【正文】 現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細(xì)胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。 制備出的感受態(tài)細(xì)胞暫時(shí)不用時(shí)，可加入占總體積15%的無菌甘油或70℃保存（有效期6個(gè)月）。 在原核生物中，轉(zhuǎn)化是一個(gè)較普遍的現(xiàn)象，在細(xì)胞間轉(zhuǎn)化是否發(fā)生，一方面取決于供體菌與受體菌兩者在進(jìn)化過程中的親緣關(guān)系，另一方面還與受體菌是否處于一種感受狀態(tài)有著很大的關(guān)系。 此外，電泳緩沖液還有一個(gè)組分是EDTA，加入濃度為12mmol/L，目的是螯合Mg2+ 等離子，防止電泳時(shí)激活 DNA酶，此外還可防止Mg2+離子與核酸生成沉淀。 （2）增加樣品密度以保證DNA沉入加樣孔內(nèi)，一般上樣緩沖液中加入一定濃度的甘油或蔗糖，這樣可以增加樣品的比重。六、思考題電泳時(shí)所加電壓值如何確定?答：可根據(jù)DNA大小來確定，越大的電壓可低點(diǎn)，避免拖尾現(xiàn)象；越小的電壓可適當(dāng)大一點(diǎn)縮短電泳時(shí)間，避免時(shí)間過長(zhǎng)DNA擴(kuò)散導(dǎo)致條帶模糊。[注意] EB是強(qiáng)誘變劑并有中等毒性,配制和使用時(shí)都應(yīng)戴手套,并且不要把EB灑到桌面或地面上。 　　染色：,室溫下染色2025分鐘。注意每加完一個(gè)樣品要更換tip槍頭,以防止互相污染,注意上樣時(shí)要小心操作,避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。待膠完全凝固后撥出梳子,注意不要損傷梳底部的凝膠,然后向槽內(nèi)加入1TAE緩沖液至液面恰好沒過膠板上表面。加熱時(shí)應(yīng)蓋上封口膜,以減少水份蒸發(fā)。5．溴化乙錠(EB)溶液 10mg/ml(避光保存)，每100ml瓊脂糖凝膠加5μl貯存液，此試劑為強(qiáng)致癌物，要戴手套操作，避免污染環(huán)境。在提取質(zhì)粒過程中，除了超螺旋DNA外，還會(huì)產(chǎn)生其它形式的質(zhì)粒DNA。\實(shí)驗(yàn)三 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒DNA一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的方法和技術(shù)，了解質(zhì)粒DNA電泳條帶的多態(tài)性二、實(shí)驗(yàn)原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。3. 加入溶液II后作用時(shí)間不能長(zhǎng)，需要快速加入溶液III中和堿性溶液。5．用堿法分離質(zhì)粒DNA時(shí)，染色體DNA之所以可以被除去，是因?yàn)椋篊，而不能釋放七 思考題？答：葡萄糖：增加溶液的粘度，維持滲透壓，防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解。最好在用酚/氯仿抽提一次后再用氯仿抽提一次，以去除殘留的酚對(duì)質(zhì)粒的后繼實(shí)驗(yàn)，如酶切反應(yīng)等的不良影響。溶液終濃度為: K+ 3mol/L, Acˉ 5mol/L飽和酚、氯仿、TE緩沖液六 實(shí)驗(yàn)步驟1. eppendorf管中，5000 rpm 5 min收集菌體；2. 棄上清,將管倒置于吸水紙上盡量使液體流盡；　3.　菌體沉淀重懸浮于200μl溶液Ⅰ中；4. 按試劑配方配制溶液Ⅱ，加入新配制的溶液Ⅱ200μl, 蓋緊管口，快速溫和上下顛倒eppendorf管數(shù)次以混勻溶液(千萬不要振蕩，動(dòng)作輕柔)；5. 立即加入200μl預(yù)冷的溶液Ⅲ，蓋緊管口并溫和顛倒離心管數(shù)次，混勻溶液，置冰浴中10分鐘；6. 12000 rpm離心10分鐘；7. 加入等體積的酚/氯仿(1:1)，顛倒混勻， 12000 rpm 10分鐘；8. 小心吸取上清夜移入干凈eppendorf管中，加入2倍體積的無水乙醇，振蕩混勻后置于20℃冰箱中20分鐘；9. 12000 rpm離心10分鐘；10. 棄上清, 將管倒置于吸水紙上使所有液體流出，加入200μl預(yù)冷的70％乙醇洗滌沉淀。