【正文】 nM EC50=127nM 專 利 US20xx039884A115披露了 10 個化合物結(jié)構(gòu)，部分活性結(jié)果見下表（ 活性結(jié)果 EC50 為 TLR7 激動劑增加干擾素 IFN 釋放從而使 PBL/HCV 復(fù)制水平降低 50%時的濃度）。此化合物能夠計量依賴和給藥頻率依賴的誘導(dǎo)免疫生物標記物和 IFN 反應(yīng)。瑞喹莫德 （ Resiquimod）作為第二代藥物研發(fā)，但 20xx 年開發(fā)終止，原因是 其缺乏足夠的藥效。 McBrayer, T.。 Coats, S.。 Amblard, F.。 Van, N. N.。 medicinal chemistry letters 20xx, 23 (15), 44284435. 4. Donald, R. O. B., II。 Sun, .。 St Laurent, D.。 JinHua, S.。 Mengping, L.。 Michael, H. .。 Robert, A. F.。 Fukang, Y.。 Lawrence, B. S., HCV NS5A replication plex inhibitors. Part 2: Investigation of stilbene prolinamides. Bioanic amp。 Yuping, Q.。 Ramesh, K.。 Xiaohua, H.。 Scott, W. M.。 Rice, C., Structure of the zincbinding domain of an essential ponent of the hepatitis C virus replicase. Nature 20xx。 (g) Vermehren, J.。 Neddermann, P.。 (b) Scheel, T.。 然后發(fā)現(xiàn)將苯甲酸的苯環(huán)置換為吡啶環(huán)后，在 GT1a 和 GT1b 上的活性都得到提高。引入雜環(huán)，改變聯(lián)苯的角度，也對活性不理利。 構(gòu)效關(guān)系研究： 我們將化合物分成四個部分討論起構(gòu)效關(guān)系： 聯(lián)苯的 Linker/Core 結(jié)構(gòu)，這部分 已經(jīng) 被密集的考察過； 咪唑部分，研究很少； 脯氨酸部分，僅有氟化和三元環(huán)化有報道； 氨基酸及其 “ 蓋子 ” 部分 ，這部分 被密集考察過。 20 表一、代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) Phase 1b 1a BMS790052(daclatasvir) Bristol–Myers Squibb 9 50 3 GS5885 Gilead 4 34 2 ABT267（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US20xx172368A1 Abbott 5 14 2 GSK2336805， WO20xx091446A1 GlaxoSmithKline 8 44 2 ACH2928（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） Achillion 2–3 46 1 ACH3102（結(jié)構(gòu)未知，以專利中 代表性化合物代替） US20xx302538A1 Achillion 4 10 1 PPI461（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替）WO20xx096777A1 Presidio 10 210 1 21 續(xù)表一、代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) Phase 1b 1a PPI668（結(jié)構(gòu)未知，以專 利中代表性化合物代替） US20xx115855A1 Presidio 10 100 1 IDX719（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US20xx150827A1 Idenix 3 8 1 EDP239（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US20xx217261A1 Enanta/Novartis 4 34 PC MK8742（結(jié)構(gòu)未知，以專利中代表性化合物代替） US20xx083483A1 Merck 3 4 PC 還有另外一些結(jié)構(gòu)類型，僅挑選其中高活性代表化合物，見下表： 22 表二、其它代表性 NS5A 抑制劑 Comp Company In vitro EC50 (pM) 注 1b 1a Example 1002 BOEHRINGER INGELHEIM INTERNATIONA 15 230 Example 44 JANSSEN Ramp。 