20xx年高中生物12基因工程的基本操作程序難點剖析新人教版選修3(編輯修改稿)
2025-03-15 03:40 本頁面
【文章內容簡介】 導入受體細胞目的基因的片段與運載體在生物體外連接形成重組DNA分子后，下一步是將重組DNA分子引入受體細胞中進行擴增。目的基因進入受體細胞內，并且在受體細胞內維持穩(wěn)定和表達的過程，稱為轉化?；蚬こ讨谐Ｓ玫氖荏w細胞有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農桿菌、酵母菌和動植物細胞等。用人工的方法使體外重組的DNA分子轉移到受體細胞，主要是借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。：農桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法。知識拓展 農桿菌可分為根瘤農桿菌和發(fā)根農桿菌，在植物基因工程中以根瘤農桿菌的Ti質粒介導的遺傳轉化最多。根瘤農桿菌廣泛存在于雙子葉植物中。據不完全統(tǒng)計，約有93屬643種雙子葉植物對根瘤農桿菌敏感。裸子植物對該菌也敏感。當這些植物被該菌侵染后會誘發(fā)腫瘤。近年來，也有報道該菌對單子葉植物也有侵染能力。根瘤農桿菌侵染植物是一個非常復雜的過程。根瘤農桿菌具有趨化性，即植物的受傷組織會產生一些糖類和酚類物質吸引根瘤農桿菌向受傷組織集中。研究證明，主要酚類誘導物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，這些物質主要在雙子葉植物細胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中，這也是單子葉植物不易被根瘤農桿菌侵染的原因。近年來還發(fā)現(xiàn)一些中性糖，如L阿拉伯糖、D木糖等也有誘導作用。酚類物質和糖類物質既可以作為根瘤農桿菌的趨化物，又可以作為農桿菌中Ti質粒上Vir區(qū)（毒性區(qū)）基因的誘導物，使Vir區(qū)基因活化，導致TDNA的加工和轉移，從而侵染植物細胞。需要注意的是農桿菌中不同的菌株，侵染能力有差別，在基因工程中需要加以選擇使用。利用農桿菌侵染單子葉植物進行遺傳轉化時，是需要加上述酚類物質的，同時單子葉植物種類不同，農桿菌侵染進行遺傳轉化的效果也有很大差異。：顯微注射法。：如果運載體是質粒，受體細胞是細菌，一般是將細菌用氯化鈣處理，以增大細菌細胞壁的通透性，使含有目的基因的重組質粒進入受體細胞。目的基因導入受體細胞后，就可以隨著受體細胞的繁殖而復制，由于細菌繁殖的速度非?？?，在很短的時間內就能夠獲得大量的目的基因。四、目的基因的檢測與鑒定以上步驟完成以后，在全部受體細胞中，真正能夠攝入重組DNA 分子的受體細胞是很少的。因此，必須通過一定的手段對受體細胞中是否導入了目的基因進行檢測。要點提示 大腸桿菌的某種質粒具有青霉素抗性基因，當這種質粒與外源DNA組合在一起形成重組質粒，并被轉入受體細胞后，就可以根據受體細胞是否具有青霉素抗性來判斷受體細胞是否獲得了目的基因。，這是目的基因能否在真核生物中穩(wěn)定遺傳的關鍵。，這是檢測目的基因是否發(fā)揮功能的第一步。重組的DNA分子進入受體細胞后，受體細胞必須表現(xiàn)出特定的性狀，才能說明目的基因完成了表達過程。例如，科學家最
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