【正文】 構(gòu)，并于 1950年成功地合成了 β胡蘿卜素。環(huán)境不良時 ,細胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)常為所含的血紅素所掩蓋。藻體前端有一紅色眼點 ,其繁殖主要靠細胞縱裂的無性生殖 ,有時也可產(chǎn)生孢囊 。 Mo。Mo 80μg/L、 B 2mg/L。 Mo 40μg/L、 B 6mg/L。單個細胞中β 胡蘿卜素和蛋白質(zhì)的含量則在 Mo 60μ g/L、 B 6mg/L時最 低，在 Mo 40μ g/L、 B 6mg/L 時較高 。Mo 80μ g/L、B 2mg/L。 Mo 40μ g/L、 B 6mg/L。Mo 40μ g/L、 B 4mg/L。 Mo 60μ g/L、 B 6mg/L。研究結(jié)果表明 ， 在給定的硼和鉬濃度范圍內(nèi) 兩種元素不同組合時，當硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g /L 最適合鹽藻細胞生長及 培養(yǎng)液中β 胡蘿卜素 和 蛋白質(zhì)的積累。Mo 40μg/L、 B 4mg/L。 Mo 60μg/L、 B 6mg/L。 B。藻體內(nèi)有一環(huán)狀的葉綠體 ,內(nèi)含一淀粉核 。因細胞內(nèi)常含有大量的胡蘿卜素而使其個體呈橘紅色 。 隨著人們對 β胡蘿卜素功效的認識日益深入，對有關(guān)鹽藻累積 β胡蘿卜素的研究也逐 步加深。而且人工合成的 β胡蘿卜素中， β胡蘿卜素順式異構(gòu)體的含量少，只占約20%左右。 因此 ,以生產(chǎn)胡蘿卜素為目的的鹽藻培養(yǎng)在國際上受到重視。 國外對這類藻的生物學(xué)和生態(tài)學(xué)做了大量研究 [2] , 國內(nèi)近年也在其地理分布 [3] 、細胞和分子鑒定 [4][5][6][7 ] 、基因工程 [8][9 ] 、活性物質(zhì)分析 [11][12] 、環(huán)境因子對其生長、營養(yǎng)物質(zhì)積累以及培養(yǎng)采收技術(shù)等方面 [13]開展了廣泛的研究。我國的海南島也有小規(guī)模試養(yǎng)。近年來隨著科研工作的深入 ,內(nèi)蒙古、海南等地的鹽藻培養(yǎng)工廠均已陸續(xù)投產(chǎn) ,標志著我國鹽藻培養(yǎng)與開發(fā)利用正在向國際先進水平發(fā)展。而果膠網(wǎng)絡(luò)是構(gòu)成完整細胞壁必不可少的組成成分之一。缺硼導(dǎo)致病害癥狀的出現(xiàn)因不同植物而異。硼的直接作用與花藥的花粉產(chǎn)生能力以及花粉粒生活力有密切關(guān)系。硼促進生殖器官的發(fā)育。生長素和硼之間有明顯的相互作用。因此一般對硼的需求也僅限于維管植物。硼能與酚類化合物絡(luò)合，克服酚類化合物對吲哚乙酸氧化酶的抑制作用。硼影響 RNA，尤其是尿嘧啶的合成?；春９W(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 3 頁 共 19 頁 硼不易從衰老組織向活躍生長組織移動，最先出現(xiàn)缺硼的是頂芽停止生長。 鉬的 研究概況 植物對鉬的需要量低于任何其它礦質(zhì)元素。根中也分離出這種物質(zhì)。 鉬是固氮酶的結(jié)構(gòu)組分，該酶參與豆科作物根瘤固氮菌、一些藻類、放線菌、自生固氮生物的固氮作用。固氮酶由鐵鉬蛋白和鐵蛋白組成。 缺鉬使固氮酶和硝酸還原酶活性降低 [18]，葉綠體的結(jié)構(gòu)受損，葉綠素含量減少 [19]，碳代謝異常，碳水化合物的合成受阻 [20]。 植物缺鉬癥有兩種類型，一種是葉片脈間失綠，甚至變黃，易出現(xiàn)斑點，新葉出現(xiàn)癥狀較遲。不同作物的癥狀有差別。 2 材料與方法 材料 基本 材料 鹽藻 (Dunaliella)由中國海洋大學(xué)提供，實驗前經(jīng)擴繁并培養(yǎng)至對數(shù)生長期備用。 7H2O 江蘇徐州試劑二廠 硫酸鋅 ZnSO4 7H2O： 3g／ L） 36ml，混合 母液 1 母液2。 淮海工學(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 5 頁 共 19 頁 （ 4） 取備用藻液用離心機離心 5 分鐘 （ 4000rmp） ,取適量藻泥加入混好的溶液中 使藻液吸光度 A450=（略小） ，然后把藻液分別裝在 27 個 100ml 的三角瓶中，貼上標簽，每瓶 50ml。 