【正文】 采用了上述流動(dòng)相系統(tǒng)，僅在醋酸銨的濃度、比例以及 pH值等條件進(jìn)行了調(diào)整。并在流動(dòng)相中添加了少量的 EDTA，用經(jīng)于競(jìng)爭(zhēng)性抑制色譜填料中殘留重金屬離子與四環(huán)素類及雜質(zhì)的絡(luò)合，l 、 、 、 ）分別不得大于對(duì)照溶液主峰面積的 倍（ % ）、 （ % ）、 （ %）、 （ % ）、 （ % ），其他各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的 （ % ）。l 如：鹽酸多西環(huán)素《歐洲藥典》 米諾環(huán)素、土霉素、多西環(huán)素用已知雜質(zhì)對(duì)照品定位，用不加校正因子的自身對(duì)照法計(jì)算，l 色譜條件同修改后含量測(cè)定的色譜條件（見表），l l 本版四環(huán)類抗生素修訂情況概要l l l 四環(huán)類抗生素都是結(jié)晶型物質(zhì)，分子內(nèi)含有蒽酮類發(fā)色團(tuán)，一般為黃色結(jié)晶性粉末，干燥的四環(huán)類游離堿和它們的鹽類都比較穩(wěn)定，但在貯存中遇光促使顏色變深，可能有降解物產(chǎn)生。本品分子結(jié)構(gòu)中具有多個(gè)不對(duì)稱碳原子，因此有旋光性。l （ 3）硫酸新霉素 l BP2023阿米卡星項(xiàng)下系統(tǒng)適用性色譜l l l l 、組分l l 例 2.本版藥典對(duì)氨基糖苷類抗生素滴眼液中常用防腐劑如羥苯乙酯、丙酯、苯扎氯胺等進(jìn)行檢查。本版藥典將其擴(kuò)大為 4個(gè)滴眼液，l 每 1g供試品中，含 10μm以上的微粒不得過 6000粒，含 25μm以上的微粒不得過600粒。H），應(yīng)符合規(guī)定。l l 例 2.l 一般采用 TLC法與硫酸鹽反應(yīng)，l 本類藥物結(jié)構(gòu)中都有以氨基環(huán)己醇與氨基糖縮合而成的苷，結(jié)構(gòu)中沒有共軛雙鍵所以沒有可供分析用的特征的紫外吸收僅有末端吸收，結(jié)構(gòu)中具有不對(duì)稱碳原子有旋光性。,l 有關(guān)物質(zhì)l 除琥乙紅霉素仍采用 TLC法外， 2023年版采用 TLC法的品種均修訂為 HPLC法，共 26個(gè)品種采用 HPLC法；l 完善了 HPLC系統(tǒng)適用性要求，明確主峰與指定雜質(zhì)的分離度，確保方法的有效性和準(zhǔn)確性；l l 增加特定雜質(zhì)的控制（如阿奇霉素）和總雜的控制（如羅紅霉素）；l 首次對(duì)紅霉素及其衍生物有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)方法進(jìn)行了統(tǒng)一。具體見 表 。它們均為多組分抗生素。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。 l 如：拉氧頭孢鈉l 【含量測(cè)定】 照高效液相色譜法（附錄 Ⅴ D）測(cè)定。m以上的微粒不得過 600粒；l 規(guī)格 （包括 ）的制劑按每 1個(gè)供試品容器中含 10181。方法也收載在 2023年版藥典二部（附錄 Ⅷ L ） .l 如 :頭孢地嗪鈉、l 頭孢呋辛鈉、l 頭孢孟多酯鈉、l 氨芐西林鈉等。l 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取正丙醇適量，用二甲基亞砜稀釋制成每 1ml中約含 200μg 的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。 ％頭孢唑 林 鈉 CZSS051142（奧奇特） 均 值 ： % (n=3)　均 值 ： % (n=3)　177。% 頭孢 拉定 均 值 F=10 3 (n=5)　均 值 ： F=10 3(n=5)177。