補(bǔ)充2酶催化活性的測(cè)定方法(更新版)
【正文】 l)，檢測(cè)到產(chǎn)物凈吸光度增加為 A，該產(chǎn)物的摩爾消光系數(shù)為 ε（終點(diǎn)法的摩爾消光系數(shù)一般可通過(guò)帶標(biāo)準(zhǔn)求得）比色皿光徑為 b(cm) 若把 A/t以 Δ A/min表示，則此定時(shí)法測(cè)定酶活性的計(jì)算公式與連續(xù)監(jiān)測(cè)法相同 ?定時(shí)法 是經(jīng)過(guò)一定時(shí)間（固定的時(shí)間）反應(yīng)后終止反應(yīng) ?終點(diǎn)法 指反應(yīng)基本達(dá)到平衡，信號(hào)變化很小，但可以不需要終止反應(yīng) ?兩點(diǎn)法 監(jiān)測(cè)反應(yīng)過(guò)程中的兩個(gè)點(diǎn)，即某一段時(shí)間內(nèi)的底物或產(chǎn)物的變化 （二）連續(xù)監(jiān)測(cè)法 連續(xù)監(jiān)測(cè)法是將酶與底物在特定條件（緩沖液、溫度等）下孵育，每隔一定時(shí)間（ 260s）連續(xù)測(cè)定酶促反應(yīng)過(guò)程中某一底物或產(chǎn)物的特征信號(hào)（如 NADH在 340nm的吸光度）的變化，從而計(jì)算出每分鐘的信號(hào)變化速率 一個(gè)典型的酶促反 應(yīng)過(guò)程一般包括延滯 期、線性期和非線性期 ① 對(duì)單一酶促反應(yīng)而言 ，是指酶促反應(yīng)從開(kāi)始到達(dá)最大反應(yīng)速度所需要的間，包括 酶催化位點(diǎn)的暴露、底物解離后與酶結(jié)合位點(diǎn)的結(jié)合、酶與輔酶的結(jié)合、酶的激活 等等 ② 對(duì)于酶偶聯(lián)反應(yīng)而言 ，延滯期還包括中間產(chǎn)物堆積到一定程后，導(dǎo)致指示反應(yīng)速度增加，直到與待測(cè)酶酶促反應(yīng)速度達(dá)到平衡所需的時(shí)間。人們把這類(lèi)底物稱(chēng)為色素原底物
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