蠟樣芽孢桿菌突變體關(guān)于分泌淀粉酶的研究畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2025-04-08 06:49 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 養(yǎng)基：蛋 白胨 ，酵母提取物 5g， g，蒸餾水 1000mL， 。一部分加入 2%（ w/w）瓊脂用來(lái)制備固體LB 培養(yǎng)基，另一部分制備液體 LB 培養(yǎng)基。滅菌條件： 121℃ 、 滅菌 20min。 淀粉培養(yǎng)基：可溶性淀粉 ,加熱至淀粉溶解，蛋白胨 ,牛肉膏 ,定容至 1000 mL， ，加入 2%（ w/w）瓊脂制備固體淀粉培養(yǎng)基。滅菌條件： 121℃ 、 滅菌 20min。 所用試劑 （ 1） 盧戈氏碘液 碘化鉀 碘片 ③蒸餾水 60mL （ 2） 紅霉素 （ 3） 卡那霉素 實(shí)驗(yàn)器材 生命科學(xué)學(xué)院 2021 屆本科畢業(yè)論文 11 小試管 EP 管 水浴箱 平皿 槍頭 搖床 滴管 牙簽 涂布棒 接種環(huán) 實(shí)驗(yàn)方法 菌株活化 配制 LB 液體培養(yǎng)基，滅菌三角瓶， 200 mL LB 液體培養(yǎng)基中接入取 70℃冰箱中保存的 09 20μ L，放入搖床， 30℃ 200rpm 下培養(yǎng) 24h。 菌株轉(zhuǎn)座 配制 LB固體培養(yǎng)基，倒平板。用無(wú)菌水稀釋菌懸液至 10106 濃 度。吸取 2 mL 106 濃度的菌懸液涂布到平板上，一定要涂布均勻。將培養(yǎng)箱升溫至 46℃，將倒好的平板放入培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)座 10 小時(shí)。 菌種轉(zhuǎn)接 配制 LB 固體培養(yǎng)基， 100 mL 培養(yǎng)基中加入卡那霉素 50μL，另外 100 mL 培養(yǎng)基中加入紅霉素 20μ L，分別搖勻，倒平板，分別標(biāo)明 Erm1 Kan15。用滅菌好的牙簽挑取單菌落，先在紅霉素的生命科學(xué)學(xué)院 2021 屆本科畢業(yè)論文 12 平板上接種，然后在卡那霉素的平板上的相應(yīng)位置接種。將接種好的平板放入 30℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 36 小時(shí)。將培養(yǎng)好的菌放入超凈臺(tái)，挑取在加紅霉素板上長(zhǎng)而在 加卡那霉素板上沒(méi)有長(zhǎng)的菌落，接種到新的板上。同樣是先點(diǎn)種紅霉素板，再點(diǎn)種卡那霉素板，放入 30℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 36 小時(shí)。 菌種保存 配制 LB 液體培養(yǎng)基，分裝到大試管中，每個(gè)試管 5mL。用滅好菌的槍頭挑取在加卡那霉素板上長(zhǎng)而在加紅霉素的板上不長(zhǎng)的菌株，接種到試管中，放入搖床， 30℃ 200rpm 下培養(yǎng) 24h。 EP 管中加 700μ L 50%的甘油，再吸取 700μ L 菌懸液加到管中，搖勻。編號(hào)，保存至 70℃冰箱。 菌種活化 配制 LB 液體培養(yǎng)基，滅過(guò)小試管，每個(gè)瓶中加入 2 mL LB液體培養(yǎng)基，接入 20μ L 保藏的菌株，放入搖床， 30℃ 200rpm 下培養(yǎng) 24h。 () 菌懸液的濃度的調(diào)節(jié) 生命科學(xué)學(xué)院 2021 屆本科畢業(yè)論文 13 配制 LB 液體培養(yǎng)基，滅過(guò)三角瓶，每個(gè)瓶中加入 100 mL LB 液體培養(yǎng)基，接入 1mL已活化的菌懸液，放入搖床， 30℃ 200rpm下培養(yǎng) 24h。 首先測(cè)量每個(gè)菌的 OD值，用滅過(guò)菌的 LB 培養(yǎng)基稀釋調(diào)節(jié)至各個(gè)菌的 OD 值至相同。配制淀粉固體培養(yǎng)基，倒平板。 菌株的初篩 配制淀粉固體培養(yǎng)基，倒平板。用槍頭吸取 2μ L 已調(diào)好相同濃度的菌懸液點(diǎn)種到平板上，一個(gè)平板點(diǎn)種 7 個(gè)菌，每個(gè)菌重復(fù)三次，將點(diǎn)種好的平板放入 30℃的培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24h。將培養(yǎng)好的平板中滴加盧戈氏碘液，染色。并量取不同菌落的透明圈的大小。 菌株的復(fù)篩 為保證目標(biāo)菌株的培養(yǎng)條件相同，將疑似菌株點(diǎn)種到同一個(gè)平板上，將點(diǎn)種好的平板放入 30℃的培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24h。將培養(yǎng)好的平板中滴加盧戈氏碘液，染色。并量取不同菌落的透明圈的大小。 3 結(jié)果現(xiàn)象與分析 菌落染色結(jié)果 生命科學(xué)學(xué)院 2021 屆本科畢業(yè)論文 14 轉(zhuǎn)座得到 100 個(gè)突 變體，編號(hào)從 1 至 100。 0 1100 號(hào)菌株培養(yǎng) 24h 后，對(duì)其進(jìn)行碘液染色。結(jié)果顯示， 09 和 3 3 594 號(hào)菌的透明圈出現(xiàn)較大差異（表 1 圖： 1 ）。菌株 09 在培養(yǎng) 24h 后形成的透明圈直徑大小為 ，菌株 3 3 5 94 形成的透明圈直徑大小分別為 、 、 、 。 表 1 09 菌株與目標(biāo)菌株透明圈直徑 菌號(hào) 透明圈直徑大?。?mm） 現(xiàn)象 重復(fù) 1重復(fù) 2重復(fù) 3平均值 09 透明圈直徑大小適中 36 透明圈直徑比對(duì)照菌大的多 38 透明圈直徑比對(duì)照菌大的多 56 透明圈直徑比對(duì)照菌小的多 94 透明圈直徑比對(duì)照菌小的多 圖 1 3 3 5 94 與 09 菌株透明圈直徑 生命科學(xué)學(xué)院 2021 屆本科畢業(yè)論文 15 結(jié)果分析 胞外淀粉酶產(chǎn)生 臘狀芽孢桿菌 09 是從一株健康小麥植株中分離獲得的有益芽孢桿菌，為小麥內(nèi)生細(xì)菌，產(chǎn)生的胞外淀粉酶能夠 將小麥體內(nèi)的淀粉分解為菌體能更好利用的物質(zhì)（如：麥芽糖）。調(diào)控 09 菌分泌胞外淀粉酶的基因位于菌體的結(jié)構(gòu)基因中。從實(shí)驗(yàn)的 3 38 號(hào)菌來(lái)看，它們的透明圈直徑都遠(yuǎn)大于對(duì)照組 09 號(hào)菌株的透明圈直徑。調(diào)控分泌胞外淀粉酶的基因遭到破壞之后可能導(dǎo)致產(chǎn)生的淀粉酶的量更大，但從 5 94 號(hào)菌來(lái)看，它們透明圈的直徑又小與對(duì)照組 09 的透明圈直徑。這說(shuō)明基因被插入的位置不同也可能導(dǎo)致胞外淀粉酶的合成能力或者是分泌能力下降，最終導(dǎo)致產(chǎn)生的淀粉酶的量較對(duì)照組小。 因此，在細(xì)菌分泌胞外淀粉酶的量和多個(gè)因
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