細(xì)胞與分子生物學(xué)-文庫吧在線文庫
【正文】 終體積 17 n 混勻后稍離心。(3）70℃孵育3min，冰浴2min后稍離心。 重復(fù)性高由于ACP 采用簡單容易的操作就可得到結(jié)果，避免了繁復(fù)步驟引入誤差的機會，使得試驗結(jié)果的可重復(fù)性大大提高。具體的引物結(jié)構(gòu)是（圖1）:退火控制引物由獨特的三部分組成，3＇端和5＇端部分由中間的調(diào)節(jié)部分連接。這些方法各具獨特優(yōu)點，但同時也具有其自身不同的缺陷。ACP DDRTPCR技術(shù) 摘 要：隨著基因組計劃的順利實施,大量的生物信息被解析,分離和鑒定差異表達(dá)基因已成為分子生物學(xué)研究的熱點。這些方法的發(fā)明與應(yīng)用，取得了許多成就，克隆了一系列的差異表達(dá)基因。 1 ACP技術(shù)的基本原理ACP技術(shù)通過一種特殊引物，使得特異性和靈敏度同時兼顧。[11]ACP 是基于PCR 和普通瓊脂糖電泳的一種技術(shù)，簡單容易操作。(2)混勻后稍離心。(11）將所有cDNA稀釋液 20℃保存待用。(2）預(yù)電泳30min。置X光片燈上比較尋找差異條帶。9．檢索分析。（6）PCR產(chǎn)物乙醇沉淀，10μlddH2O溶解。(5) 加樣2μl。⑤ PCR循環(huán)參數(shù)： 在GeneAmp PCR Systems 2400 amp。(7）75℃ 10min終止反應(yīng)后置冰上，稍離心。[13]3 ACP DDRTPCR技術(shù)的應(yīng)用ACP 技術(shù)在差異表達(dá)基因克隆中的應(yīng)用，目前報道的主要集中于哺乳動物（小鼠、牛和豬等）生殖發(fā)育相關(guān)的基因的研究[14]，通過該技術(shù)克隆了許多差異表達(dá)基因，為深入了解哺乳動物早期生殖發(fā)育相關(guān)的分子調(diào)控機制提供了有利證據(jù)。這三部分的具體作用為：3＇端的核心序列用于第一、第二輪擴增時，保證擴增的靈敏度；中間的調(diào)節(jié)部分是ACP技術(shù)實現(xiàn)的關(guān)鍵區(qū)域，作用主要有以下兩方面：①提高核心序列識別模板時的退火溫度，這是由于dI可以識別ATGC任意堿基，這樣就將核心序列的退火溫度提高到50℃左右，②連續(xù)的dI在較低溫度時，形成一個泡狀結(jié)構(gòu)，而使通用引物序列卷曲起來，不參與退火識別，而在較高溫度時形成線性分子，而使整條引物打開，參與退火識別；5＇端的通用調(diào)節(jié)序列是高溫識別的通用引物區(qū)。退火溫度的高低決定引物是否能與其互補鏈完全結(jié)合，還是有一個或多個堿基的錯配，因此通過調(diào)整退火溫度就可以增加引物與模板結(jié)合的特異性[6]。關(guān)鍵詞:：mRNA差異顯示技術(shù) 雜種優(yōu)勢 抗性 ACP技術(shù) Abstrac t: With the development of Genome Project and analysis ofmassive biological information, separation and identification of difference exp ressing gene have bee a hot issue in molecular biology research1 The mRNA differential disp lay (DDRTPCR) is one of effective methods for screening and isolating differentially expressed genes. The principles of
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