C瓶 Mo 40μ g/L、 B 6mg/L。 G瓶 Mo 80μ g/L、 B 2mg/L。 藻液的培養(yǎng) 把配制好的藻液放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度白天為 25℃ ，夜間 20℃ ， 光照與黑暗的比為 12h： 12h， 白天光照強度 3500Lx，每天早晚各搖瓶一次并轉(zhuǎn)換瓶體位置。鹽藻細胞密度單位采用 “ x107cellscell1） =P106/N P： β胡蘿卜素含量 (mg/L)； N： 細胞密度 (x107cellsmL1） =－ 單個細胞內(nèi)蛋白質(zhì)含量 （ pg 140 60 80Mo濃度:μg/L細胞密度(x107cells?mL1)B 2mg/LB 4mg/LB 6mg/L 圖 1 硼和鉬對鹽藻細胞生長的影響 各組藻液密度的 數(shù)據(jù)經(jīng) SPSS 軟件單因素處理得 F= (8,18)=,說明實驗結(jié)果差異極顯著 ， 每組數(shù)據(jù)經(jīng)兩兩比較后得到表 1。 當硼元素的濃度為 2mg/L 時，鉬元素密度 在 40μ g /L、 60μ g /L 和 80μ g /L 時，鹽藻細胞密度 差異不 大 ，這可能是實驗過程中的誤差造成的； 當硼元素的濃度為 4mg/L 時 , 鹽藻的細胞密度在鉬為 40μ g/L 和 80μ g/L 時明顯高于 60μ g/L； 當硼元素的濃度為 6mg/L時，鉬元素濃度 在 60μ g /L 時 鹽藻的細胞密度顯著高于 40μ g/L 和 80μ g/L 兩組 。 硼和鉬對 培養(yǎng)液中 β 胡蘿 卜素 積累的調(diào)控 培養(yǎng) 15d后， 鹽 藻經(jīng)離心萃取得到的提取液在波長 450nm處 檢測 其吸光度 然后 計算得到培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 含量 ,從而可以看出 不同濃度的硼和鉬對 培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素積累的調(diào)控作用，結(jié)果見圖 2。其原因是在 鉬的濃度為 40μ g/L 時， 6mg/L的 硼 濃度過高 造成的， 過多的硼會影響細胞對鈣、鐵等元素的吸收因而不利于 β 胡蘿卜素的積累 ； 當鉬的濃度為 60μ g/L 時，培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的含量在 硼元素密度 為 6mg/L 時，明顯高于 2mg/L和 4mg/L兩組，且這兩組的差異不顯著。 而 80μ g /L 的鉬濃度 又過高 ， 造成銅含量不足大大的抑制了培養(yǎng)液中 β 胡蘿卜素 的積累。 淮海工學(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 9 頁 共 19 頁 40 60 80Mo濃度:μg/L細胞中β胡蘿卜素含量(pg/cell)B 2mg/LB 4mg/LB 6mg/L 圖 3 硼和鉬對鹽藻 細胞 β 胡蘿卜素積累的影響 各組鹽 藻細胞 中 β 胡蘿卜 素含量 的數(shù)據(jù)經(jīng) SPSS 軟件單因素處理得 F= (8,18)=,說明實驗結(jié)果差異不顯著。 表 3 各組 培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 兩兩比較 淮海工學(xué)院二○○七屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 10 頁 共 19 頁 Tukey B 硼鉬對 培養(yǎng)液中蛋白質(zhì) 積累的影響 N Subset for alpha = .01 1 2 3 3 .87933 4 3 .93133 .93133 1 3 .94733 .94733 5 3 .96267 .96267 9 3 .98467 .98467 2 3 .98933 .98933 8 3 7 3 6 3 綜合 圖 4 和表 3 可以看出 ， 當鉬的濃度為 40μ g/L 時 ， 鹽藻 培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)的含量在硼元素密度 為 4mg/L 時 明顯高于 2mg/L 和 6mg/L 的硼濃度 。 