【正文】 （ 物理或機(jī)械涂漬法 ） ? 缺點(diǎn)：系統(tǒng)內(nèi)部壓力大 ， 易流失 ， 不實(shí)用 固定液 ——極性 → NLLC 固定液 ——非極性 → RLLC 3． 正相色譜 ——固定液極性 流動(dòng)相極性 （ NLLC） ? 極性小的組分先出柱 ， 極性大的組分后出柱 ? 適于分離極性組分 反相色譜 ——固定液極性 流動(dòng)相極性 （ RLLC） ? 極性大的組分先出柱 ， 極性小的組分后出柱 ? 適于分離非極性組分 三、化學(xué)鍵合相色譜法 （ BPC） （一）化學(xué)鍵合相 （ bond phase ） （ 二 ） 反相鍵合相色譜 (reversed bond phase) （ 三 ） 正相鍵合相色譜 (normal bond phase) （ 四 ） 離子對(duì)色譜和離子抑制色譜 (ionpair chromatography, ionpress chromatography) （一）化學(xué)鍵合相 利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面 1． 分離機(jī)制：分配 + 吸附 （ 以 LLC為基礎(chǔ) ） 2． 特點(diǎn)： 1） 不易流失 2） 熱穩(wěn)定性好 3） 化學(xué)性能好 4） 載樣量大 5） 適于梯度洗脫 （二）反相鍵合相色譜 1． 分離機(jī)制：疏溶劑理論 正相 ——流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力強(qiáng) ， 作用時(shí)間 ↑ k↑， 組分 tR↑ 反相 ——流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力弱 ， 作用時(shí)間 ↓， k↓， 組分 tR↓ 2． 固定相：極性小的烷基鍵合相 C8柱 ， C18柱 （ ODS柱 ——HPLC約 80%問題 ） 3． 流動(dòng)相：極性大的甲醇 水或乙腈 水 流動(dòng)相極性 固定相極性 底劑 + 有機(jī)調(diào)節(jié)劑 （ 極性調(diào)節(jié)劑 ） ? 例：水 + 甲醇 ， 乙腈 ， THF 續(xù)前 4． 流動(dòng)相極性與 k的關(guān)系： 流動(dòng)相極性 ↑， 洗脫能力 ↓， k↑， 組分 tR↑ 5． 反相洗脫 ：強(qiáng)度因子 S， 見 P291表 135。ttVVKVCVCWWk Rmsmmssms ??????。┑呐浔龋ㄊ苤鶞赜绊戄^：調(diào)整流動(dòng)相和固定相k續(xù)前 2． 對(duì)流動(dòng)相的要求： 1） 與固定液不反應(yīng) 2） 對(duì)樣品有良好溶解度 k=1~10 k=2~5 最理想的 3） 與檢測(cè)器匹配： UV（ 常用 ， 測(cè)定波長(zhǎng)應(yīng)大于溶劑的截止波長(zhǎng) ） 熒光 ， 電化學(xué) 4） 使用粘度小 、 純度高的流動(dòng)相 （ 甲醇 ， 乙腈 ） 使用前過濾 、 脫氣 續(xù)前 3．洗脫方式 1） 等度洗脫 （ 恒組成溶劑洗脫 ） 以固定配比的溶劑系統(tǒng)洗脫組分 （ 一個(gè)泵 ） 類似 GC的等溫度洗脫 2） 梯度洗脫： 在一定分析周期內(nèi)不斷變換流動(dòng)相的種類和比例 即不斷改變其極性 （ 兩個(gè)泵 ） 適于分析極性差別較大的復(fù)雜組分 類似 GC的程序升溫 （ 沸程較長(zhǎng)樣品 ） 圖示 第五節(jié) 高效液相色譜儀 HPLC 儀器示意圖 HPLC的基本流程圖 流 動(dòng) 相 泵 色 譜 柱 檢測(cè) 器 泵 液 分離 檢測(cè) 記錄 進(jìn)樣閥 進(jìn)樣 1． 泵 ： 恒壓泵：流量精度不穩(wěn) 恒流泵：常用 2． 進(jìn)樣裝置 1） 隔膜進(jìn)樣 （ 高分子有機(jī)硅膠墊 →進(jìn)樣室 ） GC系統(tǒng)壓力較小 ， 可以 HPLC系統(tǒng)壓力太大 ， 必須停泵進(jìn)樣 （ 早期 ） 2） 閥進(jìn)樣：不必停泵 ， 六通閥 開始分析 廢 液 樣 品 淋洗液 至分離柱 進(jìn)樣閥 樣 品 裝 樣 廢 液