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補充2酶催化活性的測定方法(存儲版)

2025-02-05 08:56上一頁面

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【正文】 情況下不得不使用間接法 大多數(shù)定時法都是在酶促反應終止后加入另一個試劑與底物或產(chǎn)物反應,轉(zhuǎn)化為有色化合物,再用分光光度法檢測。此期底物雖被不斷消耗但還不足以明顯改變酶促反應的速度,即以初速度進行 隨著反應的進行,底物消耗越來越明顯,反應速度明顯下降而進入非線性期。反應速度分別用產(chǎn)物的生成速度和樣品中酶的催化能力來表示 二、酶活性測定方法原理 (一)直接法 根據(jù)待測酶的酶促反應底物或產(chǎn)物有特征性的理化性質(zhì),然后通過特殊的儀器直接檢測 NADH或 NADPH的反應原理 NADH或 NADPH在 340nm處有特異吸收峰,而 NAD+或 NADP+只在 260nm處有明顯的吸收峰,監(jiān)測 340nm吸光度變化可以反應 NADH或 NADPH的變化??梢员硎緸椋? ?指示酶 是指能監(jiān)測反應速度的酶 ?輔助酶 在酶偶聯(lián)反應中可以一個或多個,也可以不需要輔助酶 由于 NAD( P) +或 NAD( P) H在 340nm的光吸收特性,很容易進行連續(xù)監(jiān)測,因此它是最常用的指示酶,過氧化物酶( POD)也可做指示酶。脫羧酶在反應過程中產(chǎn)生 CO2,可以用量積法測定 (二)間接法 是指酶促反應底物和
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