l 根據(jù)上面公式，分離度隨著聚合物峰高的增大而增大，故加入藍(lán)色葡聚糖 2023的量應(yīng)該有一定的要求，在研究方法時(shí)，根據(jù)品種項(xiàng)下規(guī)定的限度及藍(lán)色葡聚糖 2023在該系統(tǒng)中的響應(yīng)值 ,－般加入的量為聚合物規(guī)定限度響應(yīng)值的 12倍即可。因此在研究建立新的方法時(shí)，我們?nèi)圆捎媚z色譜的分離模式，并采用原方法中的自身對(duì)照外標(biāo)法，進(jìn)行高分子聚合物雜質(zhì)的測(cè)定。凝膠色 譜測(cè) 定高分子聚合物 l 頭孢拉定、頭孢氨芐、頭孢羥氨芐中 7氨基去乙酰氧基頭孢烷酸（ 7ADCA）及頭孢哌酮鈉中雜質(zhì) A等均采用雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法。l l 其中有阿莫西林、阿莫西林鈉、青霉素鈉 (鉀 )、青霉素 V鉀、氨芐西林、氨芐西林鈉、氨曲南等原料及其制劑共 27個(gè)品種采用梯度洗脫方法。l 少數(shù)品種有用 UV鑒別。制劑：l 氨曲南 ；l 載 情況 ： 表 頭孢 菌素 類 品種收 載 情況 收 載 情況 原料 制劑 總計(jì)2023年版 藥 典收 載 品種 27 48 75新增品種 11 19 30l 頭孢菌素類新增品種：l 原料： 制劑：l l l l l l ； ；l 顆 粒l ； l l ； ；l ； 顆 粒l l ； 18. 頭孢泊肟酯膠囊；l 品種 收 載 情況 原料 制劑 總計(jì)青霉素類 2023年版 藥 典收 載 品種新增品種 16 2 28 6 44 8酶 抑制劑 類 2023年版 藥 典收 載 品種新增品種 4 1 4 1碳青霉烯類 2023年版 藥 典收 載 品種新增品種 1 1 2單環(huán) β 內(nèi)酰 胺 類2023年版 藥 典收 載 品種新增品種 1 1 1 1 2 2表 青霉素 類 ， 酶 抑制 劑 ，碳青霉 烯類 與單環(huán) β內(nèi) 酰 胺 類 品種收 載 情況l 青霉素類與酶抑制劑 :l 新增品種：l 本版藥典增加球狀蛋白親水硅膠為色譜柱填充劑的高分子聚合物分析方法l 12. 2023年版藥典氨基糖苷類、大環(huán)內(nèi)酯類的含量測(cè)定方法為微生物檢定法的管碟法，本版藥典增加微生物檢定法濁度法，二法并列。l 部分品種采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，該方法可提高檢測(cè)靈敏度。l 檢出的雜質(zhì)與 。以免純度較低品種采用自身對(duì)照法引起的結(jié)果偏高而影響正確性 。l 對(duì)檢查有關(guān)物質(zhì)與含量測(cè)定的 HPLC方法的系統(tǒng)適用性試驗(yàn)進(jìn)行修改并完善。 用 HPLCELSD替代 TLC檢查有關(guān)物質(zhì)與組分，可 提高檢測(cè)靈敏度。有利于基層檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇。 妥布霉素及制劑的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定等。l l 該混合對(duì)照品用于系統(tǒng)適用性試驗(yàn)，測(cè)得的色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致。l 5. 喹諾酮類抗生素的有關(guān)物質(zhì)檢查， EP、 BP、USP均采用 TLC、 HPLC兩種方法進(jìn)行控制。l 8. 紅霉素類經(jīng)對(duì)幾種 HPLC方法比較后，采用同一 HPLC方法檢查紅霉素與其衍生物以及制劑中紅霉素 A、 B、 C及有關(guān)物質(zhì)。