【正文】 ? 乙酸乙酯 氯仿 ? 甲乙酮 / 二氧六環(huán) ? 吡啶 丙酮 ? 乙醇 / 乙酸 ? 二甲亞砜 甲醇 ? 乙二醇 甲酰胺 / 2022/5/31 27 ? 流動相選擇時(shí)需考慮溶劑的下列情況 ? 一些溶劑如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保護(hù)劑，有時(shí)需重蒸除去乙醇。如兩個(gè)相鄰斑點(diǎn)中后面的一個(gè)展開速度較其單獨(dú)展開時(shí)為大。 ? 單光束雙波長 ——對背景不均勻引起的干擾有補(bǔ)償作用，選擇的兩個(gè)波長應(yīng)接近些。 濾光片 熒光 檢 測 器 2022/5/31 44 ? 熒光淬滅測量 ——吸附劑有熒光，樣品斑點(diǎn)無熒光，在紫外光照射下，被測物在熒光背景上顯示出暗灰斑點(diǎn)。通過加熱、噴霧等方法施加反應(yīng)試劑。 ? 檢測限 ? 定量限 ? 準(zhǔn)確度 2022/5/31 55 應(yīng)用 ? 藥物鑒別 ——采用標(biāo)準(zhǔn)對照法 ? 雜質(zhì)檢查 ?雜質(zhì)對照品法 ?高低濃度法 ?藥物標(biāo)準(zhǔn)品對照法 ?不允許有雜質(zhì)斑點(diǎn)存在，即以方法靈敏度來控制雜質(zhì)量。 ? 展開方法 ——使用直線化功能定量時(shí)，為避免展開距離不同產(chǎn)生的誤差，實(shí)際定量時(shí)，將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品在同一塊板上展開是較理想的。 2022/5/31 42 ? 測量方式 ? 吸光度測量 ——測定的是 漫反射光 。 ? 間接法 ——將部分照射光的能量轉(zhuǎn)換成較長波長的熒光，即 熒光 測量。 2022/5/31 30 ? 斑點(diǎn)的擴(kuò)散與形狀 在 TLC中斑點(diǎn)的移動與擴(kuò)散是二維的，因?yàn)榘唿c(diǎn)在展開方向和與之垂直方向上的擴(kuò)散速度是不相等的，展開劑的移動速度也是不等的，在單位體積或單位質(zhì)量薄層內(nèi)所含的溶劑量越接近溶劑前沿減少得越明顯，直至溶劑前沿時(shí)為零，這一現(xiàn)象稱為“ 溶劑的體積梯度 ”，在各種展開形式中均存在。流動相強(qiáng)度越高，表示它與吸附劑相互作用力強(qiáng)。用針頭將斑點(diǎn)標(biāo)記下來，放在通風(fēng)處使碘揮發(fā)。展開距離一般為 1015cm。 ?含有熒光指示劑的商品吸附劑以“ F”表示，并以下標(biāo)注明其激發(fā)光波長。 ?HPLC—— 顆粒物質(zhì)、腐蝕性物質(zhì)、不可逆吸附物質(zhì)均有大的影響。 80年代以后發(fā)展了薄層色譜光密度掃描儀，和各步操作的儀器化，并實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)化。沒有黏結(jié)劑的吸附劑以字母“ H”表示。 ?點(diǎn)樣量應(yīng)適中，過載會引起斑點(diǎn)拖尾，分離度變差，以最小檢測量的幾倍 ～ 幾十倍為宜。 ? 鍥尖技術(shù) ——圓形離心展開具有分辨率高的優(yōu)點(diǎn)，但需要有一定的儀器裝置。同時(shí)對相鄰的兩個(gè)斑點(diǎn)，假定 W1=W2=W ?則 R= L。要求操作格外小心，同時(shí)混合流動相不應(yīng)重復(fù)使用。 ? 預(yù)吸附還可能影響 Rf在 離。反射吸收度與物質(zhì)含量有確定關(guān)系，可進(jìn)行定量。即物質(zhì)濃度越大，薄層試樣板上測定的反射吸光度比直線關(guān)系所示值越低。 ?目測法 ——比較系列標(biāo)準(zhǔn)與樣品的斑點(diǎn)面積大小、顏色深淺，得到樣品的含量范圍。 ? 線性與范圍 ——相應(yīng)于待測組分檢出量的20% 120%范圍。在理論曲線上選擇吸光度 0 – 1之間的 7個(gè)點(diǎn)，將各吸光度值轉(zhuǎn)換為直線上的值，得到一條通過原點(diǎn)的直線。光束固定，掃描板臺運(yùn)動。尤其是使用混合溶劑時(shí)，極性較弱和沸點(diǎn)較低的溶劑，在薄層邊緣容易揮發(fā)，使邊緣部分的展開劑中極性溶劑的比例增大， Rf相對增大。 ? R=1/4（ ? 1） [?k /（ ?k +1） ] ?分離因子 ?= k1/k2， k為 k1和 k2的平均值 ? 由上式可見， R取決于三個(gè)因子： ?理論塔片 n主要是吸附劑性質(zhì)的函數(shù) ??k 反映了兩種溶質(zhì)的平均遷移速度，其由流動相溶劑強(qiáng)度 ?? 決定 ? ?取決于吸附劑和流動相的組成 n2022/5/31 29 ? 溶劑優(yōu)化規(guī)則： ? 增加溶劑強(qiáng)度 ，使 Rf值增大，但也可能降低分離能力。 W 2022/5/31 22 ? R= ? 由上式， Rf與 R之間存在著如圖所示關(guān)系 n 4 ⊿Rf Rf1 Rf1 R 0 Rf=,R最高 Rf在 ,R變化不大 Rf﹤ 或 ﹥ ,R下降 2022/5