【正文】 象 。1℃ ↓ 18～ 24hn 挑取可疑菌落 5～ 10個 ,氧化酶陰性 ,革蘭氏陰性桿菌 接種 TSIn ↓n MUGLSTn 36177。n 二是因為菌株的抗原性發(fā)育不良，特別是 H抗原。血清學(xué)分型血清學(xué)分型n 沙門氏菌具有 O抗原、 K抗原和 H抗原?！恫苁舷到y(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊第二版》于 2023年出版，法默應(yīng)邀作為該書中《腸桿菌科》的作者。n 不過，甲型副傷寒血清型是賴氨酸陰性的，沙門氏菌 IV和 V是氰化鉀陽性的。n 關(guān)于食品中是否帶有沙門氏菌，各個國家的標(biāo)準(zhǔn)基本上是一樣的，即： 25克無。n 2) 選擇菌落數(shù)在 15~150之間的稀釋度，平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之；n 3) 如果所有稀釋度測試片上的菌落數(shù)都小于 15, 則計數(shù)稀釋度最低的測試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之；n 4) 如果所有稀釋度的測試片上均無菌落生長，則以 ()1乘以最低稀釋倍數(shù)報告之；n 5) 如果最高稀釋度的菌落數(shù)大于 150個時，計數(shù)最高稀釋度的測試片上的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報告之；n 6) 計數(shù)菌落數(shù)大于 150個的測試片時，可計數(shù)一個或兩個具有代表性的方格內(nèi)的菌落數(shù)，換算成單個方格內(nèi)的菌落數(shù)后乘以 20即為測試片上估算的菌落數(shù) (圓形生長面積為 20 cm2)。拿起壓板， 靜置至少 1分鐘以使培養(yǎng)基凝固。結(jié)果報告單位不同n 原方法： MPN / 100g(mL)n 現(xiàn)方法： MPN / g(mL)大腸菌群 PetrifilmTM測試片法n PetrifilmTM大腸菌群測試片 是一種預(yù)先制備好的培養(yǎng)基系統(tǒng)，含有 VRB 培養(yǎng)基，冷水可溶性凝膠和 TTC指示劑，可增強菌落計數(shù)效果。n API 20E生化鑒定試劑盒：刮取 3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板上的單個菌落，用 3％氯化鈉溶液制備成濁度適當(dāng)?shù)募?xì)菌懸浮液，使用API 20E生化鑒定試劑盒鑒定。1 ℃ 培養(yǎng) 24 h，在加 VP試劑前應(yīng)先觀察動力。1 ℃ 培養(yǎng) 18 h～ 24 h。置 36 ℃ 177。如為帶殼貝類或甲殼類，則應(yīng)先在自來水中洗刷外殼并甩干表面水分，然后以無菌操作打開外殼，按上述要求取相應(yīng)部分。食源性致病菌檢驗技術(shù)及質(zhì)量控制 內(nèi)容 O157 :H7/NM檢驗創(chuàng)傷弧菌檢驗n 沒有國標(biāo)n 食物中毒診斷n 國外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)n 美國 FDA BAM網(wǎng)絡(luò)版 第 9章 弧菌 2023n NMKL 食品中致病性弧菌的檢驗 1997n 加拿大 魚和海產(chǎn)品創(chuàng)傷弧菌的分離計數(shù) MFLP73 1995n 日本食品衛(wèi)生檢查指征 2023n 選擇性增菌液 堿性蛋白胨水n 選擇性分離培養(yǎng)基 硫代硫酸鹽－檸檬酸鹽－膽鹽－蔗糖（ TCBS ）瓊脂 改良纖維二糖 多粘菌素 B多粘菌素 E（ mCPC）瓊脂和纖維二糖 多粘菌素 