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多重不對稱擴增介紹(更新版)

2025-07-06 01:38上一頁面

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【正文】 的不對稱 PCR,可以獲得與普通不對稱 PCR更好的效果。 多重不對稱 PCR設(shè)計軟件 ? PrimerPlex(付費) —— 一款設(shè)計特征寡核苷酸片斷、用于同時分析 100種核酸序列的工具。 不對稱 PCR設(shè)計 ? 設(shè)計不對稱 PCR引物時,限制性引物的 Tm值較非限制性引物 Tm值高 4~6176。 ? 目前也有文章提出使用統(tǒng)計學(xué)方法,利用 qPCR的數(shù)據(jù)建立一個模型,來預(yù)測引物與目標序列的擴增效率。 ? 導(dǎo)致不平衡的原因: 引物特異性; 最佳退火溫度不一致; 引物二聚體; 模板量不同; 引物擴增效率 引物特異性 ? 如果引物與體系中其他非目的基因片段結(jié)合能力更強,那么目的基因結(jié)合引物的能力就會受到競爭,從而導(dǎo)致擴增效率下降。 ? 系統(tǒng)性 : 多重 PCR很適宜于成組病原體的檢測,如肝炎病毒,腸道致病性細菌,性病,無芽胞厭氧菌等同時檢測 。 為宜。 ? 在擴增過程前 1020個循環(huán),其擴增產(chǎn)物主要是雙鏈 DNA,但當限制性引物 (低濃度引物 )消耗殆盡,不再引導(dǎo)擴增,而非限制性引物 (高濃度引物 )引導(dǎo)的 PCR會繼續(xù)進行,從而就會產(chǎn)生大量的單鏈 DNA。限制性引物量可以考慮設(shè)臵在
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