【正文】 ? 目的：用于增菌。 ? b）可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染。 無菌室分無菌操作室和緩沖間。 二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 ? 【原則】實(shí)驗(yàn)室布局設(shè)計(jì)的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗(yàn)過程對(duì)環(huán)境和人員造成危害。 微生物環(huán)境控制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) ? GB/T 16292:2023，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室 (區(qū) )懸浮粒子測試方法 ? GB/T 16293:2023，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室 (區(qū) )浮游菌測試方法 ? GB/T 16294:2023，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室 (區(qū) )沉降菌測試方法 ? GB500732023潔凈廠房設(shè)計(jì)規(guī)范 ? ISO 146441:1999 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第 1部分：空氣潔凈度等級(jí)劃分 ? ISO 146444:1999 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第 4部分：設(shè)計(jì)、施工、運(yùn)行 ? ISO 146447:1999 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第 7部分：分離的設(shè)備 無菌室環(huán)境控制設(shè)備 微粒計(jì)數(shù)儀 無菌室環(huán)境控制設(shè)備 浮游菌采樣儀 無菌室環(huán)境控制設(shè)備 潔凈室沉降菌測試方法 ? ? ，如 100級(jí)凈化房間及層流工作臺(tái)，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于 10min后開始。 ? ，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測試狀態(tài)。 微生物實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備 ? 微生物實(shí)驗(yàn)控制 1：人員管理 ? 微生物實(shí)驗(yàn)控制 2：環(huán)境控制 ? 微生物實(shí)驗(yàn)控制 3：滅菌控制 ? 微生物實(shí)驗(yàn)控制 4：培養(yǎng)基管理 ? 微生物實(shí)驗(yàn)控制 5：無菌操作 微生物基本操作 ?瓊脂平板接種法 ?瓊脂斜面接種法 ?半固體接種法 ?肉湯培養(yǎng)基接種法 瓊脂平板接種法 ? 細(xì)菌在自然界及人體中分布廣，種類多，為了了解菌譜，須先將各種細(xì)菌分離，獲得純菌培養(yǎng)物后才能進(jìn)一步作細(xì)菌的鑒定。黑曲霉也可制成穩(wěn)定的孢子懸液保存在 2～ 8℃ ，在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)替代對(duì)應(yīng)量的新鮮孢子懸液使用。 FTM 的 靈 敏 度 檢 查 培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 ? 接種金黃色葡萄球菌、緑膿桿菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng)肉湯或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中， 30～ 35℃ 培養(yǎng)18～ 24h；用 %無菌氯化鈉溶液制成 10100cfu/ml菌液備用。 ? 菌膜：液體澄清，表面有一薄層菌膜。 ? ( (SIP) 小于一個(gè)完整的產(chǎn)品單元，則應(yīng)選擇代表產(chǎn)品單元的具有微生物的部分。然后將熔化并冷至 45～ 48℃ 的 NA培養(yǎng)基，分別注入 A～ E各平皿每皿15ml。若其比值小于 2，應(yīng)采取兩者的平均數(shù)；若大于 2，則取其中較小的菌落總數(shù) (見例 2及例 3)。若其中一個(gè)平板有較大片狀菌苔生長時(shí)，則不應(yīng)采用，而應(yīng)以無片狀菌苔生長的平板作為該稀釋度的平均菌落數(shù)。 ? 5再處理 :將 B洗脫液置旋渦混臺(tái)器 (2800次／ min)振蕩 2min。 ? 生物負(fù)載估計(jì)值 ：通過對(duì)活菌計(jì)數(shù)或滅菌前活菌計(jì)數(shù)加上一個(gè)回收效率補(bǔ)償系數(shù)， 得出的組成生物負(fù)載的微生物數(shù)值 。加菌量小于 l00cfu，供試品用量同供試品無菌實(shí)驗(yàn)時(shí)每份培養(yǎng)基接種的樣品量。 一般每移種 3次后作一次全面鑒定 。 ? 用平皿計(jì)數(shù)法驗(yàn)證所配置菌液的實(shí)際濃度。 濕熱滅菌控制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) ? GB 生物指示物 第 3部分 :濕熱滅菌用生物指示物 ? ISO 1113832023醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 .生物指示物 .第 3部分 :濕熱滅菌用生物指示劑 四、培養(yǎng)基管理 ? 培養(yǎng)基的制備 ? 培養(yǎng)基的貯藏 ? 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn) 四、培養(yǎng)基管理 ?靈敏度檢查 （中國藥典 2023） ?無菌檢查（ :2023或） 五、 無菌操作 ? 定義：是指在執(zhí)行實(shí)驗(yàn)過程中，防止一切微生物侵入機(jī)體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法。 ? ，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。 每次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要對(duì)層流臺(tái)或生物安全柜及整個(gè)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行消毒 。檢驗(yàn)人員應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn)，在確認(rèn)它們可以承擔(dān)某一檢驗(yàn)前，他們不能獨(dú)立從事該項(xiàng)微生物檢驗(yàn)。 二、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境控制 【要求】 ? 微生物限度檢查的全過程，均應(yīng)遵守?zé)o菌操作，嚴(yán)防再污染。 ? ? ，以確保測試的可靠性、正確性。滅菌程序經(jīng)驗(yàn)證合格后方可使用。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的，有表可查，這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同，且都有定值。 因工作變動(dòng)時(shí) ， 必須做好交接工作 。 ℃ ，不少于 14天； ? 改良馬丁 2328℃ ，不少于 14天。如果中和劑無效， 增加培養(yǎng)基的量 。 ? 2樣品的處理采用旋渦混臺(tái)器 (2800次／ min)，振蕩 2min。 菌數(shù)（ cfu） /cm2= 平均菌數(shù) 稀釋倍數(shù) /采樣面積（ cm2） 生產(chǎn)人員手細(xì)菌總數(shù) 生產(chǎn)人員手細(xì)菌總數(shù) ? 方法：被檢人五指并攏，將浸有滅菌生理鹽水的棉拭子在右手指曲面，從指尖、甲溝至指根處往返涂抹 10次后，將棉拭子放入 10ml滅菌生理鹽水的試管中。 30～ 300之間，則以最近 300或 30的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù) (見表 1，例 6)。 ? 根據(jù)校正因子，滅菌前初始污染計(jì)數(shù)乘以校正因子即為產(chǎn)品帶菌總數(shù)。 ? 。 無菌實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證：釋出物檢查 ? 取滅菌產(chǎn)品以無菌操作轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)