【正文】 +/ 大腸埃希氏菌，志賀氏菌屬B3 +/ + /+ 克雷伯氏菌族 (注 )B4 + +/ + 普羅菲登斯菌屬，摩根氏菌屬 注：包括克雷伯氏菌屬、腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬、沙雷氏菌屬，另做補充試驗鑒定。n 不過，由于生產工藝和試驗條件的限制，有幾項重要的生化試驗項目未能列入微生物分析儀中。血清學分型的注意事項血清學分型的注意事項n 標準菌株和實驗室保存的菌株做血清型鑒定的時候，往往比較順利，新分離的菌株做血清分型往往不順利。n 只 H有在屬和種的鑒定結果是完全可靠的情況下，才能做出沙門氏菌未定型的鑒定結論。2 .分離n 取增菌后或篩選試驗陽性的 mEC+n肉湯，分別劃線或適當稀釋后取 CTSMAC平板和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板上，于 36177。n 注意區(qū)分典型菌落，必要時分純。n 血清學試驗n 在營養(yǎng)瓊脂平板上挑取分純的菌落，用O157:H7標準血清或 O157乳膠凝集試劑作玻片凝集試驗。n 2. 磁珠分離：n 將 Eppendorff管按樣品和質控菌株進行編號，每個樣品使用 1只 Eppendorff管，然后插入到磁板架上。 加樣后立即混勻。保證磁珠與 O157的結合。在吸取上清液時，很難做到不丟失磁珠，在這種情況下，可保留 50～ 100μL上清液于Eppendorff管中。 免疫磁珠懸浮：移走磁板，將免疫磁珠重新懸浮在 100μL PBSTween20洗液中。副溶血弧菌檢驗概況副溶血性弧菌于 1950年從日本一次暴發(fā)性食物中毒中分離發(fā)現。主要修改n 將選擇性增菌液由氯化鈉結晶紫增菌液改為 3n ％氯化鈉堿性蛋白胨水；n 將選擇性分離培養(yǎng)基由氯化鈉蔗糖瓊脂和嗜鹽n 菌選擇性瓊脂改為硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽n 鹽－蔗糖瓊脂和科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基；n 增加 API 20E診斷試劑條及全自動細菌生化鑒n 定儀 VITEK；n 增加血清學分型；n 將動物試驗改為神奈川試驗；n 增加最可能數檢索表。1 ℃ 培養(yǎng) 8 h～ 18 h。于 36 ℃ 177。n 涂片鏡檢：將可疑菌落涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢觀察形態(tài)。確定鑒定n 生化試驗：分別接種含 3％氯化鈉的甘露醇、賴氨酸、 MRVP培養(yǎng)基， 36 ℃ 177。無芽孢、無莢膜，有鞭毛，運動活潑，似飛箭樣、穿梭樣翻滾運動。 1 ℃42 ℃ 177。1℃ 培養(yǎng) 24 h，觀察菌落生長情況48h增菌液與 1:50稀釋液劃線接種 mCCDA和Skirrow平板或 CFA顯色平板48h增菌液劃線接種 mCCDA和Skirrow平板或 CFA顯色平板轉種挑取 mCCDA和 Skirrow平板或 CFA顯色平板上的可疑菌落哥倫比亞血平板或 Skirrow無抗生素血平板樣品處理培養(yǎng)條件n 培養(yǎng)溫度 42177。1 ℃生長實驗吲哚乙酸脂水解試驗彎曲菌屬的鑒定項目 彎曲菌屬特征形態(tài)觀察 陰性彎曲小桿菌，多種形態(tài)，有螺旋形、彎曲桿狀、 S形、逗點狀、飛翔的海鷗形 a?！?， 24 h177。n Vm可有效地抑制 G+菌的生長。n 上述方法都比較成熟，穩(wěn)定性較好，已被許多國家和組織的標準采用。n 2. 細菌純培養(yǎng)物為常見食源性致病菌的標準菌株，其背景信息清楚，并檢驗確認。質控樣品檢驗n 1. 檢驗機構收到質控樣品后應檢查包裝的完整性，檢驗前應放置于 2 ℃5 ℃ 保存。將考核結果反饋被考核單位，并上報衛(wèi)生部。質控結果報告n 1. 32家省級檢驗機構匯總省內質控結果，于 2023年 7月 15日前（以郵戳為準）報中國 CDC營養(yǎng)食品所。n 5. 中國 CDC營養(yǎng)食品所應于質控樣品發(fā)送后一個月，隨機抽取 5份樣品進行檢驗以確認樣品質量。背景n 為了保證全國食源性致病菌監(jiān)測檢驗結果的可靠性，提高監(jiān)測工作質量，設計此次質量控制考核。2. ES都可以在該平板上生長并產生藍綠色菌落3. 其他常見菌在 DFI平板的菌落顏色a. 白色菌落：肺炎克雷伯氏菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希氏菌、泛菌屬的多種菌等b. 黃色菌落：赫氏埃希氏菌c. 黑褐色、粉色或中心藍綠菌落：少量菌種n ESIA:藍色， 13mmn 國產顯色培養(yǎng)基36℃177。