薄層色譜法概述ppt課件(完整版)
【正文】 ? 乙二醇 甲酰胺 / 2022/5/31 27 ? 流動(dòng)相選擇時(shí)需考慮溶劑的下列情況 ? 一些溶劑如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保護(hù)劑，有時(shí)需重蒸除去乙醇。可在展開前，將薄層板浸入某種液體固定相。 Lr 原點(diǎn) 參比 樣品 前沿 2022/5/31 18 ?注意： ?同一物質(zhì)在不同展開方式中得到的比移值是不相同的。 ? 斑點(diǎn)定位方法 ?碘蒸氣法 ——靈敏、簡(jiǎn)便，為通用顯色法。因無(wú)溶劑前沿，需要有個(gè)參照物同時(shí)展開，以計(jì)算相對(duì)保留值。 ? 特點(diǎn) ：適合于大量稀樣品溶液的噴加；條帶寬度不超過(guò) 2mm，有利于改善分辨率；便于狹縫式光密度計(jì)掃描；要求薄層板強(qiáng)度高。配制 % ～ %CMC水溶液 ,放置過(guò)夜 ,使懸浮的纖維沉降 ,取上層用來(lái)配制吸附劑勻漿。 2022/5/31 8 ?有機(jī)黏結(jié)劑 ——羧甲基纖維素鈉（ CMC） 、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。 顆粒直徑 一般要求 10 – 40 um。 ?樣品處理 ?TLC要求 沒有 HPLC嚴(yán)格。2022/5/31 1 第四章 薄 層 色 譜 法 2022/5/31 2 概 述 ? 1938年俄國(guó)人首先實(shí)現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。 2022/5/31 4 ? 色譜分離 ? TLC可 同時(shí)分離多個(gè)樣品 ，并可采用相同或不同溶劑進(jìn)行同向或雙相 多次展開 ，通常采用 正相 色譜，色譜后 衍生化方便 。 2022/5/31 7 ?載板 ——玻璃板，放在飽和碳酸鈉溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，除去玻璃表面的油污。其特點(diǎn)是薄層強(qiáng)度高、使用方便，但不能用濃硫酸作顯色劑。 2022/5/31 10 ?反相薄層板制備 ——以不同鏈長(zhǎng)的 正構(gòu)烷烴為固定液 , 配制成適當(dāng)濃度的溶液 (如 5%硅酮油乙醚溶液 ), 浸漬硅膠板。 ?自動(dòng)薄層色譜點(diǎn)樣儀 ——由計(jì)算機(jī)控制。 ? 二維展開 ——在兩個(gè)垂直的方向上進(jìn)行展開。 將碘結(jié)晶放在密封的展開缸中，碘的升華，使缸內(nèi)充滿紫色的碘蒸氣。 ?在同樣溶劑的重復(fù) n次的多次展開后的比移值 (Rf)n=1(1Rf)n 。實(shí)際上在 TLC中，分配與吸附是并存的（大氣中水分也是一種固定相）。 ? 許多溶劑有吸濕性，使溶劑含水量不一致，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)難以重現(xiàn)。 ? 用乙醚或甲醇代替流動(dòng)相中的一種較強(qiáng)組分，由于形成 氫鍵 可改善選擇性。 2022/5/31 32 ? 固定相的活度及其調(diào)節(jié) 在其他因素一定時(shí)，活度增加， Rf值減少，反之亦然。采用雙槽層析缸尤為有利。 ? 雙光束單波長(zhǎng) ——可補(bǔ)償光源不穩(wěn)引起的誤差，但對(duì)板層不均勻無(wú)作用。 ? 鋸齒式掃描 ——照射在薄層板上的光束與薄層板的相對(duì)運(yùn)動(dòng)軌跡呈鋸齒形或矩形。本法適合于本身無(wú)顏色，又無(wú)特征紫外吸收或熒光的物質(zhì)。 ? 試樣變質(zhì) 時(shí) ——試樣展開后，應(yīng)馬上進(jìn)行測(cè)定，如果放置一星期后再測(cè)定。 2022/5/31 51 ?通過(guò)板上光譜圖定性 ?直接測(cè)定薄層板上斑點(diǎn)的紫外或可見吸收光譜圖，與平行點(diǎn)加的標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的圖譜對(duì)照。 2022/5/31 54 ? 精密度 ?重復(fù)性 ——當(dāng)待測(cè)組分的含量達(dá) 點(diǎn)時(shí) , 方法的重復(fù)性 (RSD)應(yīng)在 %以內(nèi)。 ?再現(xiàn)性 ——RSD一般應(yīng)在 10%以內(nèi)。 ?與其他技術(shù)連用 ?TLC付里葉變換 IR聯(lián)用 ?TLCMS聯(lián)用 2022/5/31 52 ? 定量方法 ? 間接定量 ——將薄層分離后物質(zhì)斑點(diǎn)定量地洗脫下來(lái)，再對(duì)洗脫液定量。 ? 展開距離 ——同一試樣等量點(diǎn)樣，同樣展開，展開距離不同將引起誤差。 ?高速掃描系統(tǒng) ——可分為兩類 ?光柵掃描系統(tǒng) ?位敏掃描系統(tǒng) ?這類掃描儀技術(shù)上一些問題還未解決。同一斑點(diǎn)從 A、 B、 C三個(gè)不同方向掃描，鋸齒掃描所得積分值變動(dòng)小，而直線掃描所得積分值變動(dòng)大。將薄層板從左至右移動(dòng)，對(duì)斑點(diǎn)掃描，單色光透過(guò)薄層板后被記錄下來(lái)，將測(cè)得的吸收度對(duì) Rf值繪制掃描曲線，得薄層色譜圖 光源 單色器 2022/5/31 39 ? 反射光法 ? 一定波長(zhǎng)的光照射薄層，穿進(jìn)薄層內(nèi)的光部分被薄層吸收，部分經(jīng)過(guò)漫反射又折回表面成為反射光。并通過(guò)隨行標(biāo)準(zhǔn)比較待測(cè)斑點(diǎn)的量。例如可將活化薄層板放在相對(duì)濕度恒定的空間里來(lái)達(dá)到調(diào)節(jié)活度的目的。 ? 也可采用兩種強(qiáng)溶劑與一種弱溶劑組成的三元混合流動(dòng)相 ，此時(shí)，溶劑強(qiáng)度由弱溶劑控制，而溶劑選擇性則由兩強(qiáng)溶劑控制。 ? 混合流動(dòng)相
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