【正文】 疫磁珠充分接觸。n 重復(fù)上述步驟 2. 4～ 2. 5 n 洗滌共 3次，動作要輕柔。本菌嗜鹽畏酸，在無鹽培養(yǎng)基上，不能生長，3%～ 6%食鹽水繁殖迅速，每 8～ 9分鐘為 1周期，低于 %或高于 8%鹽水中停止生長。置 36 ℃ 177。副溶血性弧菌在 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應(yīng)為底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，有動力。實(shí)驗(yàn)室需具備的條件n 冰箱n 恒溫培養(yǎng)箱： 25℃ 、 36℃ 、 42℃n 恒溫振蕩培養(yǎng)箱n 微需氧培養(yǎng)裝置n 顯微鏡：有相差功能n 高速離心機(jī)n 均質(zhì)器n 電子天平空腸彎曲菌檢驗(yàn)程序24 h～ 48 h圖 1 空腸彎曲菌檢驗(yàn)程序樣品處理預(yù)增菌 接種 Skirrow 與 mCCDA瓊脂平板增 菌鏡 檢 動力試驗(yàn) 微需氧 25℃ 177。預(yù)增菌n 起始培養(yǎng)溫度要低一些n 對于一些細(xì)菌細(xì)胞受到損傷的n冷凍n長期貯存 (≥10天 )n 36177。1℃ ， 48 h177。背景n 為了保證全國食源性致病菌監(jiān)測檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性，提高監(jiān)測工作質(zhì)量，設(shè)計(jì)此次質(zhì)量控制考核。質(zhì)控結(jié)果報(bào)告n 1. 32家省級檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)匯總省內(nèi)質(zhì)控結(jié)果，于 2023年 7月 15日前（以郵戳為準(zhǔn)）報(bào)中國 CDC營養(yǎng)食品所。質(zhì)控樣品檢驗(yàn)n 1. 檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)收到質(zhì)控樣品后應(yīng)檢查包裝的完整性，檢驗(yàn)前應(yīng)放置于 2 ℃5 ℃ 保存。n 上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國家和組織的標(biāo)準(zhǔn)采用?！?， 24 h177。1℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察菌落生長情況48h增菌液與 1:50稀釋液劃線接種 mCCDA和Skirrow平板或 CFA顯色平板48h增菌液劃線接種 mCCDA和Skirrow平板或 CFA顯色平板轉(zhuǎn)種挑取 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板上的可疑菌落哥倫比亞血平板或 Skirrow無抗生素血平板樣品處理培養(yǎng)條件n 培養(yǎng)溫度 42177。無芽孢、無莢膜，有鞭毛，運(yùn)動活潑，似飛箭樣、穿梭樣翻滾運(yùn)動。n 涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài)。1 ℃ 培養(yǎng) 8 h～ 18 h。副溶血弧菌檢驗(yàn)概況副溶血性弧菌于 1950年從日本一次暴發(fā)性食物中毒中分離發(fā)現(xiàn)。在吸取上清液時(shí)，很難做到不丟失磁珠，在這種情況下，可保留 50～ 100μL上清液于Eppendorff管中。 加樣后立即混勻。n 血清學(xué)試驗(yàn)n 在營養(yǎng)瓊脂平板上挑取分純的菌落，用O157:H7標(biāo)準(zhǔn)血清或 O157乳膠凝集試劑作玻片凝集試驗(yàn)。2 .分離n 取增菌后或篩選試驗(yàn)陽性的 mEC+n肉湯，分別劃線或適當(dāng)稀釋后取 CTSMAC平板和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板上，于 36177。血清學(xué)分型的注意事項(xiàng)血清學(xué)分型的注意事項(xiàng)n 標(biāo)準(zhǔn)菌株和實(shí)驗(yàn)室保存的菌株做血清型鑒定的時(shí)候，往往比較順利，新分離的菌株做血清分型往往不順利。腸桿菌科常見細(xì)菌簡化診斷表腸桿菌科常見細(xì)菌簡化診斷表序號 硫化氫 靛基質(zhì) 賴氨酸 氰化鉀 尿素酶 判 定 結(jié) 果 () A1 + + 沙門氏菌屬 A2 + + + 沙門氏菌屬，緩慢愛德華氏菌A3 + + +97 94 弗氏檸檬酸菌群，奇異變形菌A4 + + + + 普通變形菌B1 +/ 大腸埃希氏菌，沙門氏菌屬， 志賀氏菌屬B2 + +/ 大腸埃希氏菌，志賀氏菌屬B3 +/ + /+ 克雷伯氏菌族 (注 )B4 + +/ + 普羅菲登斯菌屬，摩根氏菌屬 注：包括克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬、沙雷氏菌屬，另做補(bǔ)充試驗(yàn)鑒定。沙門氏菌的分類學(xué)地位n 歸于腸桿菌科沙門氏菌屬n 下設(shè) 6個(gè)亞屬： I、 II、 IV、 V、 VI及 III（原亞利桑那菌屬）n 常見的種：雞沙門氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、傷寒沙門氏菌n 形態(tài)與染色：革蘭氏染色陰性，無莢膜，無芽胞，多數(shù)有鞭毛，有動力，短小桿菌。即樣品勻液的 pH值應(yīng)在 ～， pH值過低或過高時(shí)分別用 1M NaOH或 1M HCl予以調(diào)節(jié)。