【正文】 比較糖苷內(nèi)切酶作用前后糖蛋白的分子量 核糖核酸酶 B中糖基含量測定 糖苷鍵酶 F作用前 糖苷鍵酶 F作用后 糖苷鍵酶 F：切斷 N連接五糖核心最內(nèi)側(cè)的GlcNAcGlcNAc，剩一個GlcNAc 糖基化類型及其位點的分析 ? 糖苷內(nèi)切酶和蛋白酶結(jié)合的方法 ? 先用糖苷內(nèi)切酶消化，再用蛋白酶消化，通過分析糖苷酶作用前后 MS發(fā)生位移的肽段，即可確定含糖基化的肽段 ? 結(jié)合串聯(lián)質(zhì)譜，可進(jìn)一步分析糖基化肽段的氨基酸序列，從而發(fā)現(xiàn)糖基化位點 核糖核酸酶 B中糖基化位點的分析 糖苷鍵酶 F作用前 糖苷鍵酶 F作用后 剩一個 GlcNAc 氨基酸序列的測定 m/z= TSAASSSNYCNQM RQHMDSSTSAASSSNYCNQMMKSRNLTKDRCKPVNTFVHE 糖基化類型的分析 ? 糖蛋白進(jìn)行蛋白酶切，得到含糖肽段，對肽段直接進(jìn)行 ESIMS/MS，以及 MALDITOFMS的 PSD，可以直接得到單糖碎片，從而確定糖鏈結(jié)構(gòu)。 ? 化學(xué)修飾的類型也很多，包括 磷酸化 （如核糖體蛋白的 Ser， Tyr和 Trp殘基常被磷酸化）； 糖基化 （如各種糖蛋白）； 泛素化 （要進(jìn)入蛋白酶體降解的蛋白）； 甲基化 （如組蛋白，肌蛋白），乙?；?（如組蛋白）， 羥基化 （如膠原蛋白）等。 ? 絲氨酸和蘇氨酸磷酸化肽段的質(zhì)量變化可能是 80Da，也可能是 98Da；酪氨酸磷酸化肽段只有 80Da的質(zhì)量數(shù)變化 PSD－ MALDI－ TOF－ MS ? PSD：源后衰變（ postsource decay），母離子在飛行中發(fā)生斷裂，丟失一個中性分子。 磷酸化蛋白質(zhì)的檢測 ? 32P放射性同位素法