【正文】 內(nèi)或鏈間形成的 氫鍵 。 即使在 6mol/L尿素中 20小時內(nèi)仍具活力 ， 這樣對不溶性蛋白質(zhì)的長時間裂解將是很有效的 。 N H C H COR 4N H C H COR 3N H C H COR 2N H C H COR 1肽鏈 水解位點 嗜熱菌蛋白酶（ thermolysin） :常用于斷裂較短的多肽鏈。 N H C H COR 4N H C H COR 3N H C H COR 2N H C H COR 1肽鏈 水解位點 R1=Phe, Trp,Tyr時水解快 。 為了 減少 胰蛋白酶的 作用位點 ， 可以通過化學(xué)修飾將其側(cè)鏈基因保護起來 。最常用的氨肽酶是 亮氨酸氨肽酶 ，水解以亮氨酸殘基為 N末端的肽鍵速度最大 。在肽鏈氨基酸順序分析中，最重要的是 N端氨基酸分析法。 的測定 蛋白質(zhì)氨基酸順序的測定是蛋白質(zhì)化學(xué)研究的基礎(chǔ)。 一般短肽的 旋光度 約等于組成該肽中各個氨基酸的旋光度的總和 ， 但較長的肽或蛋白質(zhì)的旋光度則不能這樣簡單相加 。 2. 肽鍵 ?肽鍵的特點是氮原子上的孤對電子 (2s2)與羰基具有明顯的 共軛作用 (共振相互作用 )。 蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能： ； ； ； ； ； ； ； ； ； …… 蛋白質(zhì) （ protein） 是生活細胞內(nèi)含量最豐富 、 功能最復(fù)雜的生物大分子 ， 并參與了幾乎所有的生命活動和生命過程 。其相對分子量除以 110估計氨基酸殘基的數(shù)目 。 第三節(jié) 蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu) ?蛋白質(zhì) 是由一條 (單體蛋白質(zhì) )或多條 (寡聚蛋白質(zhì) )具有確定的氨基酸序列的多肽鏈以特殊方式結(jié)合而成的生物大分子。 寡聚蛋白質(zhì) (oligomeric protein)：由兩條或多條多肽鏈組成 。 因此 ， 研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能始終是生命科學(xué)最基本的命題 。 ?組成肽鍵的 6個原子處于同一平面 (肽平面 )。 凈電荷的計算 (P166167) ?在生物體中，多肽最重要的存在形式是作為蛋白質(zhì)的亞單位。自從1953年 ，現(xiàn)在已經(jīng)有上萬種不同蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)被測定 。末端氨基酸測定的主要方法有： A、二硝基氟苯（ DNFB）法： N末端 游離氨基 ① 酸水解后， N末端 AA成為黃色 DNPAA衍生物 ② 排除側(cè)鏈 DNP衍生物的干擾：用有機溶劑抽提， 側(cè)鏈 DNP衍生物留在水相 B、丹磺酰氯法 : 在堿性條件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以與 N端氨基酸的游離氨基作用，得到丹磺酰 氨基酸。 E、羧肽酶法： 羧肽酶是一種肽鏈外切酶，它能從多肽鏈的 C端逐個的水解。 用 馬來酸酐 可以保護 Lys殘基側(cè)鏈上的 ε －NH2， 胰蛋白酶就不會水解 Lys竣基參與形成的肽鍵 ， 只能斷裂 Arg羧基所形成的肽鍵；反之 ， 如果用 1， 2－環(huán)己二酮 修飾Arg的胍基 ， 則胰蛋白面只能裂解 Lys羧基所形成的肽鍵 。 R1= Leu， Met和 His水解稍慢 。 R2=Phe, Trp, Tyr。 消化道內(nèi)幾種蛋白酶的專一性 （ ） （ ） （脂肪族） 胰凝乳蛋白酶 胃蛋白酶 彈性蛋白酶 羧肽酶 胰蛋白酶 氨肽酶 羧肽酶 （ Phe. Trp） B、 化學(xué)法： 溴化氰 水解法，它能選擇性地切割由 甲硫氨酸 的羧基所形成的肽鍵 。主要有?