楊德成畢業(yè)論文_重組cho細胞不同接種密度對最終蛋白產(chǎn)量的影響(編輯修改稿)
2025-07-08 23:06 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 胞是經(jīng)過 修飾的 CHO 細胞 ，可以 表達所需蛋白 。 目前約 70%的重組蛋白是藥物由 CHO 細胞生產(chǎn) [3]。 本次試驗 我們采用分批補料式培養(yǎng) [4]（ FedBatch） 工藝 。 此工藝 指先將 一定量的 無血清培養(yǎng)基 （無血清培養(yǎng)基相對有血清培養(yǎng)基來說，組成成分相對清楚，制備過程相對簡單 [5]，可以避免血清對細胞的毒化作用和血源性污染，避免血清批次間的質(zhì)量變動 [6]，對于培養(yǎng)細胞來說，無血清培養(yǎng)基能夠有效的提高細胞密度，延長細胞存活周期[7]，并且可以使細胞產(chǎn)品易于純化，有利于體外培養(yǎng)細胞的分化 [8]） 裝入 合適的細胞培養(yǎng)容器 中 ，在適宜的條件下接種細胞進行培養(yǎng)，使細胞不斷生長，產(chǎn)物不斷形成，而在此過程中隨著 無血清培養(yǎng)基中 營養(yǎng)物質(zhì)的不斷消耗，不斷地向 培養(yǎng)容器 中補充新的營養(yǎng)成分，使細胞進一步生長代謝，直到整個培養(yǎng)結(jié)束后取出產(chǎn) 2 物。分批補料式培養(yǎng)只是向培養(yǎng)系統(tǒng)補加必要的 楊德成： 重組 CHO 細胞不同接種密度 對最終蛋白產(chǎn)量的影響 4 營養(yǎng)成分，以維持營養(yǎng)物質(zhì)的濃度不變。 其 特點就是能夠調(diào)節(jié)培養(yǎng)環(huán)境中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度：一方面，它可以避免在某種營養(yǎng)成分的初始濃度過高時影響細胞的生長代謝以及產(chǎn)物的形成；另一方面，它還能防止某 些限制性營養(yǎng)成分在培養(yǎng)過程中被耗盡而影響細胞的生長和產(chǎn)物的形成，所以營養(yǎng)物質(zhì)的維持是關(guān)鍵 [9]。 葡萄糖的濃度對細胞生長，代謝及產(chǎn)物表達 也 起 著 重要作用 [10]，細胞的生長受葡萄糖的限制，葡萄糖耗盡后，細胞即停止生長，并逐漸死亡 [11]。 在分批補料式培養(yǎng)過程中， 按照實驗需求，在 CD012 無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，在 重組 CHO 細胞生長到第 4/6/8/10 天時 加入 CD Feed 002，維持細胞的生長。 1. 實驗材料和方法 實驗 材料 實驗儀器 表 1. 實驗儀器 儀器名稱 生產(chǎn)商家 儀器型號 生物安全柜 力新儀器（上海）有限公司 HF safe900 B2 型 移液泵 賽默飛世爾科技（中國）有限公司 Finnpipette 移液管 賽默飛世爾科技（中國）有限公司 GSP010002 瑞士阿道夫科耐搖床 科耐公司 ISF1XC TPP 管 科耐公司 87050 細胞活力 分析儀 Beckman Coulter 細胞活率分析儀 XR 分子相互作用平臺 艾瑞生物科技 （ 上海 ） 有限公司 Octet 超級恒溫水浴鍋 北京科偉永興儀器有限公司 HH501 架盤 天平天津市 天馬儀器廠 HCTP12 小型臺式離心機 SCI LOGEXD 2021 臺式離心機 貝克曼庫爾特商貿(mào)（中國）有限公司 AllegraX12 漩渦混合器 海門市其林貝爾儀器 制造有限公司 VORTEX5 搖瓶 康寧公司 431145 3 生化分析儀 美國 NOVA Biomedical Nova Bioprofile Analyzer 400 楊德成： 重組 CHO 細胞不同接種密度 對最終蛋白產(chǎn)量的影響 4 滲透壓 Advanced 2020 搖床 賽默飛世爾科技（中國）有限公司 416 CO2培養(yǎng)箱 賽默飛世爾科
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