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細胞與分子生物學(xué)(留存版)

2025-05-19 23:49上一頁面

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【正文】 雜種優(yōu)勢 抗性 ACP技術(shù) Abstrac t: With the development of Genome Project and analysis ofmassive biological information, separation and identification of difference exp ressing gene have bee a hot issue in molecular biology research1 The mRNA differential disp lay (DDRTPCR) is one of effective methods for screening and isolating differentially expressed genes. The principles of DDRTPCR technique were introduced1. The usability and achieved research results by using thismethod were summarized from the aspects of rice development gene, heterosis gene and the resistance gene1 The p rospective app lication of DDRTPCR in paddy rice mutant and resistance to agricultural chemicals research was also exp lored in the paper.Keyword s: mRNA differential display Heterosis Resistance ACP 許多年以來,分離差異表達基因的方法僅限于差異篩選cDNA文庫,直到1992 年Liang等發(fā)明了一種檢測基因轉(zhuǎn)錄模式的方法,即mRNA 差異顯示技術(shù)(mRNA Differential Display Reverse TranscriptionPCR, DDRTPCR)[1],它是將mRNA反轉(zhuǎn)錄技術(shù)與PCR技術(shù)二者相互結(jié)合發(fā)展起來的一種RNA指紋圖譜技術(shù),目前已廣泛應(yīng)用于分離鑒定組織特異性表達的基因,差別基因表達(differential gene express)是細胞分化的基礎(chǔ)[2]。這三部分的具體作用為:3'端的核心序列用于第一、第二輪擴增時,保證擴增的靈敏度;中間的調(diào)節(jié)部分是ACP技術(shù)實現(xiàn)的關(guān)鍵區(qū)域,作用主要有以下兩方面:①提高核心序列識別模板時的退火溫度,這是由于dI可以識別ATGC任意堿基,這樣就將核心序列的退火溫度提高到50℃左右,②連續(xù)的dI在較低溫度時,形成一個泡狀結(jié)構(gòu),而使通用引物序列卷曲起來,不參與退火識別,而在較高溫度時形成線性分子,而使整條引物打開,參與退火識別;5'端的通用調(diào)節(jié)序列是高溫識別的通用引物區(qū)。(7)75℃ 10min終止反應(yīng)后置冰上,稍離心。(5) 加樣2μl。9.檢索分析。(2)預(yù)電泳30min。(2)混勻后稍離心。 1 ACP技術(shù)的基本原理ACP技術(shù)通過一種特殊引物,使得特異性和靈敏度同時兼顧。ACP DDRTPCR技術(shù) 摘 要:隨著基因組計劃的順利實施,大量的生物信
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