【正文】 冷柜 青島澳柯瑪股份有限公司 BD\C19110 圓底燒瓶 北京市光明醫(yī)療儀器廠 250mL11 三口燒瓶 北京市光明醫(yī)療儀器廠 500mL12 三口燒瓶 北京市光明醫(yī)療儀器廠 250mL13 量筒 北京市光明醫(yī)療儀器廠 200mL14 分液漏斗 北京市光明醫(yī)療儀器廠15 滴液漏斗 北京市光明醫(yī)療儀器廠16 燒杯 北京市光明醫(yī)療儀器廠 100mL17 布氏漏斗 北京市光明醫(yī)療儀器廠18 錐形瓶 北京市光明醫(yī)療儀器廠 100mL19 燒杯 北京市光明醫(yī)療儀器廠 250mL蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文10 原料的制備 C6 羥基保護（蔗糖6乙酸酯的合成）的探索干燥蔗糖（50 g, mol，真空干燥箱中 60 ℃干燥 24 小時）于三頸燒瓶中，加200 mL DMF,緩慢滴加原乙酸三甲酯（21 mL, mol）及對甲苯磺酸（300 mg, mol）溶液，劇烈攪拌，室溫下反應(yīng) 150 min,溶液無色透明，加蒸餾水（20 mL）,繼續(xù)攪拌反應(yīng) 30 min,加特丁胺（5 mL, mol）,繼續(xù)攪拌反應(yīng) 70 min,pH 值約為 9，中和、過濾，濾液用甲苯共蒸發(fā)法將 DMF 蒸出，殘留物結(jié)晶得到白色晶體 A。2 ℃，反應(yīng)在 40kHz 的超聲波冰水浴中進行。 實驗研究內(nèi)容探索蔗糖酯類陽離子類脂中間體（鹵化）的合成研究（合成路線的設(shè)計、選擇、產(chǎn)品的提純） ；研究產(chǎn)物結(jié)構(gòu)確證方法；研究各因素對蔗糖酯類陽離子類脂的中間體鹵化的影響，設(shè)計單因素實驗和正交試驗；確認目標(biāo)產(chǎn)物的收率為指標(biāo)確定最佳條件 C6 羥基保護（蔗糖6乙酸酯的合成）的探索；蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文42 合成路線設(shè)計 初步設(shè)計鹵化反應(yīng)的合成路線 通過中外文獻的檢索為發(fā)現(xiàn)相關(guān)蔗糖酯類陽離子類脂鹵化反應(yīng)的文獻，再結(jié)合中外文獻的基礎(chǔ)上采用模擬推斷法自行設(shè)計了兩種方案如下： 初步設(shè)計以 DMF 為溶劑的 C6 位羥基選擇性鹵化反應(yīng)酯化物（ mmol）的 DMF（60 mL）溶液中加入三苯基膦 PH3P( g, 23mmol)以及咪唑（ g, mmol）和碘 I2( g, mmol),混合物加熱至 80 ℃反應(yīng) h,產(chǎn)物視性質(zhì)純化處理。陽離子類脂作為一種表面活性劑，由于其具有較好的生物活性所以其在基因治療方面得到廣泛的應(yīng)用 1987 年，F(xiàn)elgner 和同事首次報道利用天然二醚聯(lián)陽離子脂質(zhì)（DOTMA）作為人類基因載體進入細胞進行基因治療?；蛑委煹闹饕康氖浅晒Φ膶⑦z傳物質(zhì)傳遞到目標(biāo)組織、器官或者細胞。目前國外已經(jīng)有公司申請了相關(guān)的專利，并且就有關(guān)的陽離子類脂的合成給出了相應(yīng)的方法，所以在前人的工作基礎(chǔ)上我們能相應(yīng)的完成蔗糖酯類陽離子類脂的合成 [5]。因為細胞需要血清來生存，所以這是一種嚴(yán)重缺陷。人們己研制出多種直接傳遞生物活性劑到活細胞內(nèi)的方法。 Halogenation。本文探索了蔗糖酯類陽離子類脂合成反應(yīng)的合成方法及鹵化反應(yīng)的物料比，反應(yīng)時間，反應(yīng)溫度對目標(biāo)產(chǎn)物收率的影響。關(guān)鍵詞：蔗糖酯類陽離子類脂 蔗糖6乙酸酯 鹵化蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文IIAbstractThis paper discusses the synthesis of sucrose esters of cationic lipid purpose, significance, background and development of the situation at home and abroad, with empHasis on the important intermediates of its synthesis and analytical methods sucrose as raw material in the ptoluenesulfonic acid and the role of DMF, the use of methyl ester Trimethyl to be sucrose esterification6acetate,and then in sodium hypochlorite and sodium bromide under with tetramethylpiperidine oxide (TEMPO) to selective oxidation by 1,439。因此，基因治療載體的開發(fā)對基因治療的發(fā)展尤為重要，其有效開發(fā)將推動基因治療向常規(guī)治療方法的轉(zhuǎn)變 [1]。