【文章內(nèi)容簡介】 Measure the degradation performance of strains, get a strain which has better degradation performance, Finally, physiological and biochemical preliminary identified as saprophytic staphylococcus. The optimal primary degradation conditions on mixed of the strain were as follows: optimal growth temperature is 33 ℃ , optimum pH , 2%amount of inoculation, 12h of best degradation time， CODcr degradation rate is 66%， the removal rate of AM is %. Key words: acrylamide, degrade, strains, screening, identification 3 1 前言 丙烯酰胺的應(yīng)用 丙烯酰胺 (Acrylamide，簡稱 AM)是一種無氣味的白色晶體，在工業(yè)上主要用于合成聚丙烯酰胺 (PAM)。 PAM 由于具有特殊的物理化學性質(zhì)，因而廣泛應(yīng)用于石油開采、污水處理、造紙、礦產(chǎn)、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)、紡織等行業(yè)，享有“百業(yè)助劑”之稱。丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性，可損傷周圍神經(jīng)系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，常人每天允許的最大暴露量不超過 [1]?；?醫(yī)藥行業(yè)的廢水中常含有丙烯酰胺，對環(huán)境造成污染，危害人類健康。利用微生物的生命活動對廢水中的污染物進行處理是目前最重要，最有發(fā)展前途，也是最常用的廢水處理方法 [2]。 丙烯酰胺菌的危害 急性毒性 ： 急性毒性試驗結(jié)果表明，大鼠、小鼠、豚鼠和兔的丙烯酰胺經(jīng)口 LD50為 150180 mg/kg，屬中等毒性物質(zhì)。 神經(jīng)毒性和生殖發(fā)育毒性 ： 大量的動物試驗研究表明丙烯酰胺主要引起神經(jīng)毒性；此外，為生殖、發(fā)育毒性。神經(jīng)毒性作用主要為周圍神經(jīng)退行性變化和腦中涉及學習、記憶和其他認知功能部位的退行性變；生殖毒性作用 表現(xiàn)為雄性大鼠精子數(shù)目和活力下降及形態(tài)改變和生育能力下降。大鼠 90 天喂養(yǎng)試驗，以神經(jīng)系統(tǒng)形態(tài)改變?yōu)榻K點，最大未觀察到有害作用的劑量（ NOAEL）為 mg/kg 天。大鼠生殖和發(fā)育毒性試驗的 NOAEL 為 2 mg/kg 天。 遺傳毒性 ： 丙烯酰胺在體內(nèi)和體外試驗均表現(xiàn)有致突變作用，可引起哺乳動物體細胞和生殖細胞的基因突變和染色體異常，如微核形成、姐妹染色單體交換、多倍體、非整倍體和其他有絲分裂異常等，顯性致死試驗陽性。并證明丙烯酰胺的代謝產(chǎn)物環(huán)氧丙酰胺是其主要致突變活性物質(zhì)。 致癌性 ： 動物試驗研究發(fā)現(xiàn)，丙烯 酰胺可致大鼠多種器官腫瘤，包括乳腺、甲狀腺、睪丸、腎上腺、中樞神經(jīng)、口腔、子宮、腦下垂體等。國際癌癥研究機構(gòu)（ IARC）1994 年對其致癌性進行了評價，將丙烯酰胺列為 2 類致癌物（ 2A）即人類可能致癌物，其主要依據(jù)為丙烯酰胺在動物和人體均可代謝轉(zhuǎn)化為其致癌活性代謝產(chǎn)物環(huán)氧丙酰胺。由于煎炸食品是我國居民主要的食物，為減少丙烯酰胺對健康的危害，我國應(yīng) 4 加強膳食中丙烯酰胺的監(jiān)測與控制，開展我國人群丙烯酰胺的暴露評估，并研究減少加工食品中丙烯酰胺形成的可能方法。對于廣大消費者，專家建議： 盡量避免過度烹飪食品（如 溫度過高或加熱時間太長），但應(yīng)保證做熟，以確保殺滅食品中的微生物，避免導(dǎo)致食源性疾病。 2 提倡平衡膳食，減少油炸和高脂肪食品的攝入，多吃水果和蔬菜。 建議食品生產(chǎn)加工企業(yè)，改進食品加工工藝和條件，研究減少食品中丙烯酰胺的可能途徑，探討優(yōu)化我國工業(yè)生產(chǎn)、家庭食品制作中食品配料、加工烹飪條件，探索降低乃至可能消除食品中丙烯酰胺的方法。 