【文章內(nèi)容簡介】 各搖瓶一次并轉(zhuǎn)換瓶體位置。 培養(yǎng) 15d后，進行培養(yǎng)結(jié)果的分析比較。 鹽藻細胞生長的測定 培養(yǎng)液中鹽藻細胞密度統(tǒng)計采用血球計數(shù)板法。先作出吸光度與細胞密度的關(guān)系曲線，然后測定培養(yǎng)液在 450nm 處的吸光度，以此確定培養(yǎng)液中鹽藻細胞密度。鹽藻細胞密度單位采用 “ x107cellsmL1”。 藻液中細胞密度的計算 公式： Y(x107cells/mL)=（ 943X61） x104 Y藻液中鹽藻細胞密度 (x107cells/mL)； X藻液吸光度 A450 鹽藻β 胡蘿卜素含量的測定 取 5mL 藻液，離心 （ 4000rmp,20min） 棄上清，加入適量 90%丙酮溶液提取色素，重復(fù) 2 次，合并各次提取液，定容到 10mL，于分光光度計波長 450nm 處讀取 A450。根據(jù) Jensen公式換算出藻液中的 β胡蘿卜素含量，并根據(jù)藻液中的細胞密度計算出每單個細胞內(nèi) β胡蘿卜素含量： β胡蘿卜素含量 P（ mg/L） =A450Vf103/2500=8A 450 V： 提取液的體積 （ 10mL） ； f： 稀釋倍數(shù) （ 2） 單個細胞內(nèi) β胡蘿卜素含量 （ pgcell1） =P106/N P： β胡蘿卜素含量 (mg/L)； N： 細胞密度 (x107cellsmL1) 鹽藻蛋白質(zhì)含量的測定 取 10mL 藻液，離心 （ 4000rmp,20min） 棄上清，收集藻細胞轉(zhuǎn)入刻度試管中，加蒸餾水定容至 10mL，低溫下反復(fù)凍融 45 次，再用超聲波破碎 120s，最后將藻液 4000rmp 離淮海工學(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 6 頁 共 19 頁 心 20min，得到蛋白質(zhì)的提取液。 蛋白質(zhì)含量的 測定采用紫外吸收法，將蛋白質(zhì)的提取液置于 1cm的石英比色杯中，以蒸餾水為對照，于分光光度計波長 280nm 和 260nm 處分別讀取 A280和 A260。根據(jù)下列公式計算藻液中的蛋白質(zhì)含量，并根據(jù)藻液中的細胞密度計算出單個細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量： 蛋白質(zhì)含量 （ mgmL1） =－ 單個細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量 （ pgcell1） =P109/N P： 蛋白質(zhì)含量 (mgmL1)； N： 細胞密度 (107cellsmL1) 3 結(jié)果與分析 硼和鉬對鹽藻的生長調(diào)控 培養(yǎng) 15d后， 通過 檢測 各瓶藻液 在 450nm處的吸光度 計算出鹽藻的細胞密度 ,從而可以看出 不同濃度的硼和鉬對鹽藻細胞生長的調(diào)控作用，結(jié)果見圖 1。 140 60 80Mo濃度:μg/L細胞密度(x107cells?mL1)B 2mg/LB 4mg/LB 6mg/L 圖 1 硼和鉬對鹽藻細胞生長的影響 各組藻液密度的 數(shù)據(jù)經(jīng) SPSS 軟件單因素處理得 F= (8,18)=,說明實驗結(jié)果差異極顯著 ， 每組數(shù)據(jù)經(jīng)兩兩比較后得到表 1。 表 1 各組鹽藻細胞 密度的數(shù)據(jù)的 兩兩比較 Tukey B 硼鉬對細胞生長的影響 Subset for alpha = .01 N 1 2 3 3 4 3 1 3 5 3 7 3 9 3 2 3 8 3 6 3 淮海工學(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 7 頁 共 19 頁 由圖 1 和表 1 可以得出 ， 鹽藻細胞生長隨硼和鉬元素濃度的變化而變化 。 鉬的濃度為40μ g/L和 80μ g/L時 ， 鹽藻的細胞密度在 硼 濃度 為 4mg/L 時 明顯大于硼 為 2mg/L 和 6mg/L時的細胞密度 。 這因為 硼 與 核酸酶、蛋白酶和果膠酶等酶的活性 以及糖的運輸有關(guān) ， 所以缺硼 鹽藻中 可導(dǎo)致核酸、蛋白質(zhì)、果膠等分解加快和糖的運輸受阻從而加速細胞的衰老和死亡，但是過多的硼會影響 細胞 對鈣、鐵等元素的吸收，所以多硼反而會抑制鹽藻的生長 ；當(dāng)鉬濃度為 60μ g/L 時，硼元素的濃度 在 6mg/L 時鹽藻的細胞密度 明顯大于 硼 2mg/L 和4mg/L 時的鹽藻細胞密度 ， 且 硼 在 2mg/L 和 4mg/L 時兩組 的 差異不 大 ， 原因可能是在鉬濃度為 60μ g/L 時， 2mg/L 和 4mg/L 的硼濃度過低造成的不利于細胞生長 。 當(dāng)硼元素的濃度為 2mg/L 時，鉬元素密度 在 40μ g /L、 60μ g /L 和 80μ g /L 時，鹽藻細胞密度 差異不 大 ，這可能是實驗過程中的誤差造成的； 當(dāng)硼元素的濃度為 4mg/L 時 , 鹽藻的細胞密度在鉬為 40μ g/L 和 80μ g/L 時明顯高于 60μ g/L； 當(dāng)硼元素的濃度為 6mg/L時，鉬元素濃度 在 60μ g /L 時 鹽藻的細胞密度顯著高于 40μ g/L 和 80μ g/L 兩組 。 原因可能是 鉬 在 植物體內(nèi) 是 固氮酶和硝酸還原酶的重要組分 ，此外 鉬 還能 促進磷的吸收和水解各種磷酸酯的磷 酸酶活性， 所以缺鉬可能引起鹽藻細胞內(nèi)缺氮和磷等元素，不利其生長，但是過多的鉬 可引起銅含量不足最終影響鹽藻細胞的生長。 從圖 1 和表 1 的整體來看 ， 九種組合中 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g /L 的組合最適合鹽藻細胞生長 ， 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 的組合最不適合鹽藻細胞生長。其原因可能是在九種組合中硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g/L 時，兩種元素之間相互促進的作用較大， 而在硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 時兩元素間的抑制作用較強。 