醫(yī)療器械檢化員微生物培訓(xùn)-wenkub
2023-01-17 17:49:19 本頁面
【正文】 執(zhí)行實驗過程中，防止一切微生物侵入機體和保持無菌物品及無菌區(qū)域不被污染的操作技術(shù)和管理方法。濕熱滅菌的溫度和時間需驗證，必須保證物品滅菌后無菌保證值 SAL≤106。 ? a）工作區(qū)采樣點的位置離地 ～ 左右（略高于工作面）。 ? ，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。 ? ，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。 ? 若培養(yǎng)皿上有 2個或 2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以 2個或 2個以上菌落計數(shù)。在30℃ ～ 35℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于 48h。 微生物環(huán)境控制相關(guān)標(biāo)準(zhǔn) ? GB/T 16292:2023，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室 (區(qū) )懸浮粒子測試方法 ? GB/T 16293:2023，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室 (區(qū) )浮游菌測試方法 ? GB/T 16294:2023，醫(yī)藥工業(yè)潔凈室 (區(qū) )沉降菌測試方法 ? GB500732023潔凈廠房設(shè)計規(guī)范 ? ISO 146441:1999 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第 1部分：空氣潔凈度等級劃分 ? ISO 146444:1999 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第 4部分：設(shè)計、施工、運行 ? ISO 146447:1999 潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第 7部分：分離的設(shè)備 無菌室環(huán)境控制設(shè)備 微粒計數(shù)儀 無菌室環(huán)境控制設(shè)備 浮游菌采樣儀 無菌室環(huán)境控制設(shè)備 潔凈室沉降菌測試方法 ? ? ，如 100級凈化房間及層流工作臺，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 10min后開始。 每次實驗結(jié)束后要對層流臺或生物安全柜及整個實驗室環(huán)境進行消毒 。應(yīng)在壓差十分重要的相鄰級別區(qū)之間安裝壓差表。用于無菌檢查和微生物限度檢查的潔凈操作室應(yīng)配有屬于 “人流凈化 ”的更衣室及屬于 “物流凈化 ”的緩沖間或傳遞窗（柜），使進入潔凈操作室的實驗人員和實驗物品分別經(jīng)適當(dāng)凈化后進入實驗操作間。 二、實驗室環(huán)境控制 ? 【原則】實驗室布局設(shè)計的基本原則是既要最大可能防止微生物的污染，又要防止檢驗過程對環(huán)境和人員造成危害。檢驗人員應(yīng)依據(jù)所在崗位和職責(zé)接受相應(yīng)的培訓(xùn)，在確認它們可以承擔(dān)某一檢驗前，他們不能獨立從事該項微生物檢驗。應(yīng)保證所有人員在上崗前接受勝任工作所必須的設(shè)備操作、微生物檢驗技術(shù)和實驗室生物安全等方面的培訓(xùn)，經(jīng)考核合格后方可上崗，同時，實驗室應(yīng)制定所有級別試驗人員的繼續(xù)教育計劃。通常，實驗室應(yīng)劃分成潔凈或無菌區(qū)域和活菌操作區(qū)域，同時應(yīng)根據(jù)試驗?zāi)康?，在時間或空間上有效分隔不相容的試驗活動，將交叉污染的風(fēng)險降低到最低。 無菌室分無菌操作室和緩沖間。 二、實驗室環(huán)境控制 【要求】 ? 微生物限度檢查的全過程，均應(yīng)遵守?zé)o菌操作，嚴防再污染。 所有與菌種相關(guān)的實驗廢物均應(yīng)經(jīng)過滅菌處理后方可丟棄 。 ? ，如 10000級、 100000級以上的凈化房間，測試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 30min后開始。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。 ? ? ，以確保測試的可靠性、正確性。 ? ，如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。 ? ? 。 ? b）可在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動范圍處增加采樣點。滅菌程序經(jīng)驗證合格后方可使用。無菌操作技術(shù)是微生物實驗的基本技術(shù)，是保證微生物實驗準(zhǔn)確和順利完成的重要環(huán)節(jié)。瓊脂平板培養(yǎng)基因面積大，接種后可達到分離的目的，常稱分離培養(yǎng)法。拔去瓊脂斜面培養(yǎng)基塞，管口經(jīng)火焰上滅菌，將沾有細菌的接種環(huán)伸入管內(nèi)， 自下而上在瓊脂上蜿蜒劃線 ；接種后，管口在火焰上滅菌，塞回塞，接種環(huán)滅菌：在試管口處做好標(biāo)記，置 37℃ 培養(yǎng) 18－ 24小時 大腸桿菌斜面 金黃色葡萄球菌斜面 肉湯接種法 ? 目的：用于增菌。具體的配制方法是根據(jù)硫酸和氯化鋇的比例來定的，有表可查，這樣不同比例生成的硫酸鋇沉淀的濃度不同，且都有定值。 菌懸液制備（使用麥?zhǔn)媳葷峁埽? ? 【使用技巧】 ? 直接用眼睛看（需要經(jīng)驗，誤差較大）。 培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 ? 靈敏度檢查所需的六種菌： ? 金黃色葡萄球菌 [CMCC (B)26003] ATCC 6538 ? 銅綠假單胞菌 [CMCC (B)10104] ATCC 9027 ? 枯草芽孢桿菌 [CMCC (B)63501] ATCC 6633 ? 生孢梭菌 [CMCC(B)64941] ATCC 11437 ? 白色念珠菌 [CMCC(F)98001] ATCC 10231 ? 黑曲霉 [CMCC(F)98003] ATCC 16404 ? 根據(jù)培養(yǎng)基的功能選擇靈敏度實驗所需菌種 ? 中國藥典 2023年版 ? 明確規(guī)定： 培養(yǎng)基靈敏度、微生物限度檢查法檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過 5代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為第 0代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。（ 2代） ? 工作菌株： 由標(biāo)準(zhǔn)儲備菌株經(jīng)傳代得到的培養(yǎng)物。 因工作變動時 ， 必須做好交接工作 。 注意菌種有無污染和變異 ， 如發(fā)現(xiàn)污染和變異時 ， 應(yīng)及時更換 。 ? 接種生胞梭菌的新鮮培養(yǎng)物至硫乙醇酸鹽液體培養(yǎng)基中， 30～ 35℃ 培養(yǎng) 18～ 24h；用 %無菌氯化鈉溶液制成10100cfu/ml菌液備用。 培養(yǎng)基質(zhì)量控制：靈敏度檢查 培養(yǎng)基質(zhì)量控制：無菌檢查 ? 每批滅菌的培養(yǎng)基隨機取不少于 5支 (瓶)，培養(yǎng) 14天，應(yīng)無菌生長。 ℃ ，不少于 14天； ?
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