在原來 21個(gè)品種基礎(chǔ)上增加至 42個(gè)品種 .l 2023年版藥典 β 內(nèi)酰胺類抗生素品種進(jìn)行高分子雜質(zhì)檢查時(shí)，由于該方法的分析周期較長(zhǎng)，本版藥典對(duì)測(cè)定方法進(jìn)一步完善，采用直徑較細(xì)內(nèi)徑為 1cm,長(zhǎng)為 30cm的玻璃柱作為色譜柱。l 。l l 單環(huán) β 內(nèi)酰胺類新增品種：l 原料： l l 檢查溶液的澄清度與顏色是控制 β 內(nèi)酰胺類注射用的原料藥與制劑內(nèi)在質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。其中有頭孢地尼、頭孢克洛、頭孢唑啉鈉、 頭孢西丁鈉、 頭孢克肟、頭孢噻肟鈉、 頭孢噻吩鈉、 拉氧頭孢鈉、 頭孢呋辛鈉、頭孢丙烯、頭孢氨芐、頭孢羥氨芐及其制劑共 29個(gè)品種用 HPLC法梯度洗脫。l 如：頭孢丙烯規(guī)定：l 頭孢丙烯 (Z)異構(gòu)體峰的保留時(shí)間約為 23～ 30分鐘，頭孢丙烯（ E）異構(gòu)體峰的保留時(shí)間約為 30～ 40分鐘，理論板數(shù)按頭孢丙烯（ Z）異構(gòu)體峰計(jì)算應(yīng)不小于 10000， 頭孢丙烯（ Z）異構(gòu)體峰與相鄰雜質(zhì)峰間的分離度應(yīng)符合要求。l 高分子聚合物l 高分子聚合物是 β 內(nèi)酰胺類抗生素臨床過敏反應(yīng)的一個(gè)主要因素，故在注射用原料及其制劑標(biāo)準(zhǔn)中增加檢查高分子聚合物，控制一定的限度，對(duì)臨床用藥安全有效具有重大的意義。 l 但在 2023年版藥典 β 內(nèi)酰胺類抗生素品種進(jìn)行高分子雜質(zhì)檢查時(shí)，由于該方法的分析周期較長(zhǎng)，加之在執(zhí)行過程中涉及到較多生產(chǎn)廠與檢驗(yàn)部門，工作量大幅度增加。以 sephadexG10為填充劑，柱內(nèi)徑的縮小，柱床體積隨之也變小。阿莫西林樣品分析全程色譜圖圖 阿莫西林分離度計(jì)算色譜圖 圖 頭孢他啶樣品分析全程色譜圖 (流速:)圖 頭孢他啶分離度計(jì)算色譜圖 l 方法比較 l 用 2023年版藥典方法和改進(jìn)后的方法測(cè)定2023年版藥典收載 11個(gè)品種的 F值與高聚物的含量 ,結(jié)果基本一致（見表 ,）。本版藥典部分品種溶媒殘留檢查項(xiàng)下采用標(biāo)準(zhǔn)加入法計(jì)算，該方法可提高檢測(cè)靈敏度。l 對(duì)照品溶液的制備 根據(jù)試驗(yàn)確定的具體檢測(cè)對(duì)象，制備對(duì)照品溶液。l 不溶性微粒與可見異物 l 供注射用的原料藥增加不溶性微粒與可見異物檢查 ,以保證制劑能符合注射劑的要求。l 含量測(cè)定l 本類共 127個(gè)品種的含量測(cè)定均采用 HPLC法或 HPLC梯度洗脫。l 測(cè)定法 取本品適量（約相當(dāng)于拉氧頭孢 25mg），精密稱定，置 100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取 10μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取拉氧頭孢對(duì)照品適量，同法測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中 C20H20N6O9S的含量。 ） 甲醇（ 80： 20）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為 270nm.取經(jīng)紫外光燈（ 254nm）下照射 24小時(shí)后的本品適量，加流動(dòng)相溶解并稀釋制成每 1ml中約含1mg的溶液，量取 20μl 注入液相色譜儀，記錄色譜圖，氨曲南峰與氨曲南 E異構(gòu)體峰（相對(duì)保留時(shí)間約 ）的分離度應(yīng)大于 。