當硼元素的濃度為 2mg/L 時，鉬元素密度 為 80μ g/L時 鹽藻培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)含量 高于40μ g /L 和 60μ g /L 的鉬濃度 ， 且鉬為 40μg /L和 60μ g /L 時兩組數(shù)據(jù)差異不大。 同時看兩種元素的作用時，從圖 4 中可以看出硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g /L 的組合 最適合培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)的積累； 當 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 的組合最不適合鹽藻培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)的積累。 細胞中蛋白質(zhì)含量各組之間差異不顯著，但是 從圖 5 中可以看出硼濃度為 2mg/L 、鉬濃度為 80μ g /L 的組合最適合鹽藻細胞中蛋白質(zhì)的積累；硼濃度為 4mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 的組合最不適合鹽藻細胞中蛋白質(zhì)的積累。而 80μ g /L 的鉬濃度又過高，造成銅含量不足大大的抑制了 鹽藻的生長及代謝物的積累 。 這樣的結(jié)果 可能是兩種元素在不同濃度時相互的作用不同， 在 所給定的硼、鉬濃度范圍內(nèi)，硼為 6mg/L 、鉬為 60μ g /L 的組合中兩元素之間相互 的 促進 作用較強 ，而硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 的組合中兩元素之間是相互 的 抑制 作用較強 ； 單個細胞中 β 胡蘿卜素的含量和培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)的含量則在 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g /L 的組合 時最低，在 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為40μ g /L 的組合 時較高，這可能僅是在硼、鉬過多或過低的逆境條件下鹽藻細胞的適應(yīng)性反應(yīng) [23]。這樣的結(jié)果可能是兩種元素在不同濃度時相互的作用不同， 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為60μ g /L 時兩元素之間相互促進 作用較強 ，硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 時兩元素之間相互 的 抑制 作用較強 ；單個細胞中 β 胡蘿卜素 的含量和培養(yǎng)液中蛋白質(zhì)的含量則在 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 60μ g /L 時最低， 在 硼濃度為 6mg/L 、鉬濃度為 40μ g /L 時 較高， 這可能僅是在硼、鉬過多或過 低的逆境條件下鹽藻細胞的適應(yīng)性反應(yīng)。實驗過程中郭老師嚴謹?shù)慕虒W(xué)思路和開放的教學(xué)方法讓我在實驗中能充分 發(fā)揮自己的能力， 并且 讓我知道如何去自己尋找資源獨立的完成每一個步驟 。 最后要感謝和我同時進行實驗的王小剛同 學(xué)和周志堅同學(xué)，他們在實驗過程中給了我很多的幫助，在此向你們表示感謝。 2020。cell1） 編號 A B C D E F G H I 硼酸 mg/L 2 4 6 2 4 6 2 4 175 鉬酸銨 μg/L 40 40 40 60 60 60 80 80 80 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 平均值 編號 A B C D E F G H I 硼酸 mg/L 2 4 6 2 4 6 2 4 175 鉬酸銨 μg/L 40 40 40 60 60 60 80 80 80 重復(fù) 1 重復(fù) 2 重復(fù) 3 平均值