螺旋、 ?折疊、 ?轉(zhuǎn)角。幾乎所有肽鍵都參與氫鍵的交聯(lián)，氫鍵與鏈的長軸接近垂直。 回折 ， 有人稱之為發(fā)夾結(jié)構(gòu) ， 由第一個 aa殘基的 C=O與第四個氨基酸殘基的 NH間形成氫鍵 。 即： 在 ?轉(zhuǎn)角部分，由四個氨基酸殘基組成 (4個 α碳，共3個酰胺平面 )，四個形成轉(zhuǎn)角的殘基中，第三個一般均為甘氨酸殘基 (或 Pro)。 ?卷發(fā) (燙發(fā) )的生物化學(xué)基礎(chǔ) ? 永 久 性 卷 發(fā) ( 燙發(fā) ) 是 一 項 生 物 化 學(xué) 工 程(biochemical engineering),?— 角蛋白在濕熱條件下可以伸展轉(zhuǎn)變?yōu)??— 構(gòu)象 ， 但在冷卻干燥時又可自發(fā)地恢復(fù)原狀 。絲心蛋白是典型的 反平行式 ?折疊片 ，多肽鏈取鋸齒狀折疊構(gòu)象。 ① 結(jié)構(gòu)域通常是幾個超二級結(jié)構(gòu)的組合，是球狀蛋白質(zhì)的獨立折疊單位；對于較小的蛋白質(zhì)分子，結(jié)構(gòu)域與三級結(jié)構(gòu)等同，即這些蛋白為單結(jié)構(gòu)域，如肌紅蛋白；較大的蛋白由兩個或兩個以上的結(jié)構(gòu)域組成。 注：一級結(jié)構(gòu)決定高級結(jié)構(gòu) （ RNA酶復(fù)性實驗 P235） A、核糖核酸酶變性與復(fù)性作用 Native ribonuclease Denative reduced ribonuclease Native ribonuclease 8 M urea and ?mercapotoethanol Dialysis 變性 復(fù)性 Ribonuclease A: Amino Acid Sequence Ribonuclease A B、二硫橋在穩(wěn)定蛋白質(zhì)構(gòu)象中的作用 RNA酶肽鏈上的一維信息控制肽鏈自身折疊成特定的天然構(gòu)象 ， 并由此確定了 Cys殘基兩兩相互接近的正確位置 。 對稱性是四級結(jié)構(gòu)的重要性質(zhì) (指亞基締合 )。 別構(gòu)效應(yīng) 指結(jié)合在多亞基蛋白質(zhì)分子的特定部位 (受體 )上的配體對該分子的其他部位所產(chǎn)生的影響。 蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)歸根到底是由一級序列決定的 ，三維結(jié)構(gòu)是多肽鏈上的各個單鍵旋轉(zhuǎn)自由度受到各種限制的總結(jié)果 。氨基酸可以是連續(xù)的，也可以是不連續(xù)的． ③ 結(jié)構(gòu)域之間常形成裂隙，比較松散，往往是蛋白質(zhì)優(yōu)先被水解的部位。 ?彈性纖維與膠原纖維共同存在 ,分別賦予組織以彈性及抗張性 。 這就是卷發(fā)行業(yè)的生化基礎(chǔ) 。這類結(jié)構(gòu)主要存在于球狀蛋白分子中。 β 轉(zhuǎn)角的特征： ①由多肽鏈上 4個連續(xù)的氨基酸殘基組成。一種為平行式，即所有肽鏈的 N端都在同一邊。 ① 多肽鏈中的各個肽平面圍繞同一軸旋轉(zhuǎn)，形成螺旋結(jié)構(gòu)，螺旋一周，沿軸上升的距離即 螺距為 ,含 ；每個氨基酸殘基繞軸旋轉(zhuǎn) 1000，沿軸上升 ； ② 肽鏈內(nèi)形成氫鍵，氫鍵的取向幾乎與軸平行， 第一個酰胺基團的 CO基與第四個酰胺基團的 NH基形成氫鍵 ，即形成含有 13個原子的環(huán) ； ③ 蛋白質(zhì)分子幾乎都為右手 ?螺旋 (原因： R基與主鏈 C=O中的 O的空間位阻小 )； ④ 具有協(xié)同性效應(yīng)。此法的特點是能夠不斷重復(fù)循環(huán)，將肽鏈 N端氨基酸殘基逐一進行標記和解離 。 R2=Pro或 Gly 水解受抑。 N H C H COR 4N H