高效液相色譜-20xx-預(yù)覽頁
【正文】 較小 吸附色譜 硅膠極性較大 ? 硅膠含水量 17% 分配色譜 硅膠失活 → 載體 吸附的水 → 固定液 二、液液分配色譜法（ LLC） 1． 分離機(jī)制：利用組分在兩相中溶解度的差異 2． 固定相：載體 +固定液 （ 物理或機(jī)械涂漬法 ） ? 缺點(diǎn)：系統(tǒng)內(nèi)部壓力大 ， 易流失 ， 不實(shí)用 固定液 ——極性 → NLLC 固定液 ——非極性 → RLLC 3． 正相色譜 ——固定液極性 流動(dòng)相極性 （ NLLC） ? 極性小的組分先出柱 ， 極性大的組分后出柱 ? 適于分離極性組分 反相色譜 ——固定液極性 流動(dòng)相極性 （ RLLC） ? 極性大的組分先出柱 ， 極性小的組分后出柱 ? 適于分離非極性組分 三、化學(xué)鍵合相色譜法 （ BPC） （一）化學(xué)鍵合相 （ bond phase ） （ 二 ） 反相鍵合相色譜 (reversed bond phase) （ 三 ） 正相鍵合相色譜 (normal bond phase) （ 四 ） 離子對(duì)色譜和離子抑制色譜 (ionpair chromatography, ionpress chromatography) （一）化學(xué)鍵合相 利用化學(xué)反應(yīng)將固定液的官能團(tuán)鍵合在載體表面 1． 分離機(jī)制：分配 + 吸附 （ 以 LLC為基礎(chǔ) ） 2． 特點(diǎn)： 1） 不易流失 2） 熱穩(wěn)定性好 3） 化學(xué)性能好 4） 載樣量大 5） 適于梯度洗脫 （二）反相鍵合相色譜 1． 分離機(jī)制：疏溶劑理論 正相 ——流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力強(qiáng) ， 作用時(shí)間 ↑ k↑， 組分 tR↑ 反相 ——流動(dòng)相與溶質(zhì)排斥力弱 ， 作用時(shí)間 ↓， k↓， 組分 tR↓ 2． 固定相：極性小的烷基鍵合相 C8柱 ， C18柱 （ ODS柱 ——HPLC約 80%問題 ） 3． 流動(dòng)相：極性大的甲醇 水或乙腈 水 流動(dòng)相極性 固定相極性 底劑 + 有機(jī)調(diào)節(jié)劑 （ 極性調(diào)節(jié)劑 ） ? 例：水 + 甲醇 ， 乙腈 ， THF 續(xù)前 4． 流動(dòng)相極性與 k的關(guān)系： 流動(dòng)相極性 ↑， 洗脫能力 ↓， k↑， 組分 tR↑ 5． 反相洗脫 ：強(qiáng)度因子 S， 見 P291表 135。H 2O tR↑， k↑ ? 調(diào)節(jié) pH范圍： ~ pH 破壞鍵合相與載體的結(jié)合 pH 腐蝕柱子 3） 適用：極弱酸堿物質(zhì) pH=3~7弱酸； pH=7~8弱堿；兩性化合物 分離類型選擇 第四節(jié) 影響分離的因素 一、分離度 二 、 流動(dòng)相 三 、 洗脫方式 1． 22114 kknR???????uCAH ???流動(dòng)相采用粘度小、低流速的勻的固定相：采用粒度小、填充均n39。12121212RRRRVVttkkKK ?????溫影響?。┵|(zhì)和固定相性質(zhì)（受柱：調(diào)整流動(dòng)相種類、性?039。 A 樣品的 k降低， tR降低 B 樣品的 k增加， tR增加 C 相鄰組分的 ?增加 D 對(duì) ?基本無影響 例題 HPLC中的最佳流速 uH與 GC中的最佳流速 uG比較結(jié)果是（ ） A uH＞ uG B uH＜ uG C uH=uG 例題 用 ODS柱分析一有機(jī)弱酸混合物樣品，以某一比 例甲醇一水為流動(dòng)相時(shí)，樣品容量因子較小，若 想使容量因子適當(dāng)增加，較好的辦法是（ ）。各進(jìn)樣 3次，進(jìn)樣量為 10μL。進(jìn)樣量為 10μL， 3次進(jìn)樣得蘆丁色譜峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積之比的平均值為 ，計(jì)算樣品中蘆丁的含
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