【正文】 血清存在情況下效率很低，因此在轉染前要除血清。電穿孔法高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入 穩(wěn)定轉染，瞬時性轉染，所有細胞 適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，需根據不同細胞類型優(yōu)化電穿孔實驗條件 陽離子性的脂質體法帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞穩(wěn)定轉染瞬時性轉染，所有細胞 適用性廣，轉染效率高，重復性好但轉染時需除血清轉染效果隨細胞類型變化大 病毒介導法逆轉錄病毒 通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中穩(wěn)定轉染，特定宿主細胞 可用于難轉染的細胞、原代細胞，體內細胞等，但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期，需考慮安全因素 ，腺病毒 瞬時轉染，特定宿主細胞 可用于難轉染的細胞，需考慮安全因素。胎牛血清（FCS）經常用到，便宜一點的有馬或牛血清。轉染技術的要點及轉染試劑正確選擇轉染技術的要點及轉染試劑正確選擇轉染技術是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術，它是研究基因表達調控，突變分析等的常規(guī)工具。（4）抗生素細胞培養(yǎng)過程中往往會添加抗生素來防止污染，但是這些添加劑可能對轉染造成麻煩。推薦在轉染前24小時分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA攝入的可能。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。目前在設計更復雜的基因載體時，PEI經常做為核心組成成分。細胞轉染技術原理及應用常規(guī)轉染技術分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染（永久轉染）。線型PEI（Line PEI,LPEI）與其衍生物用作基因轉染載體的研究比分枝狀PEI（Branched PEI,BPEI）要早一些，過去的研究認為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉染復合物的細胞毒性較低，有利于細胞定位，因此與BPEI相比應該轉染效率高一些。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記，如來氨丙基轉移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩(wěn)定轉染的同源細胞系。一定要避免細菌，支原體或真菌的污染。比如青霉素和鏈霉素，就是影響轉染的培養(yǎng)基添加物。隨著功能研究的興起，其應用越來越廣泛。通常的，血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對不同細胞的生長作用有很大的差別。 Biolistic 顆粒傳遞法將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內逐步釋放，表達瞬時性轉染 可用于：人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞 顯微注射法用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核 穩(wěn)定轉染，瞬時性轉染 轉染細胞數有限，多用于工程改造或轉基因動物的胚胎細胞第 7 頁 共 7 頁。因此在轉染前建議先測(轉右)試出對細胞生長良好的血清批號，轉染時用同一批號的血清，并同時做負對照（不加轉染試劑及外源DNA）以測試細胞生長是否正常。常規(guī)轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染（永久轉染）。這可能間接導致細胞死亡，造成轉染效率低。不同的轉染試劑，要求轉染時的最適細胞密度各不相同，即使同一種試劑，也會因不同的細胞類型或應用而異。每種轉染試劑都會提供一些已經成功轉染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選擇最適合實驗設計的轉染試劑。超高分枝的、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基，在染實驗中發(fā)現這種PEI的