由此可見，本試驗建立的甜瓜屬 REMAP 標記技術能有效地應用于甜瓜屬不同材料間的指紋圖譜構建及品種鑒定。同時說明 Ty1copia 類逆轉座子廣泛存在于甜瓜屬，拷貝數(shù)較多，且具有高度的異質性。 REMAP 與 ISSR 單引物擴增結果比較分析 100bp 6 中國 科技論文在線 圖 3 ISSR 單引物擴增 46 份甜瓜屬材料 結果 Fig. 3 ISSR pro?le of DNA from 46 different materials in Cucumis. 由于 REMAP 標記引物是基于 LTR 的引物與 ISSR引物的組合，產生的條帶有可能僅為 ISSR引物的擴增產物，為了確定 REMAP標記產生的條帶是來源于兩引物組合的結果 ，我們進行了 ISSR單引物擴增。結果表明，單 ISSR 引物擴增結果與 REMAP 標記的擴增產物差別較大。在黃瓜材料中僅有四條，僅僅只能把材料 14， 15 和 20 區(qū)分開來，其余黃瓜材料均為在 1000bp2021bp 和100bp250bp 之間兩條共有條帶。甜瓜材料中共出現(xiàn) 7 條多態(tài)性條帶，遠遠低于 REMAP 標記的33 條多態(tài)性條帶（圖 2）。由此說明， REMAP 標記擴增的條帶，絕大多
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