E（ CC）瓊脂平板 ―探針克隆雜交顯示，兩種平板上均有 95％以上的可疑菌落為創(chuàng)傷弧菌n 引起胃腸炎、傷口感染和原發(fā)性敗血癥n 人類感染是因為食用生或半生的受污染海產(chǎn)品 ,或是因為傷口接觸了帶菌的海水或海洋動物n 罹患肝病、血色病的個體易感者及免疫功能低下者 ,一旦感染創(chuàng)傷弧菌 ,更容易發(fā)生致命的傷口感染和原發(fā)性敗血癥 ,后者的病死率超過 50％n 創(chuàng)傷弧菌是美國海產(chǎn)品消費引起死亡的首要原因 ,美國州際貝類衛(wèi)生委員會規(guī)定 ,收獲后經(jīng)處理的牡蠣中創(chuàng)傷弧菌限量不超過 30 CFU/g。貝類取全部內(nèi)容物，包括貝肉和體液；甲殼類取整個動物，或者動物的中心部分，包括腸和鰓。n 根據(jù)對檢樣污染情況的估計，選擇三個連續(xù)的適宜稀釋度，每個稀釋度接種三支含有 9 mL 3％氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種 1 mL。純培養(yǎng)n 挑取三個或以上的可疑菌落，劃線 3％氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平板， 36 ℃ 177。n VP試驗：以接種針由 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面挑取少許培養(yǎng)物穿刺 3％氯化鈉 MRVP培養(yǎng)基， 36 ℃ 177。隔夜培養(yǎng)物進行 ONPG試驗。 還有就是 LST更容易觀察。將 PetrifilmTM大腸菌群測試片置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用吸管吸取 1mL樣液垂直滴加在測試片的中央， 將上層膜緩慢蓋下，避免氣泡產(chǎn)生和上層膜直接落下 ，把壓板（平面底朝下）放置在上層膜中央，輕輕地壓下，使樣液均勻覆蓋于圓形的培養(yǎng)面積上，切勿扭轉(zhuǎn)壓板。結(jié)果報告n 1) 選取菌落數(shù)在 15~150之間的測試片作為計數(shù)標(biāo)準(zhǔn) 。沙門氏菌檢驗方法的步驟沙門氏菌檢驗方法的步驟n 沙門氏菌檢驗方法的步驟是：n 增菌培養(yǎng)n 接種鑒別培養(yǎng)基，分離菌落n 生化試驗，鑒定到屬和種；也可以用噬菌體試驗鑒定到屬n 血清學(xué)分型增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng)n 首先是增菌培養(yǎng)基的靈敏度。沙門氏菌屬和有關(guān)細(xì)菌的鑒別沙門氏菌屬和有關(guān)細(xì)菌的鑒別 1n 沙門氏菌是賴氨酸陽性、氰化鉀和 酶陰性的；而弗勞地氏檸檬酸桿菌群則是賴氨酸陰性、氰化鉀和 。特別是美國學(xué)者法默 （Farmer, III）于 1986年提出了包括腸桿菌科細(xì)菌近 100個種的 47項生化特性。補充生化試驗補充生化試驗n 試驗者對于所獲得的生化試驗結(jié)果有懷疑時，可用手工方法進行補充試驗，直至認(rèn)為試驗結(jié)果可信為止。應(yīng)當(dāng)不要用灼熱的接種環(huán)去挑取血清。1℃ 18～ 24h n 陽性 報告n CTSMAC平板和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板n 36177。必要時將混合菌落分純。3. 初步生化試驗n 在 CTSMAC和改良 CHROMagar O157顯色瓊脂平板上挑取 5～ 10個典型或可疑菌落，分別接種 TSI瓊脂，同時接種 MUGLST肉湯，于36177。對于 H7因子血清不凝集者，應(yīng)穿刺接種半固體瓊脂管，檢查動力，經(jīng)連續(xù)傳代 3次，動力試驗陰性， H7因子血清凝集陰性者，確定為無動力株。