【正文】 上。高壓滅菌，室溫保存 ； 4) 抗凝劑（ ） ： 量取 200ml EDTA加入雙蒸水定容至 500ml。 3．褪黑激素受體分子標記在其它動物中的研究進展 目前國內(nèi)外對綿羊 M TNR1A 基因已經(jīng)有所研究已經(jīng)很多了。華中農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文（或設計） 1 本科畢業(yè)論文 題 目： 山羊褪黑激素受體 1A 基因 HinfⅠ酶切 多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 姓 名： 學 號 專 業(yè)： 動 物 科 學 指導教師： 職 稱 華中農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文（或設計） 2 分類號 密級 華中農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文 山羊褪黑激素受體 1A 基因 HinfⅠ酶切多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 HinfⅠ RFLP of Melatonin receptor 1 A(MTNR1A) gene and the association with the litter size traits in goat 華中農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文（或設計） 3 目 錄 摘 要 ........................................................................ 4 ABSTRACT ..................................................................... 5 前 言 ........................................................................ 6 ................................................................. 7 材料 ................................................................... 7 試驗動物 ........................................................... 7 實驗材料 ........................................................... 7 主要試劑的來源 ...................................................... 7 主要儀器設備 ........................................................ 8 主要試劑的配置 ...................................................... 8 主要分子生物學軟件 ................................. 錯誤 !未定義書簽。 Messer 等（ 1997） 和 Notter 等 （ 20xx） 用 M n lⅠ 和 R saⅠ 酶分別對白面雜種羊、薩福克羊、特克塞爾羊、柯泊華斯羊和合成系綿羊群體 M TNR1A 基因外顯子 2 的 824 bp擴增產(chǎn)物進行消化 ， 發(fā)現(xiàn) M n lⅠ在 5 個綿羊群體中都存在 286 bp 和 236 bp多態(tài)片段 ， R saⅠ都存在 295 bp 和 290 bp 多態(tài)片段。 用于基因組 DNA提取的溶液的配制 1) 蛋白酶 K： 稱取 200mg蛋白酶 K溶于 10ml雙蒸水，以 1ml分裝， 20℃ 冷凍保存 ； 2) 氯仿 /異戊醇（ 24:1） ： 量取 480ml氯仿，加入 20ml異戊醇，混勻 ； 3) 3M NaAc： 稱取 NaAc取一燒杯，放入： 瓊脂糖 g； 1T AE 50 ml。 基因頻率與基因型頻率使用軟件 進行統(tǒng)計分析，不同基因型對產(chǎn)羔數(shù)的最小二乘均值分析使用 SAS（ 版） GLM（ General Linear Model） 軟件包進行，模型如下： Yijkl=μ +Gi+Pi+eijk Yijkl為產(chǎn)羔數(shù)，μ為群體均值， Gi為基因型效應， Pi為胎次效應， eijk為隨機效應。 基因型 Geype 最小二乘均值177。 同時還感謝實驗室的各位師兄師姐給我耐心的指導和講解，感謝與我一起做實驗的畢業(yè)生同學的關(guān)心和鼓勵！ 。standard error 加性效應 additive effects 顯性效應 dominant effects AA 177。 華中農(nóng)業(yè)大學本科畢業(yè)論文（或設計） 14 圖 1 PCR 擴增結(jié)果 注： M， MarherⅠ 100bp DNA Ladder； 3為波爾山羊 DNA 擴增產(chǎn)物； 6 為 馬頭 山羊 DNA 擴增產(chǎn)物 Fig. 1 Agarose gel electrophoresis of PCR product. M， 13， 46: 100bp DNA Ladder， PCR product of ?goat， PCR product of ?goat 酶切結(jié)果 利用限制性內(nèi)切酶 HinfⅠ 對 PCR 擴增產(chǎn)物進行酶切 ， 使用 8%的聚丙烯酰胺凝膠（ 29： 1）電泳檢測酶切產(chǎn)物。待稍冷后，加入 5ul 飽和的溴乙錠，輕晃混勻，然后輕輕倒入模子。 高壓滅菌，室溫保存 ； 4) TE緩沖液 ： 100mM Tris季從亮等 （ 20xx） 和 Chu 等 （ 20xx） 用 M n lⅠ和 R saⅠ對常年發(fā)情的小尾寒羊和湖羊以及季節(jié)性發(fā)情的多賽特羊和薩福克羊共 146只綿羊 M TNR1A 基因外顯子 2的 824 bp 擴增產(chǎn)物進行 PCRRFLP 多態(tài)性分析 ， 發(fā)現(xiàn) M n lⅠ在 4 個綿羊品種中都存在 303 bp 和 236 bp 多態(tài)片段 ， R saⅠ 都 存在 290 bp 和 267 bp 多態(tài)片段。 采用 限制性片段長度多態(tài)性 （ Restriction Fragment Length polymorphism， PCRRFLP） 方法，檢測了 65 只 波爾山羊 和 51 馬頭山羊 褪黑激素受體 1A 基因 HinfⅠ 酶切多態(tài)性及其與產(chǎn)羔數(shù)性狀的關(guān)聯(lián)分析 。根據(jù)其分子生物學方法又可分為MTNR1A、 MTNR1B、 MTNR1C 三種亞型 （ 張凱 等， 20xx） 。2H 2O溶于 800ml雙蒸水中，加入NaOH（約 20g）調(diào)至 pH=，定容到 1000ml。 瓊脂糖凝膠電泳方法 （ 1） 灌膠 將透明膠帶粘于灌膠模槽的兩端，制成灌膠模。 . 限制性內(nèi)切酶消化擴增產(chǎn)物以及電泳檢測 酶切反應體系 （表 4） 表 4 酶切反應體系 Table 4 PCR and the amount of the ponents 反應體系 response system 反應體積 V（μ l） response volume（μ l） 滅菌蒸餾水 10 Buffer 1 HinfⅠ限制性內(nèi)切酶 PCR 產(chǎn)物 4 Total 10 將上述酶切體系置 37℃水浴鍋或恒溫箱中酶切過夜。標準誤 Least squares means177。28（ 2） 7779 [11] 焦傳珍．褪黑激素及其生理功能研究進展．生物學教學 ， 20xx， 30（ 2） 23