人教版生物選擇性必修三學(xué)案：122-微生物的選擇培養(yǎng)和計數(shù)-【含解析】(編輯修改稿)
2025-04-05 05:37 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 0的平板都可以計數(shù),并以它們的平均值作為統(tǒng)計結(jié)果【解析】選D。顯微鏡直接計數(shù)統(tǒng)計的結(jié)果一般是活細(xì)菌和死細(xì)菌的總和,計算結(jié)果比實際值偏大,A正確。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時,一個活菌會形成一個菌落,B正確。采用平板計數(shù)法獲得的菌落有可能是由多個細(xì)菌形成的,所以往往少于實際的活菌數(shù),C正確。統(tǒng)計菌落數(shù)目時,應(yīng)選擇同一稀釋倍數(shù)下涂布的菌落數(shù)量為30～300之間的平板進(jìn)行計數(shù),D錯誤。知識點二 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù):在以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基上,只有能產(chǎn)生脲酶的微生物才能分解尿素,而缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,會因缺乏氮源而無法生長繁殖。: :流程具體操作操作提示土壤取樣先鏟去表層土,取距地表 3～8 cm的土壤層,將樣品裝入紙袋中①適宜在富含有機(jī)質(zhì),酸堿度接近中性的潮濕土壤中取樣②取樣用的鐵鏟和取樣的紙袋使用前都需要滅菌制備培養(yǎng)基分別配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照組,用來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有選擇的作用樣品的稀釋和涂布①火焰旁稱取土壤樣本②將稀釋倍數(shù)為103～107的稀釋液涂布平板。每個稀釋度至少涂布三個平板作為重復(fù)組①注意無菌操作 ②對所用的平板、試管做好標(biāo)記③初次實驗對于稀釋的范圍沒有把握,可選擇一個較為寬泛范圍103～107倍的稀釋液培養(yǎng)、觀察和計數(shù)①將涂布好的平板和空白平板放在適宜溫度下的培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)②每隔24 h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目,比較牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等,并做好記錄③當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時,選取菌落數(shù)在30～300 的平板進(jìn)行計數(shù)①空白平板作為對照,檢測培養(yǎng)基制備是否合格②觀察時還要記錄不同菌落的形狀、大小、顏色等③在同一稀釋度下,至少對3個平板進(jìn)行計數(shù),然后求出平均值,并根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中活菌的數(shù)目:內(nèi) 容現(xiàn) 象結(jié) 論有無雜菌污染的判斷對照的培養(yǎng)皿中無菌落生長未被雜菌污染培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高被雜菌污染菌落形態(tài)多樣,菌落數(shù)偏高培養(yǎng)基中混入其他雜菌選擇培養(yǎng)基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用樣品的稀釋操作得到3個或3個以上菌落數(shù)目在30～300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取同一種土樣,統(tǒng)計結(jié)果應(yīng)接近:分解尿素的細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解為NH3,使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng),pH升高。在選擇培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑,培養(yǎng)某種細(xì)菌,若指示劑變紅,可初步鑒定該種細(xì)菌能夠分解尿素。 【特別提醒】實驗中的兩種“對照組”與“重復(fù)組”(1)兩種對照組作用比較。①判斷培養(yǎng)基中“是否有雜菌污染”,需將未接種的培養(yǎng)基(空白對照組)同時進(jìn)行培養(yǎng)。②判斷選擇培養(yǎng)基“是否具有篩選作用”,需設(shè)置完全培養(yǎng)基(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)進(jìn)行接種培養(yǎng),觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目,進(jìn)行對比得出結(jié)論。(2)重復(fù)組的設(shè)置及作用:為排除偶然因素對實驗結(jié)果的干擾,在每一稀釋度下宜設(shè)置3個平板作為重復(fù)組,選擇菌落數(shù)均在30～300且數(shù)目相差不大的三個平板,用“平均值”代入計數(shù)公式計算活菌數(shù)。 巴氏芽孢桿菌是一類具有較高脲酶活性,能夠分解尿素的細(xì)菌,廣泛分布在土壤、堆肥及污水中。這種細(xì)菌能夠?qū)⒌手械哪蛩胤纸獬砂睉B(tài)氮被植物吸收,對土壤的肥力有著重要作用。研究人員擬從土壤樣品中分離該類細(xì)菌,如圖所示為操作流程,①～⑤表示操作步驟。請回答下列問題: (1)制備培養(yǎng)基時,按照培養(yǎng)基配方準(zhǔn)確稱量各組分,將其溶解、定容后,調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的______________,及時對培養(yǎng)基進(jìn)行分裝,并進(jìn)行______________滅菌。(2)步驟②富集培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基按用途來分應(yīng)為______________培養(yǎng)基,步驟②的主要目的是___________________________________________。(3)在步驟④的培養(yǎng)基中加入______________指示劑,根據(jù)培養(yǎng)基是否變紅來鑒定是否為尿素分解菌。若用該方法培養(yǎng)設(shè)置了3個培養(yǎng)皿,菌落數(shù)分別為163個、158個、159個,則可以推測富集培養(yǎng)后的菌液中每毫升含活菌數(shù)為______________個,運用這種方法統(tǒng)計的結(jié)果往往較實際值______________。(4)要進(jìn)一步分離純化巴氏芽孢桿菌采用步驟⑤______________法進(jìn)行操作,在該操作過程中接種工具至少要灼燒______________次?！窘忸}導(dǎo)引】解答本題的兩個關(guān)鍵知識點:(1)培養(yǎng)基滅菌的方法:常用高壓蒸汽滅菌。(2)培養(yǎng)基種類的判斷:富集培養(yǎng)目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度,所使用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。【解析】(1)制備培養(yǎng)基時,操作過程為計算、稱量、溶化、配制培養(yǎng)液、調(diào)節(jié)pH、分裝、包扎、滅菌、倒平板,培養(yǎng)基需要進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。(2)圖中步驟②富集培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基,目的是增加巴氏芽孢桿菌的濃度(數(shù)量)。(3)鑒別尿素分解菌時需要使用酚紅指示劑,根據(jù)培養(yǎng)基是否變紅來鑒定是否為尿素分解菌。富集培養(yǎng)后的菌液
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