A） 三個方向的帶狀圖。最近研究又發(fā)現(xiàn)區(qū)域三（ 356447 殘基）在病毒組裝而不是 RNA 復(fù)制中起到關(guān)鍵作用。而 GT1型 HCV感染者屬于難治 性基因型， 中國的丙肝患者 多數(shù)屬于此類，占 HCV患者的 %，其中 GT1a為 %，而 GT1b為 %。 綜合上述總結(jié)， 我們認為 HCV 藥物最具潛力治療方式是將核苷聚合酶 抑制劑（ NS5B 抑制劑） 、 NS5A 抑制劑 、 蛋白酶抑制劑結(jié)合的療法。 途徑 /新穎性 藥物 進展 備 注（靶點等） 評價 風(fēng)險 潛力 RNA 復(fù)制 ★★★☆ Sofosbuvir (GS7977) Phase 3 Clinical NDA NS5B ★☆☆☆ ★★★★ Mericitabine (RG7128) Phase 2 Clinical NS5B ★★☆☆ ★★★☆ VX135 Phase 2 Clinical NS5B ★★★☆ ★★★☆ ABT333 Phase 3 Clinical NS5B PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ BI207127 Phase 3 Clinical ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ BMS791325 Phase 2 Clinical ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ Lomibuvir(VX222) Phase 2 Clinical NS5B ThumbII/B ★★★☆ ★★★☆ ABT072 Phase 2 Clinical PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ Setrobuvir (RG7790) Phase 2 Clinical PalmI/C ★★★☆ ★★★☆ GS9669 Phase 2 Clinical NS5B ThumbII/B ★★★☆ ★★★☆ TMC647055 Phase 2 Clinical NS5B ThumbI/A ★★★☆ ★★★☆ 10 、 HCV RNA 復(fù)制，涉及到宿主內(nèi)質(zhì)網(wǎng)以及病毒自身的 BS4B和 NS5A。 圖三、 HCV 的生命周期 6 三、 以生命周期劃分 HCV 治療藥物整理 對 HCV 不同周期時藥物所針對的不同 途徑，我們分四個階段進行總結(jié)，大體如下圖所示： 同時，我們對各個途徑的新穎性，各個靶點、藥物的風(fēng)險、 潛力進行了簡單的評級 ，黑色四星（ ★★★ ★ ）為最高， 白色四星（ ☆☆☆☆ ）最低。CE1E2p7NS2NS3NS4NS5339。但干擾素在全球并不能普遍獲得， 并不總是耐受良好，有些病毒基因型對干擾素的反應(yīng)優(yōu)于其它基因型，而且許多使用干擾素治療的人未完成其療程。 丙肝的潛伏 期為兩周至六個月。大約 7585%的新感染者出現(xiàn)慢性肝病，慢性感染者中 6070%會出現(xiàn)慢性肝病，520%會出現(xiàn)肝硬化， 15%會死于肝硬化或肝癌。 并且，臨床實踐證明，將多組分 、 不同機制的藥物連用的雞尾酒療法的效果最優(yōu)。 NS2 和 NS3 具有蛋白酶活性，參與病毒多聚蛋白前體的切割。 途徑 /新穎性 藥物 進展 備注（靶點等） 評價 風(fēng)險 潛力 病毒進入 ★★★☆ ITX5061 phase 2 靶點： SRBI 避免 耐藥 問題 ★★★☆ ★★★☆ 7 、 轉(zhuǎn)譯以及加工多聚蛋白 。 途徑 /新穎性 藥物 進展 備注（靶點等） 評價 風(fēng)險 潛力 釋放 ★★★☆ celgosivir Phase 2 Glucosidase inhibitors ★★★☆ ★★★☆ 、 其它方式 。 16 第二章 基于 NS5A 抑制劑的創(chuàng)新藥物設(shè)計 一、 前言： 世界范圍內(nèi)約 億人感染 HCV，并且目前針對 HCV 最理想的治療手段是每周注射 INFα 并結(jié)合 每天兩次口服利巴韋林（ RBV）。此非結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)也參與若干細胞過程，比如干擾素抵抗以及凋亡調(diào)節(jié)。