硼和鉬對 培養(yǎng)液中 β 胡蘿 卜素 積累的調(diào)控 培養(yǎng) 15d后， 鹽 藻經(jīng)離心萃取得到的提取液在波長 450nm處 檢測 其吸光度 然后 計算得到培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量 ,從而可以看出 不同濃度的硼和鉬對 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素積累的調(diào)控作用，結(jié)果見圖 2。 567891040 60 80Mo濃度:μg/L培養(yǎng)液中β胡蘿卜素含量(mg/L)B 2mg/LB 4mg/LB 6mg/L 圖 2 硼和鉬對鹽藻 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素積累的影響 各組藻液 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜 素含量 的數(shù)據(jù)經(jīng) SPSS 軟件單因素處理得 F= 淮海工學(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 8 頁 共 19 頁 (8,18)=,說明實驗結(jié)果差異極顯著 ，每組數(shù)據(jù)經(jīng)兩兩比較后得到表 2。 表 2 各組 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量數(shù)據(jù)的 兩兩比較 Tukey B 硼鉬對 培養(yǎng)液中β 胡蘿卜素積累的影響 Subset for alpha = .01 N 1 2 3 3 4 3 5 3 2 3 1 3 9 3 7 3 8 3 6 3 圖 2 和表 2 表明 ， 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量隨硼和鉬元素濃度的變化而發(fā)生規(guī)律性變化 。 當(dāng)鉬的濃度為 40μ g/L 時 ， 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量 硼元素密度 在 2mg/L 和 4mg/L時明顯高于 6mg/L， 但是 前 兩組 的差異不大。其原因是在 鉬的濃度為 40μ g/L 時， 6mg/L的 硼 濃度過高 造成的， 過多的硼會影響細胞對鈣、鐵等元素的吸收因而不利于 β 胡蘿卜素的積累 ； 當(dāng)鉬的濃度為 60μ g/L 時，培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的含量在 硼元素密度 為 6mg/L 時，明顯高于 2mg/L和 4mg/L兩組，且這兩組的差異不顯著。這是 因為 在 鉬為 60μ g/L時 ， 2mg/L和 4mg/L 的 硼 濃度過低 造成的， 缺硼 鹽藻中 可導(dǎo)致核酸、蛋白質(zhì)、果膠等分解加快和糖的運輸受阻從而加速細胞的衰老和死亡，從而不利于 β 胡蘿卜素 的積累 ； 當(dāng)鉬的濃度為 80μ g/L時， 鹽藻培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量在 硼元素密度 為 4mg/L時 大于硼 2mg/L和硼 6mg/L兩組 ， 其原因是 鉬的濃度為 80μ g/L 時， 2mg/L 的硼濃度過低，但是 6mg/L 的硼又過高，都抑制了培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的積累。 當(dāng)硼元素的濃度為 2mg/L 和 4mg/L 時， 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的含量在 鉬元素密度 為40μ g /L 和 80μ g /L 時 明顯高于 60μ g /L 的鉬 ；當(dāng)硼元素 的濃度為 6mg/L 時， 培養(yǎng)液中 β胡蘿卜素 含量在 鉬元素濃度 為 60μ g /L 時明顯大于 40μ g /L 和 80μ g /L 的鉬濃度 。 原因是在 硼 元素濃度為 6mg/L 時， 40μ g /L 的鉬濃度過低不利于氮和磷等元素的吸收利用， 而且缺鉬會使 葉綠體的結(jié)構(gòu)受損， 從而影響培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的含量。 而 80μ g /L 的鉬濃度 又過高 ， 造成銅含量不足大大的抑制了培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的積累。 從圖 2和表 2的整體來 看 ， 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g /L 的組合最適合 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的積累；硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 的組合最不適合鹽藻 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的積累。 其原因可能是在九種組合中硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g/L時，兩種元素之間相互促進的作用較大，而在硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 時兩元素間的抑制作用較強。 硼和鉬對 細胞 中 β 胡蘿卜素 積累的調(diào)控 計算出培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量后 ， 通過公式可得到單個 細胞 中 β 胡蘿卜素 含量 ,從而可以看出 不同濃度的硼和鉬對 鹽藻細胞 中 β 胡蘿卜素積累 的 調(diào)控 作用，結(jié)果見圖 3。 淮海工學(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 9 頁 共 19 頁 40 60 80Mo濃度:μg/L細胞中β胡蘿卜素含量(pg/cell)B 2mg/LB 4mg/LB 6mg/L 圖 3 硼和鉬對鹽藻 細胞 β 胡蘿卜素積累的影響 各組鹽 藻細胞 中 β 胡蘿卜 素含量 的數(shù)據(jù)經(jīng) SPSS 軟件單因素處理得 F= (8,18)=,說明實驗