【正文】 血清存在情況下效率很低，因此在轉(zhuǎn)染前要除血清。電穿孔法高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位，DNA通過(guò)膜上形成的小孔導(dǎo)入 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染，所有細(xì)胞 適用性廣但細(xì)胞致死率高，DNA和細(xì)胞用量大，需根據(jù)不同細(xì)胞類型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗(yàn)條件 陽(yáng)離子性的脂質(zhì)體法帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染，所有細(xì)胞 適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復(fù)性好但轉(zhuǎn)染時(shí)需除血清轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大 病毒介導(dǎo)法逆轉(zhuǎn)錄病毒 通過(guò)侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，特定宿主細(xì)胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞，體內(nèi)細(xì)胞等，但攜帶基因不能太大細(xì)胞需處分裂期，需考慮安全因素 ，腺病毒 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，特定宿主細(xì)胞 可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，需考慮安全因素。胎牛血清（FCS）經(jīng)常用到，便宜一點(diǎn)的有馬或牛血清。轉(zhuǎn)染技術(shù)的要點(diǎn)及轉(zhuǎn)染試劑正確選擇轉(zhuǎn)染技術(shù)的要點(diǎn)及轉(zhuǎn)染試劑正確選擇轉(zhuǎn)染技術(shù)是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞的技術(shù)，它是研究基因表達(dá)調(diào)控，突變分析等的常規(guī)工具。（4）抗生素細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中往往會(huì)添加抗生素來(lái)防止污染，但是這些添加劑可能對(duì)轉(zhuǎn)染造成麻煩。推薦在轉(zhuǎn)染前24小時(shí)分細(xì)胞，這將提供正常細(xì)胞代謝，增加對(duì)外源DNA攝入的可能。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉(zhuǎn)入量低但整合率高。目前在設(shè)計(jì)更復(fù)雜的基因載體時(shí)，PEI經(jīng)常做為核心組成成分。細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)原理及應(yīng)用常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（永久轉(zhuǎn)染）。線型PEI（Line PEI,LPEI）與其衍生物用作基因轉(zhuǎn)染載體的研究比分枝狀PEI（Branched PEI,BPEI）要早一些，過(guò)去的研究認(rèn)為在不考慮具體條件，LPEI/DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的細(xì)胞毒性較低，有利于細(xì)胞定位，因此與BPEI相比應(yīng)該轉(zhuǎn)染效率高一些。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉(zhuǎn)染細(xì)胞能整合，通常需要通過(guò)一些選擇性標(biāo)記，如來(lái)氨丙基轉(zhuǎn)移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復(fù)篩選，得到穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的同源細(xì)胞系。一定要避免細(xì)菌，支原體或真菌的污染。比如青霉素和鏈霉素，就是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。隨著功能研究的興起，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。通常的，血清是一種包含生長(zhǎng)因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對(duì)不同細(xì)胞的生長(zhǎng)作用有很大的差別。 Biolistic 顆粒傳遞法將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放，表達(dá)瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 可用于：人的表皮細(xì)胞，纖維原細(xì)胞，淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞 顯微注射法用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，瞬時(shí)性轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染細(xì)胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的胚胎細(xì)胞第 7 頁(yè) 共 7 頁(yè)。因此在轉(zhuǎn)染前建議先測(cè)(轉(zhuǎn)右)試出對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)良好的血清批號(hào)，轉(zhuǎn)染時(shí)用同一批號(hào)的血清，并同時(shí)做負(fù)對(duì)照（不加轉(zhuǎn)染試劑及外源DNA）以測(cè)試細(xì)胞生長(zhǎng)是否正常。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染（永久轉(zhuǎn)染）。這可能間接導(dǎo)致細(xì)胞死亡，造成轉(zhuǎn)染效率低。不同的轉(zhuǎn)染試劑，要求轉(zhuǎn)染時(shí)的最適細(xì)胞密度各不相同，即使同一種試劑，也會(huì)因不同的細(xì)胞類型或應(yīng)用而異。每種轉(zhuǎn)染試劑都會(huì)提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株列表和文獻(xiàn)，通過(guò)這些資料可選擇最適合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。超高分枝的、較柔性的PEI衍生物含有額外的仲胺基和叔胺基，在染實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)這種PEI的