細(xì)胞與分子生物學(xué)-免費(fèi)閱讀
【正文】 7．PCR產(chǎn)物的TA克隆。(8)X光片70℃曝光過(guò)夜或更長(zhǎng)時(shí)間(根據(jù)射線強(qiáng)度而定)。⑥ 反應(yīng)結(jié)束后置20℃保存?zhèn)溆谩?9) 將78μl ddH2O分別加入B管中,混勻。將管標(biāo)號(hào)為1A,2A,PC A等。[10]只需通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳就足以進(jìn)行分析ACP技術(shù)顯著提高了PCR 擴(kuò)增的特異性和敏感性，使得PCR產(chǎn)物的特異性大為增強(qiáng)。作者將介紹一種在DDRTPCR 基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的對(duì)差異表達(dá)基因克隆的新方法，即引物退火控制技術(shù)(Annealling ControlPrimer, ACP）。它第一次實(shí)現(xiàn)了同時(shí)快速靈敏地檢測(cè)到真核細(xì)胞中大部分的差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄體的目的[3]。就DDRTPCR的基本原理簡(jiǎn)要概述，闡明了該技術(shù)在生物生長(zhǎng)發(fā)育、雜種優(yōu)勢(shì)、抗逆性基因研究中的應(yīng)用等。[5]引物退火時(shí)能否與其靶序列特異結(jié)合，是PCR能否成功擴(kuò)增的關(guān)鍵因素之一，因此引物結(jié)構(gòu)的優(yōu)化非常重要。ACP技術(shù)主要由以下三個(gè)部分組成：逆轉(zhuǎn)錄合成第一條鏈和兩個(gè)不同階段的PCR 反應(yīng)；5＇端部分是通用引物序列。 PCR產(chǎn)物分布范圍廣產(chǎn)物條帶分布可為150 bp～2 kb，這樣不僅增加了鑒定差異表達(dá)基因的機(jī)會(huì)，也為預(yù)測(cè)基因的功能提供了更多重要的序列信息，足以滿(mǎn)足分析所需。(6）42℃孵育1h。④ 開(kāi)始PCR擴(kuò)增。(4) 停止預(yù)電泳，沖洗加樣孔。（5）取PCR產(chǎn)物10μl 2%瓊脂糖電泳檢測(cè)。參考文獻(xiàn)：1 Liang P, Pardee A1 Science, 1992, 257: 967～97112 StraussM, Bauer D, Muller H1 Nucleic Acids Research, 1993, 21: 4272～428013 錢(qián)前,程式華,水稻遺傳學(xué)和功能基因組學(xué)[M ] 1北京:科學(xué)出版社, 200614 HuWJ, Zhang SH, Zhao Z, et al1 Plant Physiology and MolecularBiology, 2003, 29 (6) : 507～51415 李竑,沈思師,許智宏,等1實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào), 2003, 36 (1) : 54～6016 高風(fēng)華,譚學(xué)林1云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2006 (2) : 150～15317 EndoM, Tsuchiya T, WatanabeM, et al1 Genes Genet Syst, 2004, 79 (4) : 213～21618 Guimil S, Chang HS, Zhu T, et al1 PNAS, 2005, 102: 8066～807019 郭蕾,程英豪,王紫1 北京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版) , 2006, 42 (2) : 175～79110 林碧源1用DNA芯片鑒定水稻花器官發(fā)育相關(guān)基因[碩士學(xué)位論文]1福州:福建農(nóng)林大學(xué), 2006111 辛業(yè)蕓,鄧小林,羅崇善1雜交水稻, 2007, 22 (6) : 1～5112 賀滉,郭安平, 孔華, 等1 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2007, 35 ( 5 ) : 1307～1309113 熊建華,陳學(xué)峰,張義平1
化學(xué)相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1