降解丙烯酰胺菌的研究意義 丙烯酰胺既是化學試劑也是一種重要的工業(yè)原料，可以用它來聚合一種新型有機高分子絮凝劑，用于可產(chǎn)生較少污泥的污水處理中，但在丙烯酰胺的共聚物產(chǎn) 品中，由于反應(yīng)率不是 100%,有少量的丙烯酰胺的單體（原料）殘存在產(chǎn)品中，在制造應(yīng)用丙烯酰胺聚合體的工業(yè)中，都會排出含有丙烯酰胺單體的廢水，丙烯酰胺單體難于分解，且具有毒性，為避免環(huán)境污染，就需要尋找去除丙烯酰胺單體的方法。目前，降解有機污染物的處理技術(shù)中，應(yīng)用具有特殊分解能力的微生物的投菌法具有廣闊的前景。本研究就是從從自然界中分離篩選降解丙烯酰胺的微生物菌種，并達到了試驗預(yù)期的目標。 2. 材料與儀器 菌種來源 從江西昌九農(nóng)科化工有限公司厭氧池廢水中篩選分離得到能夠降解丙烯酰胺單體的菌株 主要藥品和試劑 實驗中使用 的藥品和 試劑如表 1 表 1 使用試劑名稱，規(guī)格及廠家 Table 1 Chemical reagents consumed in experiment 5 名稱 規(guī)格 生產(chǎn)廠家 磷酸氫二鉀 分析純 成都市科龍化工試劑廠 濃氨水 分析純 天津市永大化學試劑開發(fā)中心 氯化銨 分析純 天津市永大化學試劑開發(fā)中心 硝酸銀 分析純 天津市福晨化學試劑廠 硫酸亞鐵 分析純 天津市福晨化學試劑廠 氯化鈉 分析純 天津市永大化學試劑開發(fā)中心 重鉻酸鉀 分析純 廣東西隴化工廠 硫酸亞鐵銨 分 析純 天津市永大化學試劑開發(fā)中心 鹽酸 分析純 南昌鑫光精細化工有限公司 濃硫酸 分析純 南昌鑫光精細化工有限公司 蛋白胨 生化試劑 北京奧博星技術(shù)有限責任公司 肌酸 生化試劑 上海藍季科技發(fā)展有限公司 甲基紅 生化試劑 上海藍季科技發(fā)展有限公司 瓊脂粉 生化試劑 上海藍季科技發(fā)展有限公司 牛肉膏 生化試劑 北京奧博星技術(shù)有限責任公司 營養(yǎng)瓊脂粉 生化試劑 上海藍季科技發(fā)展有限公司 氫氧化鈉 分析純 天津市恒興化學試劑制造有限公司 葡萄糖 分析純 成都市科龍化工試劑廠 無水乙醇 分析純 天津市福晨化學試劑廠 實驗儀器 實驗中所使用的儀器如表 2 表 2 使用儀器名稱，規(guī)格及廠家 Table 2 Equipments used in experiment 名稱 規(guī)格型號 生產(chǎn)廠家 隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱 GSM350BSⅡ 上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司 電熱恒溫鼓風干燥箱 PHG9240A 上海精密實驗設(shè)備有限公司 電子天平 MP502B 上海精科天平 分析天平 JA5003N 上海精密科學儀器有限公司 不銹鋼手提式滅菌鍋 DSX280A 上海申實醫(yī)療器械廠 全自動 高壓滅菌鍋 HVE50 日本 潔凈工作臺 SWCJIF 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司 6 可見分光光度計 WFJ7200 型 龍尼柯（上海）儀器有限公司 pH 酸度計 pHS25 型 上海雷磁儀器廠 恒溫培養(yǎng)搖床 HWY100B 上海智城分析儀器制造有限公司 冰箱 BCD216YH 海爾冰箱 培養(yǎng)基 選擇性培養(yǎng)基 表 3 培養(yǎng)基的配制 Table 3 Medium pound 葡萄糖 10g/l CaCl2 K2HPO4 FeCl3 g/l MgSO4 NaCl g/l 丙烯酰胺 PH 控制在 葡萄糖氧化發(fā)酵培養(yǎng)基 表 4 培養(yǎng)基的配制 Table 4 Medium pound 蛋白胨 10 g/l NaCl 5 g/l K2HPO4 g/l 葡萄糖 10 g/l 瓊脂 6 g/l 1%溴甲酚紫 3ml 蒸餾水 1000ml 用氫氧化鈉調(diào) ，分裝試管， 115℃蒸汽滅菌 20min。 7 甲基紅試驗和 VP 試驗培養(yǎng)基 表 5 培養(yǎng)基 的配制 Table 5 Medium pound 蛋白胨 5 g/l 葡萄糖 5 g/l NaCl 5 g/l 蒸餾水 1000ml 調(diào) ， 115℃滅菌 30min。 降解丙烯酰胺菌篩選流程 菌株的富集 實驗樣品采自江西昌九農(nóng)科化工有限公司厭氧池帶污泥廢水，將所采集的帶污泥廢水 1ml 接入 50ml 已滅菌的富集液體培養(yǎng)基中，在 30℃旋轉(zhuǎn)式搖床（轉(zhuǎn)速 150r/min ）培養(yǎng)