1℃ ， 48 h177。結果報告n 檢樣單位 中檢出或未檢出空腸彎曲菌。預增菌n 起始培養(yǎng)溫度要低一些n 對于一些細菌細胞受到損傷的n冷凍n長期貯存 (≥10天 )n 36177。1 ℃ 、 24～ 48h平板上雜菌較少繼續(xù)培養(yǎng)100 r/min微需氧振蕩， 42 ℃ 177。實驗室需具備的條件n 冰箱n 恒溫培養(yǎng)箱： 25℃ 、 36℃ 、 42℃n 恒溫振蕩培養(yǎng)箱n 微需氧培養(yǎng)裝置n 顯微鏡：有相差功能n 高速離心機n 均質器n 電子天平空腸彎曲菌檢驗程序24 h～ 48 h圖 1 空腸彎曲菌檢驗程序樣品處理預增菌 接種 Skirrow 與 mCCDA瓊脂平板增 菌鏡 檢 動力試驗 微需氧 25℃ 177。生化特性n 分解葡萄糖產酸不產氣，不分解乳糖、 、蔗糖。副溶血性弧菌在 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應為底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顏色不變或紅色加深，有動力。典型的副溶血性弧菌在科瑪嘉弧菌顯色培養(yǎng)基上 呈現為圓的、半透明的、表面光滑的粉紫色菌落，直徑 2 mm～ 3 mm。置 36 ℃ 177。n 如為帶殼貝類或甲殼類，則應先在符合生活飲用水衛(wèi)生標準的流水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無菌操作打開外殼，按上述要求取相應部分。本菌嗜鹽畏酸，在無鹽培養(yǎng)基上，不能生長，3%～ 6%食鹽水繁殖迅速，每 8～ 9分鐘為 1周期，低于 %或高于 8%鹽水中停止生長。注意，若 CTSMAC平板和改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板表面水分過多時，應在 37℃ 下干燥 10～ 20min，涂布時避免將免疫磁珠涂布到平板的邊緣。n 重復上述步驟 2. 4～ 2. 5 n 洗滌共 3次，動作要輕柔。當吸到液面通過免疫磁珠積聚物時，應放慢速度，以確保免疫磁珠不被吸走。 結合：在 18～ 30℃ 環(huán)境中，將上述Eppendorff管連同磁板架放在適合的裝置上轉動或用手輕微轉動 10min，使 O157與免疫磁珠充分接觸。 取取 mEC+n肉湯增菌培養(yǎng)物肉湯增菌培養(yǎng)物 1mL，加入到，加入到Eppendorff管中，蓋上蓋子，然后輕微振蕩管中，蓋上蓋子，然后輕微振蕩 10s。n 生化試驗n 用 API20E或 VITEKGNI+或其它腸桿菌科生化鑒定試劑盒，按照生產商提供的使用說明進行。 必要時進行氧化酶試驗和革蘭氏染色。在改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板上為圓形、較小的菌落，中心呈淡紫色 紫紅色，邊緣無色或淺灰色。1℃ 18～ 24h n 陽性 陰性n ↓ ↓n 非 O157菌　　　血清學試驗n 　　　　　　　　 ↓n 　　　　　　　生化試驗n　　　　　 ↓n 　　　　報　告操作步驟操作步驟n 1 增菌 以無菌操作取檢樣 25g(mL)加入到含有 225mL mEC+n肉湯的均質袋中，在拍擊式均質器上連續(xù)均質 1～ 2　 min。可以接種在半固體瓊脂上，促使 H抗原的發(fā)育。沙門氏菌的血清學分型就是按照這些抗原的成分進行分型。微生物分析儀微生物分析儀n 微生物分析儀是細菌分類鑒定的工具。在弗勞地氏檸檬酸桿菌群里，氰化鉀和尿素酶也不是 100%陽性，而且也偶爾出現賴氨酸陽性的菌株。n 過去的理解是 25克食品中不能檢出沙門氏菌，但是沒有提出要測定增菌液的靈敏度。n 7) 最終菌落濃度的單位以 “cfu/g (mL)”表示。n 將測試片的透明面朝上置于培養(yǎng)箱內，堆疊片數不超過 20片 ， 36?C 177。表面覆蓋的膠膜，可截留發(fā)酵乳糖的大腸菌群產生的氣體。創(chuàng)傷弧菌的生化性狀試驗項 目 結 果革 蘭 氏染色 鏡檢 陰性，棒狀或弧狀氧化 酶 ＋動 力 ＋D纖維 二糖 ＋蔗糖 －葡萄糖 ＋分解葡萄糖 產 氣 －乳糖 ＋，或 遲緩 ＋硫化 氫 －賴 氨酸脫 羧 酶 ＋VP －ONPG ＋注：＋陽性；－陰性。沿穿刺線周圍呈擴散性生長為動力陽性。初步鑒定n 氧化酶試驗：挑選純培養(yǎng)的單個菌落進行氧化酶試驗，創(chuàng)傷弧菌為氧化酶陽性。1 ℃ 恒溫箱內，培養(yǎng) 12 h～ 16 h。 n 以無菌操作取檢樣 25 g（ mL），加入 3％氯化鈉堿性蛋白胨水 225 mL，用旋轉刀片式均質器以 8 000 r/min均質 1 min，或拍擊式均質器拍擊 2 min，制備