【正文】 ................................... 22 主要儀器 ................................................ 22 拮抗菌及其培養(yǎng) .......................................... 23 病原菌培養(yǎng)和孢子懸浮液的制備 ............................ 23 果實選擇與預處理 ........................................ 23 幾丁質(zhì)對 R. paludigenum 生防機理的影響 .................... 23 數(shù)據(jù)處理分析與作圖 ...................................... 24 結(jié)果 .......................................................... 24 幾丁質(zhì)對 R. paludigenum 在果實傷口處生長動態(tài)的影響 ........ 24 幾丁質(zhì)處理后 R. paludigenum 對果實誘導抗性的影響 .......... 26 幾丁質(zhì)處理后 R. paludigenum 發(fā)酵上清液的抑菌效果 .......... 27 幾丁質(zhì)培養(yǎng)后 R. paludigenum 對果實 POD 酶活性的影響 ....... 27 討論 .......................................................... 28 第四章 結(jié)果 與 展望 ........................................... 30 本論文的主要研究結(jié)果 .......................................... 30 本實驗的后續(xù)研究及展望 ........................................ 30 致謝 ...................................................... 32 參考文獻 ................................................... 33 附 錄 ...................................................... 37 哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第一章 文獻綜述 1 第一章 文獻綜述 我國水果產(chǎn)業(yè)發(fā)展概述 水果是維生素、礦物質(zhì)和膳 食纖維的重要來源，是人們維持身體健康，增進營養(yǎng)必不可少的主要食品 ， 是世界上僅次于糧食的 農(nóng)產(chǎn)品 。 （ 5）果實誘導抗性試驗結(jié)果表明， R. paludigenum 能激發(fā)蘋果果實對青霉病害的抗性，而經(jīng) NYCB 誘導 培養(yǎng)的酵母能進一步增強這種對果實抗性的誘導作用。 Tallman（經(jīng) 英國國際微生物所菌種保存和鑒定中心 CABI Bioscience Identification Services 鑒定為 Rhodosporidium paludigenum Fell amp。除了文中特別加以標注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已 經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對本研究提供過幫助和做出過貢獻的個人或集體，均已在文中作了明確的說明并表示了謝意。 涉密論文按學校 規(guī)定處理。 （ 3）機理實驗結(jié)果表明，幾丁質(zhì)誘導培養(yǎng)后， R. paludigenum 在蘋果、梨果實傷口處的生長速度顯著提高，菌體數(shù)量顯著增加。 Tallman) to enhance the effectiveness of its biological control of postharvest decays of fruits. (1) In vivo test results showed that R. paludigenum induced by chitin can increase its biological control of postharvest diseases (BCPD) effect significantly. (2) The optimal concentration for induction was % (w/v), the optimal time for induction was 36~48 hours. There was no collaborative effect between chitin and NaCl on the BCPD of R. paludigenum. (3) Data showed population and growth speed of R. paludigenum in wounds of apple and pear increased significantly. (4) Data showed that R. paludigenum cultured in medium with chitin had inhibitory effect to the decay of pears caused by Penicillium expansum， R. paludigenum cultured in NYDB has no inhibitory, but a promoting effect. (5) Through the induction of fruit resistance and associated biological control results showing that R. paludigenum could stimulate the resistance of fruits against the external infection. Meanwhile, chitin could improve their ability to inhibit the decay incidence and fruit resistance. The ability to stimulate fruit’s POD activity may be related. In conclusion, R. paludigenum induced by chitin could increase its BCPD effect. The promoting of R. paludigenum’s growth in fruit wounds, secreting of antimicrobial substances and induced resistance of fruit after being induced may be the mechanism. Key words: R. paludigenum。 