而抗NS5A 抑制劑的突變位點也在 NS5A 的氨基端附近，位于蛋白和膜之間，表明抑制劑可能就結(jié)合在二聚體結(jié)合 面。 C） NS5A 結(jié)構(gòu)相對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的位置。 t1/2 (min)(HLM) Elimination rate constant (k) Cytotoxicity, CC50 (μM) PBM 19 Cytotoxicity, CC50 (μM) Vero 21 Cytotoxicity, CC50 (μM) CEM CLint(μL/min/mg protein) CYP1A2 (μM) IC50 100 CYP1A2 (μM) IC90 100 CYP3A4 (μM) IC50 177。而延長飽和烷基鏈的鏈長，活性降低程度中等。在片段 III 上的取代也表現(xiàn)出類似趨勢，小體積的疊氮取代活性 基本 保持，并且 （ 4R） 疊氮取代 在 PBM、 CEm和 Vero 細胞中沒有表現(xiàn)出任何毒性（ 100μM） ，（ 4S） 疊氮取代表現(xiàn)出毒性（略） 。而比較 30 與化合物 3 苯甲酰胺和苯胺環(huán)的構(gòu)想， 發(fā)現(xiàn)相差很大，推測，可能化合物 3 的構(gòu)象與 NS5A GT1b的生物構(gòu)象較符合，而 30 則與 NS5A GT1a 的較符合。 von Hahn, T., Novel therapies for hepatitis C one pill fits all? Nature reviews. Drug discovery 20xx。 Luc, J. W. v. d. L., New targets for treatment against HCV infection. Best Practice amp。 (i) Lange, C.。 Hickey, M.。 Min, G.。 Lawrence, B. S., Inhibitors of HCV NS5A: From Iminothiazolidinones to Symmetrical Stilbenes. ACS Medicinal Chemistry Letters 20xx, 2。 Mengping, L.。 JinHua, S.。 Van, N. N.。 Peter, T. N.。 Andrew, C. G.。 Hua, F.。 Peter, T. N.。 Xuejie, Y.。 Good, A.。 Lemm, J.。 Julie, A. L.。 Lawrence, B. S.。 Liu, P.。 Zhou, L.。 Coats, S.。以，每周兩次，連續(xù)四周，在此計量水平下化合物能被很好的耐受，但是沒有表現(xiàn)出有意義的病毒載量和顯著的系統(tǒng)性細胞因子和生物標記物水平的改變。一般化合物結(jié)構(gòu)見下圖： 33 、 1取代 吡唑啉酮 （ 1Substituted Pyrazolo(3,4C) Ring） 類 在專利 US20xx163533A111中， Coley Pharmaceutical Group, 以下骨架： 骨架進一步細化，又分為以下幾種： 編號 結(jié)構(gòu) 編號 結(jié)構(gòu) 1 2 3 4 5 6 34 7 8 9 此類化合物進行了如下生物活性測試，但并無結(jié)果公布。其中， SM276001在 20xx 年作為 HBV 和 HCV 的治療藥物處在臨床前研究。 在專利 US20xx087443A120， Aamp。現(xiàn)將部分化合物活性列出 （ TLR7 HEK293） ： 編號 結(jié)構(gòu) 編號 結(jié)構(gòu) 1 EC50= 3 EC50= 50 15 EC50= 16 EC50= 17 EC50= 18 EC50= 在專利 US20xx306610A124中， Aamp。 編號 結(jié)構(gòu) 編號 結(jié)構(gòu) 57 1 ED50=30 nM 2 ED50=5 nM 4 ED50=72 nM 5 ED50=42 nM 6 ED50=17 nM 注：化合物 1228 在 10μM 濃度下對 HCV 的復(fù)制都表現(xiàn)出大于 50%的抑制。但隨后，由于在動物毒性研究中發(fā)現(xiàn)其會劑量依賴導(dǎo)致強烈的免疫刺激， Anadys 終止了針對 HCV 病人的一個 28 天的Ⅰ b 期臨床項目。 68 其活性結(jié)果如下表所示： 項目 活性報