例如，脂質(zhì)體和聚合物已被用于轉(zhuǎn)染遺傳物質(zhì)，包括脫氧核糖核酸(DNA) 和核糖核酸 (RNA) [3]。這樣必須包括附加操作步驟，從而使得陽離子類脂和陽離子脂質(zhì)體感染細胞變得復(fù)雜和麻煩。細胞膜為選擇性屏障，它能阻止物質(zhì)隨機進人細胞內(nèi)。病毒載體可以有效的轉(zhuǎn)染遺傳物質(zhì)進入宿主細胞，但它們有很多不足，比如容易致突變，可能誘導(dǎo)免疫應(yīng)答從而使得基因表達消失。目前，合成陽離子類脂的方法有很多，這主要是采用的原料不同從而得到的陽離子類脂的骨架不同的原因。1 蔗糖6乙酸酯的合成 OOHHOOHOOHOHOHHCH3(OCH3)364S3 OOHOHOOHOHOHHOOCH3H3CO cyleopenig4Ac6Ac OAcHO OHOOHOHOHH 2 蔗糖6 乙酸酯的選擇性氧化 OAcHO OHOOHOHOHHONaOCl/NaBr/TEMPOH2pH 10 OAcHO OHOCONaOHNaOCHHCl OAcHO OHOCOHOHHOCHOAcHO OHOHOHOHHONaOCl/TEMPOH2pH 10OAcHO OHCONaOHNaOCHHClOAcHO OHCOHOHHOCH50Kz ultrasound B3 羧酸酯化蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文64 羥基去保護 5 鹵化 初步設(shè)計試驗步驟 C6 羥基保護（蔗糖6乙酸酯的合成）干燥蔗糖（ g, mol，真空干燥箱中 60 ℃干燥 24 h）于三頸燒瓶中，加 50 mL DMF,緩慢滴加原乙酸三甲酯（ mL, mol）及對甲苯磺酸（75 mg, mmol）溶液，劇烈攪拌，室溫下反應(yīng) 150 min，溶液無色透明，加蒸餾水（5 mL） ，繼續(xù)攪拌反應(yīng) 30 min，加特丁胺（ mL, mol） ，繼續(xù)攪拌反應(yīng) 70 min，pH 值約為 9，中和，過濾，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將 DMF 蒸出，結(jié)晶得到白色晶體蔗糖6乙酸酯（A ） 。 羧酸酯化在裝有溫度計，回流冷凝管，攪拌器的 250 mL 三口燒瓶中加入甲苯 12 mL，對甲苯磺酸 g，月桂醇 0465 g 和對苯二酚 g，加熱到 60 ℃使其全部溶解，再加入上一步產(chǎn)物 B，升溫至設(shè)定反應(yīng)溫度 120 ℃，反應(yīng)時間為 4 h，待產(chǎn)物析出。量取 10 mL NaOCl 調(diào) pH 為 10。量取10 mL NaOCl 調(diào) pH 為 10。量取 10 mL NaOCl 調(diào) pH 為 10。量取 28 mL NaOCl 調(diào) pH 為 10。量取 60 mL NaOCl 調(diào) pH 為 10。. 羧酸酯化酯基去保護的探索稱取產(chǎn)品 B4 g，月桂醇 g，對二苯酚 g，對苯磺酸 g溶入 6 mL 甲苯中，100 ℃水浴并攪拌反應(yīng) 4 h。以丙酮：甲醇(1：4) 為展開劑，用薄層色譜法進行鑒定，結(jié)果如下圖所示，確認產(chǎn)品C1 應(yīng)為酯化物。過濾得澄清淺黃溶液，加入 20 mL 石油醚旋蒸出去甲苯和石油醚。加 20 mL 甲醇重結(jié)晶得微黃色晶體，即產(chǎn)品 D。稱取產(chǎn)品 C2 g，咪唑 g，三苯基膦 g，碘 g 溶于 20 mL DMF 中， 80 ℃水浴加熱并攪拌反應(yīng) 4 h，溶液始終為橘紅色并含有殘渣，過濾得橘紅色液體。以丙酮：甲醇(1：1) 為展開劑，用薄層色譜法進行鑒定，結(jié)果如下圖所示，由圖得E2 和 E3 為同一物質(zhì)圖 14 化合物 D3 的 TLC 圖考慮碘極大量情況下的鹵化反應(yīng)。溶液由淺黃色逐漸變?yōu)榛液谏?。?1HNMR譜中，低場無信號，高場δ （3H，t）為化合物中C 12H25的末端甲基質(zhì)子信號，（2H，t ）和（2H，m）為與酯基相連的CH 2CH2基團亞甲基的質(zhì)子信號，（18H ，m）為C 12H25的其他質(zhì)子信號，（1H，d，J=）為蔗糖母核中葡萄糖單位端基質(zhì)子信號，（1H，d，J=）為蔗糖母核中果糖單位5位的質(zhì)子信號，（10H，m ）為蔗糖母核其他質(zhì)子信號。詳情見圖：蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文26因 素 A的 影 響47484950515253540 5 10 15 20料 液 比K圖 19 料液比對產(chǎn)率的影響 因 素 B的 影 響501 2 3 4反 應(yīng) 時 間K圖 20 反應(yīng)時間對產(chǎn)率的影響蔗糖酯類陽離子類脂中間體合成研究（Ⅴ）論文27因 素 C的 影 響5060 70 80 90 100反 應(yīng) 溫 度K圖 21 反應(yīng)溫度對產(chǎn)率的影響由此可驗證得，物料摩爾比為碘：蔗糖二酸二月桂醇酯=:，反應(yīng)溫度 80℃；反應(yīng)時間為 h，為最佳條件，產(chǎn)品收率可達