n 磁珠在加入前在混旋器上短暫混勻，不可劇烈震蕩，磁珠在加入前在混旋器上短暫混勻，不可劇烈震蕩，避免產(chǎn)生泡沫。加樣后立即混勻。在 3min內(nèi)不斷地傾斜磁板架，確保懸液中和蓋子上的免疫磁珠全部被收集起來，此時，在 Eppendorff管壁中間明顯可見的圓形或橢圓形棕色聚物。n ：從磁板架上移走磁板，在每個Eppendorff中加入 1mL PBSTween20洗液，轉(zhuǎn)動磁板架 3次以上，洗滌免疫磁珠混合物。待瓊脂表面水分完全吸收后，翻轉(zhuǎn)平板，于 36177。在 37℃ 、含氯化鈉 3～ 4%的環(huán)境中生長最好。n 魚類和頭足類動物取表面組織、腸或鰓。n 另取 1 mL滅菌吸管，按上條操作依次制備 10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用 1支 1mL滅菌吸管。n 典型的副溶血性弧菌在 TCBS上呈現(xiàn)為圓的、半透明的、表面光滑的綠色菌落，用接種環(huán)輕觸，有類似口香糖的質(zhì)感，直徑 2 mm～ 3 mm。n 挑取純培養(yǎng)的單個可疑菌落，轉(zhuǎn)種 3％氯化鈉三糖鐵瓊脂斜面并穿刺底層， 36 ℃ 177。隔夜培養(yǎng)物進行 ONPG試驗。生化特性n 不酵解不氧化碳水化合物；n 氧化酶、觸酶陽性； 抗原結(jié)構(gòu)和血清分型n 菌體抗原（ O）抗原：可分成 45個以上血清型， 第 1 12和 18血清型最為常見 ；n 鞭毛抗原（ H)抗原；n 包膜抗原（ K）抗原。 1 ℃ 24 h～ 48 h樣品處理n 25g+100ml Bolton，均質(zhì) 1～ 2min，取濾液進行培養(yǎng)；空腸彎曲菌對下列因素非常敏感n 在空氣中的暴露；n 干燥；n 低 pH；n 加熱；n 冷凍；n 鹽；n 長期的貯存。n 如果振蕩培養(yǎng) 24小時即可；n 如果靜置培養(yǎng)需 48小時；n 振蕩幅度 100rpm。b 海鷗彎曲菌的不同菌株，分別表現(xiàn)為敏感或抗性。1℃ ， 18 h177。分離顯色培養(yǎng)基的基本原理相似，二者都是根據(jù) ES能產(chǎn)生 α 葡萄糖苷酶，分解底物XaGlc產(chǎn)生有色菌落。質(zhì)量控制n 參加衛(wèi)生部及有關(guān)部門組織的實驗室檢測能力培訓(xùn)、驗證、比對及考核n 接受衛(wèi)生部及有關(guān)部門對我省監(jiān)測工作的督導(dǎo)檢查n 衛(wèi)生廳制定我省質(zhì)量控制考核辦法，并組織實施n 省疾病預(yù)防控制中心負(fù)責(zé)進行檢驗技術(shù)和數(shù)據(jù)上報的培訓(xùn)質(zhì)控考核n 發(fā)給未知樣品，在規(guī)定的時間內(nèi)，在室內(nèi)質(zhì)控的基礎(chǔ)上，考核實驗室真實的技術(shù)水平和熟練程度，按時上報結(jié)果。n 4. 15種質(zhì)控樣品應(yīng)盡量覆蓋各個省，省內(nèi)各個檢驗機構(gòu)的質(zhì)控樣品應(yīng)盡量做到互不相同。n 3. 檢驗機構(gòu)應(yīng)做好實驗室內(nèi)質(zhì)量控制，并參照中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)食品衛(wèi)生檢驗微生物學(xué)部分（ GB/T 47892023）相關(guān)章節(jié)對質(zhì)控樣品進行檢驗，按照相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)方法進行增菌培養(yǎng)，將增菌培養(yǎng)物劃線接種于相應(yīng)的平板上分離，挑取單個菌落進行生