根據(jù)聯(lián)合國糧食組織對 50 多個國家的調(diào)查，發(fā)展中國家水果收獲后的平均損失率在 30%以上。病原真菌不僅會造成果實數(shù)量上的巨大損失，而且許多病原真菌分泌產(chǎn)生的大量次生代謝產(chǎn)物還可能會引起嚴重的食品安全問題，如曲霉菌（主要是 Aspergillums flavus和 Aspergillums parasiticus等）產(chǎn)生的黃曲霉毒素、擴展青 霉（ Penicillium expansum）產(chǎn)生的棒曲霉素（ patulin）等（ Martins et al., 20xx； Sholberg 和Conway, 20xx； DombrinkKurtzman 和 Blackburn, 20xx； Brodhagen 和 Keller，20xx； Morales et al., 20xx）。nchezTorres和 Gonz225。 病原菌破壞植物自身防御機制 植物在遭到病原菌侵染時，通過體內(nèi)木質(zhì)素和羥脯氨酸糖的沉積，植物抗菌素的積累，蛋白質(zhì)酶抑制劑和溶菌酶的合成來增強細胞壁的保衛(wèi)反應。根據(jù)國內(nèi)外的研究報道，控制采后病害非殺菌劑的方法主要可分為生物學方法、物理方法和化學方法 3 大類。 因此，找到一種新的安全的可以替代化學殺菌劑，控制果蔬采后病害的新方法具有非常重要的意義。目前，在經(jīng)濟發(fā)達地區(qū)，低溫貯藏鏈結(jié)合化學殺菌劑是比較成熟的商業(yè)采后處理技術。生防通常是一個以上的機制共同作用的結(jié)果。 已有的研究結(jié)果顯示，生防菌在果實傷口處接種越早，其對果蔬采后病原菌的抑制效果越好（ ChandGoyal and Spotts, 1997。 重寄生作用 許多酵母拮抗菌可以分泌胞外水解酶（幾丁酶， β1,3葡聚糖酶等），從而分解病原菌的細胞壁或菌絲體。這些吸附現(xiàn)象不能完全說明在拮抗菌與病原菌之間有重寄生作用，但可以肯定這種現(xiàn)象與拮抗菌的生理活動緊密聯(lián)系，因為經(jīng)過熱殺死的拮抗菌不再有吸附現(xiàn)象發(fā)生。 Janisiewicz et al., 1991）。 拮抗 物質(zhì)的 分泌 和 積累 阿 根 廷學 者發(fā) 現(xiàn)粘 紅酵 母（ Rhodotorula glutini) 產(chǎn) 生 的一 種 酸（ rhodotorulic acid）能抑制許多病 原真菌，而且發(fā)現(xiàn)整合使用 rhodotorulic acid 和該粘紅酵母能增強其對果實病害的控制（ Calvente et al., 20xx； Sansone et al., 20xx）。一是拮抗酵母單獨作用時，效果還無法與化學殺菌劑相比，二是采后貯藏是一個長期的過程，酵母制劑的生防效果和貨架壽命受到了采收、處理、包裝和銷售等多個環(huán)節(jié)諸多因素的影響（ Janisiewicz et al., 20xx； Spadaro et al., 20xx）。 為 通過幾丁質(zhì)及其衍生物等酵母細胞壁組分誘導拮抗酵母，提高其拮抗效力建立理論基礎。 用 R. paludigenum 干粉制劑進行了食品級小鼠急性經(jīng)口毒性實驗，初步確定該制劑屬于實際無毒類。 試劑 幾丁質(zhì)（ Chitin）為生化純試劑，使用前先研磨，并用 100 目篩網(wǎng)過濾哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 12 后備用。 幾丁 質(zhì)誘導后不同濃度 R. paludigenum 酵母的生防效果 用消過毒的打孔器在每個果實表面形成統(tǒng)一大小和深度的傷口。整個實驗重復 2 次以上。 2 小時后，在每個傷口處加入 30 μl的 P. expansum 孢子懸浮液，濃度為 1104 cells/ml。同時，結(jié)合病斑直徑的情況，生防效果最好的處理為 %的 NYCB培養(yǎng)的 R. paludigenum。 E: %（ w/v）幾丁質(zhì) NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum. Fig. 23 Incidence of blue mold decay caused by Penicillium expansum on apples inoculated with R. paludigenum cultured with different concentrations of chitin. A: R. paludigenum cultured in NYDB。 107N: NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum（ 1107cell/ml） 。 108C: %幾丁質(zhì) NYDB 培養(yǎng)的哈爾濱工業(yè)大學學士學位論文 第二章 海洋酵母 R. paludigenum 對果實采后真菌病害抑制效果研究 17 R. paludigenum（ 1108cell/ml） 。s multiple range test. 不同培養(yǎng)時間對幾丁質(zhì)誘導 R. paludigenum 生防效力的影響 %（ w/v） 的 NYCB 培養(yǎng)基分別培養(yǎng) 2 3 4 72 和 96 h 后， R. paludige。 107C: %幾丁質(zhì) NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum（ 1107cell/ml） 。 106N: NYDB 培養(yǎng)的 R. paludigenum（ 1106cell/ml） 。 C: R. paludigenum cultured in NYCB with % chitin。s multiple range tests. 6d 7d012345cbcabaababababLesion diameter (mm)D ay s af t er i nocul at i on(d) N Y D B N Y C B ( 0. 1%) N Y C B ( 0. 2%) N Y C B ( 1. 0%) N Y C B ( 2. 0%) a 圖 22 不同濃度幾丁質(zhì)培養(yǎng)后 R. paludigenum 對梨青霉病病斑直徑的影響 Fig. 22 Severity of blue mold decay caused by Penicillium expansum on pears inoculated with R. paludigenum cultured with different concentrations of chitin. Bars represent standard errors of three repl