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細胞與分子生物學(xué)(文件)

2025-04-22 23:49 上一頁面

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【正文】 P1,T9 以下為陽性對照反應(yīng)體系 (8) PC 1A P10,T8 (9) PC 1B P10,T8 (10) PC 2A P10,T8 (11) PC 2B P10,T8 (12) H2O P10,T8 (13) PC RNA1 P10,T8 (14) PC RNA2 P10,T8 在PCR 管中加入:① cDNA樣品 1μl P 引物 1μl T 引物 1μl② 準(zhǔn)備其它 PCR試劑的混合液: (在另一管中加入) 成分 每管(μl) 所需管數(shù)( n=14) 10buffer 2n ddH2O 14n dNTPmix α32P dATP Taq酶 終體積 17 n 混勻后稍離心。 9600 擴增儀上執(zhí)行以下程序:94℃ 5min 1 cycles 40℃ 5min 68℃ 5min 94℃ 30sec 2 cycles 40℃ 30sec 68℃ 5min 94℃ 20sec 23 cycles 40℃ 30sec 68℃ 2min 1 cycles 68℃ 7 min。(3)每個ddPCR反應(yīng)取出5μl于一新 微量離心管中,加5μl loading buffer,混勻,離心,置94℃變性2min。(6)下膠:(同測序膠)(7)干膠:在膠表面覆上保鮮膜,80℃干膠30min。(2)用一次性手術(shù)刀片在膠上切割差異條帶,加ddH2O 20μl,沸水浴15min,離心取上清為模
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