細(xì)胞與分子生物學(xué)-全文預(yù)覽
【正文】 板。6．以PCR產(chǎn)物為探針，標(biāo)記后進(jìn)行Northern雜交，證實基因的真實性。參考文獻(xiàn)：1 Liang P, Pardee A1 Science, 1992, 257: 967～97112 StraussM, Bauer D, Muller H1 Nucleic Acids Research, 1993, 21: 4272～428013 錢前,程式華,水稻遺傳學(xué)和功能基因組學(xué)[M ] 1北京:科學(xué)出版社, 200614 HuWJ, Zhang SH, Zhao Z, et al1 Plant Physiology and MolecularBiology, 2003, 29 (6) : 507～51415 李竑,沈思師,許智宏,等1實驗生物學(xué)報, 2003, 36 (1) : 54～6016 高風(fēng)華,譚學(xué)林1云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2006 (2) : 150～15317 EndoM, Tsuchiya T, WatanabeM, et al1 Genes Genet Syst, 2004, 79 (4) : 213～21618 Guimil S, Chang HS, Zhu T, et al1 PNAS, 2005, 102: 8066～807019 郭蕾,程英豪,王紫1 北京大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版) , 2006, 42 (2) : 175～79110 林碧源1用DNA芯片鑒定水稻花器官發(fā)育相關(guān)基因[碩士學(xué)位論文]1福州:福建農(nóng)林大學(xué), 2006111 辛業(yè)蕓,鄧小林,羅崇善1雜交水稻, 2007, 22 (6) : 1～5112 賀滉,郭安平, 孔華, 等1 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2007, 35 ( 5 ) : 1307～1309113 熊建華,陳學(xué)峰,張義平1 中國水稻科學(xué), 2004, 18 (2) : 94～98114 姜國強(qiáng),郭晉隆,孟慶偉,等1 中國農(nóng)業(yè)科學(xué), 2005, 38 ( 1) : 33～3718 / 8。8．DNA序列測定。（5）取PCR產(chǎn)物10μl 2%瓊脂糖電泳檢測。圖26顯示了ddPCR放射自顯影的X光片5．差異條帶回收再擴(kuò)增(1）X光片經(jīng)D72顯影、酸性定影液定影后，水洗晾干。(4) 停止預(yù)電泳，沖洗加樣孔。 4．電泳和放射自顯影(1）配制6%變性聚丙烯酰胺凝膠，灌注測序板。④ 開始PCR擴(kuò)增。(10)將72μl ddH2O分別加入A管中，混勻。(6）42℃孵育1h。PC為陽性對照。 PCR產(chǎn)物分布范圍廣產(chǎn)物條帶分布可為150 bp～2 kb，這樣不僅增加了鑒定差異表達(dá)基因的機(jī)會，也為預(yù)測基因的功能提供了更多重要的序列信息，足以滿足分析所需。通過普通脂糖凝膠電泳可以檢測PCR產(chǎn)物，且脂糖凝膠電泳顯示的條帶可以直接用于Northern 雜交分析。ACP技術(shù)主要由以下三個部分組成：逆轉(zhuǎn)錄合成第一條鏈和兩個不同階段的PCR 反應(yīng)；5＇端部分是通用引物序列。該方法則可較好地消除初始反應(yīng)的非特異性[8]。[5]引物退火時能否與其靶序列特異結(jié)合，是PCR能否成功擴(kuò)增的關(guān)鍵因素之一，因此引物
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