三 實(shí)驗(yàn)材料轉(zhuǎn)化質(zhì)粒pUC19后經(jīng)氨芐抗性篩選獲得的E. coli DH5α系列菌株四 實(shí)驗(yàn)設(shè)備微量取液器(100μl,1000μl)， 臺(tái)式高速離心機(jī)五 試劑溶液Ⅰ：50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L ()， 10mmol/L EDTA ()。二 實(shí)驗(yàn)原理本實(shí)驗(yàn)利用NaOH破壞菌體細(xì)胞使核酸物質(zhì)從細(xì)胞中釋放出來，因此稱為堿裂解法抽提。(11) 接種環(huán)蘸取菌液，密密劃線。(9) 取其中的一瓶直接倒培養(yǎng)皿，每皿倒入的量以剛好能在培養(yǎng)皿底鋪展成薄薄的一層即可。(7) 把裝有培養(yǎng)基三角瓶放入滅菌鍋中，蓋上鍋蓋，以對(duì)稱方式擰緊鍋蓋，打開排氣閥通電加熱，至有連續(xù)的白色水蒸氣從排氣閥排出時(shí)，關(guān)閉排氣閥。(4) 將100ml溶液分裝入兩個(gè)三角瓶，每瓶為50ml。實(shí)驗(yàn)一、菌株復(fù)壯與單菌落菌株的獲取一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)細(xì)菌培養(yǎng)的LB培養(yǎng)基及抗生素抗性篩選培養(yǎng)基的配制，掌握高壓滅菌和獲取細(xì)菌單菌落菌株兩種基本實(shí)驗(yàn)操作技能。(3) pH試紙檢測(cè)pH值，并用1 N NaOH或1 N 。并用記號(hào)筆在三角瓶上標(biāo)注各組標(biāo)記。(8) 取出三角瓶后，在酒精燈火焰旁進(jìn)行下述操作?？焖俪浞只靹蚝竺拷M倒1塊培養(yǎng)皿，在皿蓋上標(biāo)注“LB+”及各組的標(biāo)記。四、思考題(1) 在說明本實(shí)驗(yàn)所用的菌種時(shí)用到這樣的符號(hào)：“R，M，Amp”，這告訴我們關(guān)于該菌種的什么信息？(2) 在步驟7中，為何須待連續(xù)的白色水蒸氣從排氣閥排出時(shí)才能關(guān)閉排氣閥？當(dāng)滅菌完畢，為何又須待高壓鍋指示器指示壓力降為0時(shí)才能打開高壓鍋，而且操作次序必須是先打開排氣閥然后才能打開高壓鍋蓋？(3) 在步驟12中，為何需將涂有菌的培養(yǎng)皿倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行菌的培養(yǎng)？為什么不是正放呢？(4) 你預(yù)計(jì)該實(shí)驗(yàn)結(jié)果是什么，即兩種培養(yǎng)基上菌的生長(zhǎng)情況如何？實(shí)驗(yàn)二 堿裂解法小量提取質(zhì)粒DNA一 實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私馍倭抠|(zhì)粒制備方法與原理，掌握堿法小量提取質(zhì)粒DNA的操作步驟。從細(xì)菌中分離質(zhì)粒DNA的方法主要包括3個(gè)基本步驟：培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增；收集和裂解細(xì)胞；分離和純化質(zhì)粒DNA。溶液Ⅲ：5 mol/L KAc 60ml，冰醋酸 ， H2O ，定容至100ml, 并高壓滅菌。 2. 提取質(zhì)粒DNA過程中除去蛋白很重要,采用酚/氯仿去除蛋白效果較單獨(dú)用酚或氯仿好。4. 質(zhì)粒DNA分子小，所以沒有變性，染色體變性后不能復(fù)性。2. 溶液II為何必需即用即配？答：NaOH溶液長(zhǎng)時(shí)間配制存放會(huì)與空氣中的CO2反應(yīng)，降低PH值，影響對(duì)細(xì)胞的裂解作用。5. 最后DNA沉淀可以溶解在雙蒸水（ddH2O）中，但最好溶解于TE緩沖液中，為何？答：由于緩沖液是TrisH+/Tris，不存在金屬離子的干擾作用，故在提取或保存DNA時(shí)，大都采用TrisHCl系統(tǒng)，而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定DNA的活性。在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi),共價(jià)閉環(huán)質(zhì)粒以超螺旋形式存在。三、試劑與儀器設(shè)備：1. 質(zhì)粒DNA2. 瓊脂糖3. 6載樣buffer % 二甲苯青FF，% 溴酚藍(lán)，30% 甘油4．50TAE 電泳Buffer Tris， 冰醋酸，10ml mol/L EDTA()，加水至50ml。加熱過程中要不時(shí)搖動(dòng),使附于瓶壁上的瓊脂糖顆粒進(jìn)入