【正文】 山羊 褪黑激素受體 1A 基因 HinfⅠ 酶切多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 。季從亮等 （ 20xx） 和 Chu 等 （ 20xx） 用 M n lⅠ和 R saⅠ對常年發(fā)情的小尾寒羊和湖羊以及季節(jié)性發(fā)情的多賽特羊和薩?？搜蚬?146只綿羊 M TNR1A 基因外顯子 2的 824 bp 擴增產(chǎn)物進行 PCRRFLP 多態(tài)性分析 ， 發(fā)現(xiàn) M n lⅠ在 4 個綿羊品種中都存在 303 bp 和 236 bp 多態(tài)片段 ， R saⅠ 都 存在 290 bp 和 267 bp 多態(tài)片段。高壓滅菌，室溫保存 ； 4) TE緩沖液 ： 100mM Tris待稍冷后，加入 5ul 飽和的溴乙錠，輕晃 混勻，然后輕輕倒入模子。 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 14 圖 1 PCR 擴增結(jié)果 注： M， MarherⅠ 100bp DNA Ladder； 3為波爾山羊 DNA 擴增產(chǎn)物； 6 為 馬頭 山羊 DNA 擴增產(chǎn)物 Fig. 1 Agarose gel electrophoresis of PCR product. M， 13， 46: 100bp DNA Ladder， PCR product of ?goat， PCR product of ?goat 酶切結(jié)果 利用限制性內(nèi)切酶 HinfⅠ 對 PCR 擴增產(chǎn)物進行酶切 ， 使用 8%的聚丙烯酰胺凝膠（ 29： 1）電泳檢測酶切產(chǎn)物。standard error 加性效應(yīng) additive effects 顯性效應(yīng) dominant effects AA 177。楊老師淵博的學(xué)識和嚴謹?shù)闹螌W(xué)態(tài)度潛移默化 的影響著我，使我受益匪淺。standard error 加性效應(yīng) additive effec 顯性效應(yīng) dominant effects 波爾山羊 65 AA 177。 非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測 不同的實 驗需要優(yōu)化聚丙烯酞胺凝膠的交聯(lián)度和濃度，才能達到最好的實驗效果 ，本實驗采取一下方法： 1. 在 小燒杯中加入 雙蒸水， 30%丙烯酞胺 （ 29:1） ， 7ml 的 5 TBE混勻 ； 2. 清洗制膠用玻璃板，烘干后用透明膠封好底邊和側(cè)邊，固定在制膠用的有機玻璃板上 ； 3. 向小燒杯中加入 245ul 的 10%AP， 13ul TEMED 混勻后迅速灌膠 ； 4. 當(dāng)膠灌至離玻璃板上邊緣 時停止灌膠，插入梳子，注意梳齒下不要有氣泡，室溫聚合 1小時 ； 5. 凝膠聚合好后，拔出梳子，注射器吸出梳齒孔中未聚合的液體 ； 6. 取下玻璃板，撕下膠 線 ，固定在電泳槽上，倒入電泳緩沖液 1 TBE； 7. 在 PCR 產(chǎn)物中加入 1/6 體積上樣緩沖液，用微量進樣器取 5u1 酶切樣 點樣，同時點分子量標記物 PBR322/Mspl； 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 13 8. 上樣完畢后， 打 開電泳議以 80V 電泳 20min，再調(diào)到 120V 電泳 4～ 5h。放入梳子。高壓滅菌，室溫保存 ； 3) 10%SDS： 稱取 50g SDS加熱溶于 400ml雙蒸水中，定容至 500ml。 目前在哺乳動物中還沒有發(fā)現(xiàn) MTNR1C 受體，而具有明顯季節(jié)性繁殖特征的動物僅在垂體結(jié)節(jié)部發(fā)現(xiàn)MTNR1A受體，提示垂體結(jié)節(jié)部可能是褪黑激素繁殖效應(yīng)的作用位點。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 1 本科畢業(yè)論文 題 目： 山羊褪黑激素受體 1A 基因 HinfⅠ酶切 多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 姓 名： 賈 征 學(xué) 號 040801030 專 業(yè)： 動 物 科 學(xué) 指導(dǎo)教師： 楊 利 國 職 稱 教 授 中國 3．褪黑激素受體分子標記在其它動物中的研究進展 目前國內(nèi)外對綿羊 M TNR1A 基因已經(jīng)有所研究已經(jīng)很多了。高壓滅菌，室溫保存 ； 4) 抗凝劑（ ） ： 量取 200ml EDTA加入雙蒸水定容至 500ml。將模放于水平臺上。 1. 拆下 電泳裝置，剝下聚丙烯酰胺凝膠，放到一個塑料盤內(nèi)，用雙蒸水沖漂洗2次； 2. 加入 500ml 10％乙醇固定液，在搖床上固定 8～ 10 min，棄去反應(yīng)液； 3. 加入 500ml 1％ HNO3 氧化，在搖床上輕搖 8～ 10 min，棄去反應(yīng)液，用雙蒸水漂洗 2 次； 4. 倒入 500ml ％ AgNO3 銀染液，染色 15～ 30 min，棄去反應(yīng)液，用雙蒸水漂洗 2次； 5. 加入 500ml 3％ Na2CO3顯色液，手搖顯色至出現(xiàn)清晰的銀染帶，迅速棄去反應(yīng)液； 6. 用 500ml 3％ HAC 停止顯色； 7. 將已經(jīng)染好的聚丙烯酰胺凝膠置于透射白光板 上，觀察酶切反應(yīng)結(jié)果、記錄并拍照。 GG 177。在實驗的過程中，滑國華師姐、于俊娜師姐和楊菲菲師姐在實驗過程中教給我很多知識和技能，給了我很好的指導(dǎo)和很大的幫助，在此表示感謝。標準誤 Least squares means177。 基因效應(yīng)分析： 加性效應(yīng) =（ GGAA） /2 顯性效應(yīng) =AG（ AA+GG） /2 2 結(jié)果與分析 PCR 擴增結(jié)果 擴增 波爾山 羊和馬頭山羊 基因組，產(chǎn)物用 %瓊脂糖凝膠電泳檢測，得到的片段與預(yù)期片斷大小一致（ 197bp），條帶清晰（圖 1），特異性高，滿足后續(xù)分析要求。混勻，加熱，至瓊脂糖徹底溶解。3H 2O溶于 400ml雙蒸水中，用 HAc調(diào)至 pH=，加水定容華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計） 9 至 500ml。 Pelletier 等 （ 20xx） 用M n lⅠ 限制性內(nèi)切酶消化 2組發(fā)情行為有明顯差異 （ 常年發(fā)情和季節(jié)性發(fā)情 ）的 Merinos d′ Arles 母綿羊以及季節(jié)性發(fā)情明顯的 Ile2de2France 母綿羊 M TNR1A基因外顯子 2的 824 bp 擴增產(chǎn)物 ， 發(fā)現(xiàn)存在 303 bp 和 236 bp 多態(tài)片段。 方法 ................................................................... 9 DNA 的提取 ............................................... 9 .................................................. 10 擴增及其電泳檢測 ............................................... 10 . 限制性內(nèi)切酶消化擴增產(chǎn)物以及電泳檢測 ............................ 12 .......................................................... 13 2 結(jié)果與分析 ............................................................... 13 PCR 擴增結(jié)果 ........................................................... 13 酶切結(jié)果 ............................................................... 14 褪黑激素基因頻率和基因型頻率分析結(jié)果 ................................... 15 MTNR1A 基因型與波爾山羊頭胎產(chǎn)羔數(shù)性