l l l 采用 HPLC法測(cè)定，組分測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)圖譜由中檢所提供，作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的參比。同 紅 霉素按 紅 霉素 C、 紅 霉素 A、 雜質(zhì) 紅 霉素 B、 紅 霉素 烯醇 醚 峰的 順 序出峰（必要時(shí) ，用 紅 霉素 C、 紅 霉素 B、 紅 霉素 烯 醇 醚對(duì) 照品進(jìn) 行峰定位）。 劑 扣除相 對(duì) 保留 時(shí)間 。l 如 :麥白霉素片 ,麥白霉素膠囊 ,吉他霉素片l 溶出度介質(zhì)可加酶，如麥白霉素膠囊和羅紅霉素膠囊，后者還規(guī)定了胰酶的加量以單位表示（每 1ml中含胰蛋白酶不少于 位、胰淀粉酶不少于 不少于 ） ,更為科學(xué)合理。l 2023版藥典采用管碟法，本版藥典增加濁度法，兩法并列供選擇，在附錄中明確仲裁方法為 管碟法；l 阿奇霉素系列由微生物法修訂為 HPLC法，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)規(guī)定 “ 標(biāo)準(zhǔn)品溶液色譜圖應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜一致 ” ；l 本類抗生素相對(duì)其他類抗生素而言穩(wěn)定性較好，制劑為注射液品種較多 。l l 【鑒別】 （ 4）硫酸鹽鑒別反應(yīng)。以上（ 1）、（ 2）兩項(xiàng)可選做一項(xiàng) 。l 可見異物 l 不溶性微粒 取本品，加 ％無菌氯化鈉溶液制成每1ml中含阿米卡星 8mg的供試液，經(jīng)薄膜過濾法處理，用 －蛋白胨緩沖液分次沖洗（每膜不少于 500ml），以金黃色葡萄球菌為陽性對(duì)照菌，依法檢查（附錄 XI兩種表示方法并列 :l 防腐劑 妥布霉素滴眼液 有關(guān)物質(zhì)、組分、特定雜質(zhì)檢查方法修改為HPLCELSD方法的品種較多 ，l 但有些品種如新霉素、鹽酸大觀霉素仍采用TLC法。幾乎對(duì)所有的化合物均有響應(yīng)，流動(dòng)相和環(huán)境溫度對(duì)響應(yīng)值的影響小 ,適宜用于無特征紫外吸收化合物的定性和定量分析，l 盡管 ELSD檢測(cè)器在靈敏度上不如 UV檢測(cè)器，但較之 TLC其靈敏度要高得多。l l 硫酸西索霉素、l 硫酸慶大霉素、l 硫酸奈替米星l 硫酸依替米星l 均采用 HPLCELSD方法測(cè)定硫酸鹽含量。結(jié)構(gòu)特點(diǎn) l 四環(huán)素類抗生素為四駢苯或萘駢萘的衍生物， l l 鑒別 l l 金霉素用雜質(zhì)對(duì)照品外標(biāo)法計(jì)算已知雜質(zhì)的含量。(β多西環(huán)素，又稱為 6表多西環(huán)素， 6epidoxycycline)，是合成過程中美他環(huán)素轉(zhuǎn)變?yōu)槎辔鳝h(huán)素時(shí)產(chǎn)生的 6差向副產(chǎn)物，雜質(zhì) B美他環(huán)素是合成中間體，雜質(zhì) E土霉素為合成起始原料，雜質(zhì) F可能是土霉素中的雜質(zhì) 2乙酰 2去酰胺土霉素在合成多西環(huán)素過程的共存物，雜質(zhì) C、Dl 如：鹽酸土霉素《歐洲藥典》 ： 4差向土霉素 ≤% ，四環(huán)素 ≤% ， 2乙酰 2去酰胺土霉素 ≤% ，其他雜質(zhì)總和 ≤% ，l l l 添加了少量三乙胺可以封閉柱填料中部分殘余硅羥基的影響，減少拖尾。L 1EDTA鈉鹽 三乙胺（ 100： 10： 1）用醋酸調(diào)節(jié) pH值至 ]－乙腈 (88： 12) 鹽酸四環(huán)素醋酸鹽緩沖液 [土霉素分離圖l 幾點(diǎn)注意： l (3)