確定鑒定n 生化試驗(yàn)：取純培養(yǎng)物分別接種含 3％氯化鈉的賴氨酸培養(yǎng)基， 36 ℃ 177。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。 1 ℃ ， 12 h～ 16 h樣品 25 g（ mL） +225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水3％氯化鈉堿性蛋白胨水 3管 3個(gè)合適的稀釋度如果進(jìn)行定性檢測，則不需要進(jìn)行此步驟挑取可疑菌落，接種于 3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂生化試驗(yàn)或選用 API 20E生化鑒定試劑盒結(jié)果報(bào)告改良纖維二糖 多粘菌素 B多粘菌素 E瓊脂 或 纖維二糖 多粘菌素 E瓊脂 劃線分離篩選試驗(yàn)氧化酶試驗(yàn)，革蘭氏染色，3％氯化鈉三糖鐵瓊脂，嗜鹽性試驗(yàn)樣品制備n 非冷凍樣品采集后應(yīng)立即置 7℃ ～ 10℃ 冰箱保存，盡可能及早檢驗(yàn)；冷凍樣品應(yīng)在 45 ℃ 以下不超過 15 min或在 2℃ ～ 5℃ 不超過18 h解凍；如果樣品需要冷凍貯存，應(yīng)在樣品中加等量緩沖甘油氯化鈉溶液（液體樣品應(yīng)加雙料），推薦貯存溫度為 70 ℃ 以下。如無均質(zhì)器，則將樣品放入無菌乳缽中磨碎，然后放在 500 mL的滅菌容器內(nèi)，加 225 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。n 涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài)。報(bào)告n 當(dāng)檢出的可疑菌落生化性狀符合表 1要求時(shí)，報(bào)告 25 g（ mL）樣品中檢出創(chuàng)傷弧菌。 1?C培養(yǎng) 24h?2h。n 自從 PCR試驗(yàn)技術(shù)推廣應(yīng)用以后，認(rèn)為此項(xiàng)技術(shù)能夠在 該儀器對細(xì)菌作出的分類鑒定應(yīng)該是按照權(quán)威的細(xì)菌生化特性表作出的。n 沙門氏菌抗原的研究已有近一百年的歷史，實(shí)驗(yàn)者應(yīng)當(dāng)熟悉抗原的相關(guān)理論。 n 增菌后的肉湯在取樣前，應(yīng)輕微搖晃混勻。n 進(jìn)行生化試驗(yàn)時(shí)應(yīng)是用新鮮培養(yǎng)物（ 24h）。 注意室內(nèi)溫度 ，保證結(jié)合時(shí)間。 吸取上清液至磁珠聚集物處時(shí)，應(yīng)放慢速度。對酸敏感，在 2%醋酸中或 50%的食醋中 1分鐘即可死亡。1 ℃ 恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng) 8 h～ 18 h。n 嗜鹽性試驗(yàn)：挑取純培養(yǎng)的單個(gè)可疑菌落，分別接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水， 36℃ 177。 1 ℃生長試驗(yàn)有氧 42 ℃ 177。1℃n 4～ 5h分離 mCCDAn 基礎(chǔ)培養(yǎng)基n 營養(yǎng)成分；n 中和代謝產(chǎn)物，維持生長環(huán)境的成分；n 木炭n 抗生素n 頭孢哌酮鈉 32mg 3代頭孢，廣泛抗菌n 兩性霉素 B 10mg 抑制霉菌、酵母菌n 利福平 10mg 廣譜抗菌藥 主要用于抗結(jié)核分離 Skirrown 基礎(chǔ)培養(yǎng)基n FBP溶液n 丙酮酸鈉n 焦亞硫酸鈉n 硫酸鈉鐵n 抗生素溶液n 頭孢哌酮n 兩性霉素Ｂn 利福平n 無菌脫纖維綿羊血分離培養(yǎng)基 CFA瓊脂n 為法國梅里埃產(chǎn)品n 僅有成品平板出售n 購買周期太長（下訂單現(xiàn)做，然后發(fā)貨，一般要 2個(gè)月）n 保質(zhì)期短，一般收到平板就快過期了。4h阪崎腸桿菌檢驗(yàn)程序前增菌和增菌mLSTVm，即在大腸菌群增菌肉湯 LST中另加入適量的NaCl和 Vm 。n 本次質(zhì)控范圍為承擔(dān) 2023年全國食源性致病菌監(jiān)測工作任務(wù)的全國 31個(gè)省、直轄市、自治區(qū)以及新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)的檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)。質(zhì)控結(jié)果報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括細(xì)菌檢驗(yàn)結(jié)果（附表一）和檢驗(yàn)記錄及詳細(xì)數(shù)據(jù)等。n 菌株運(yùn)送應(yīng)按照國際民航組織《危險(xiǎn)物品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》規(guī)定的生物材料等級 B即 UN3373的要求執(zhí)行。商業(yè)生化鑒定系統(tǒng)的應(yīng)用n 推薦使用的 ES生化鑒定方法有很多，主要有 API 20E， ID 32E， Biolog GN2 MicroPlate， VITEK GNI+等。2h挑取 藍(lán)綠色菌落1mL + mLSTVm 10mL44℃ 177。1℃ 、 24 h微需氧 42 ℃ 177。空腸彎曲菌檢驗(yàn)空腸彎曲菌分類地位螺菌科彎