薄層色譜法概述ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 ?中間精密度 ——多數(shù)情況下， RSD應(yīng)在%以內(nèi)。 ?可建立標(biāo)準(zhǔn)條件下的化合物的光譜圖庫，用計(jì)算機(jī)檢索定性。即使近似地呈直線狀也往往不能通過原點(diǎn)，認(rèn)為是試樣變質(zhì)所引起的。該測量技術(shù)有三種形式： 測熒光 測紫外光 測紫外和熒光 2022/5/31 45 ? 掃描儀 ?機(jī)械掃描儀 ——可進(jìn)行吸光度和熒光測量，以反射測量方式為主，也有能提供透射測量方式的（主要用于電泳譜圖掃描測量）。 直線掃描 鋸齒掃描 輪廓曲線 積分曲線 2022/5/31 41 A B C A B C C A B 對于不規(guī)則斑點(diǎn)，兩種掃描結(jié)果不一樣。 光 單色器 檢測器 光 波長 1 波長 2 檢測器 斬波器 光 單色器 分 光 鏡 檢測器 檢測器 2022/5/31 38 ? 透射光法 ? 測定組分對應(yīng)的斑點(diǎn)對特定波長光的吸收度來確定含量。 2022/5/31 34 預(yù)吸附中 展開中 展開過程中用不同于展開劑的溶劑調(diào)節(jié)槽內(nèi)氣氛 2022/5/31 35 薄層掃描 ? 原理 ? 薄層定量方法可分為 ? 直接法 ——測定照射光照射色譜后，因被測物斑點(diǎn)的存在引起的 透射光 和 反射光 的變化?？赏ㄟ^預(yù)吸附溶劑分子，調(diào)節(jié)其表面活性。 ? 若出現(xiàn)斑點(diǎn)拖尾，可向流動(dòng)相中加少量水，或降低薄層活性 ，有利于改善分離。 ? 溶劑儲藏時(shí)間和條件對溶劑質(zhì)量影響，應(yīng)注意出廠日期。 ? 此外還有：化學(xué)鍵合相反相展開、化學(xué)鍵合相正相展開、離子交換、離子對色譜、凝膠、膠束、手性展開。 ? 相對比移值（ Rx） ?Rf測量中一個(gè)重要的誤差來源是難以確定溶劑前沿的位置，因此，引入 相對比移值 （ Rx）。將展開后的板揮干溶劑置碘缸中至薄層色譜上出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)。將樣品點(diǎn)在薄層板的一個(gè)角上，展開適當(dāng)距離后，揮干溶劑，再將薄層板以與原展開方向成 90 ? 的方向進(jìn)行展開。 ? 藥典規(guī)定：點(diǎn)樣基線距底邊 , 樣點(diǎn)直徑24mm, 點(diǎn)間距離約為 。 ? 薄層板活化 ?涂布后的薄層先在室溫下陰干，在使用前置適當(dāng)溫度烘烤一定時(shí)間進(jìn)行活化，然后置干燥器中備用。 ?熒光黏結(jié)劑 ——在吸附劑中添加某種熒光指示劑，常用的熒光指示劑 ?在 254nm紫外光下發(fā)藍(lán)色熒光的有鈉熒光素、硫化鎘、陰極綠等。然后充分漂洗干凈，干燥，置干燥器中備用。 ? HPLC一次只能分離一個(gè)樣品，通常采用反相 色譜，色譜后衍生化受限制。 1965年德國化學(xué)家出版了 “ 薄層色譜法 ” 一書，推動(dòng)了這一技術(shù)的發(fā)展。 而 HPLC是在封閉的系統(tǒng)內(nèi)，流動(dòng)相流量靠泵控制，溶劑選擇受檢測器限制，固定相需再生。 ?表面改性纖維素 ——乙?；w維素 ?藥典收載的固定相有 ：硅膠類、硅藻土類、氧化鋁類、微晶纖維素類等。薄層強(qiáng)度差。 ?硅膠或硅膠 G ——以 CMC為黏合劑。 2022/5/31 12 ? 自動(dòng)點(diǎn)樣 ? Limomat IV 噴樣儀 ——樣品溶液通過氣流成霧狀噴向薄層，移動(dòng)板臺，使在薄層上流下樣品條帶。 2022/5/31 14 ? 連續(xù)展開 ——使到達(dá)薄層上緣的溶劑不斷蒸發(fā)，連續(xù)展開以增加展開距離。 薄層被刮掉部分 溶劑前沿 2022/5/31 16 ? 檢測 ? 物理方法 ——紫外光下顯示熒光或熒光淬滅 ? 化學(xué)方法 ——加化學(xué)試劑顯色，要求顯色穩(wěn)定、持久、專屬、靈敏、線性良好。 ， 原點(diǎn) S R W Ls L。 W 2022/5/31 22 ? R= ? 由上式， Rf與 R之間存在著如圖所示關(guān)系 n 4 ⊿Rf Rf1 Rf1 R 0 Rf=,R最高 Rf在 ,R變化不大 Rf﹤ 或 ﹥ ,R下降 2022/5/31 23 流動(dòng)相與展開體系 ? 液 固吸附 ——在該色譜中，溶質(zhì)的保留和分離選擇性決定于三個(gè)因素： 溶 解 能 力 流動(dòng)相 溶質(zhì) 吸附 劑 相互作用 競爭 2022/5/31 24 ? 液 液分配 ? 基于組分在互不相溶的兩相間的溶解度不同而實(shí)現(xiàn)分離的一種展開系統(tǒng)。 ?溶劑強(qiáng)度也可用其在水中的溶解度參數(shù) ? 來表示。 ? R=1/4（ ? 1） [?k /（ ?k +1） ] ?分離因子 ?= k1/
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