【正文】 檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 裂 葉 狀波 浪 狀圓 鋸 齒 狀細 圓 鋸 齒 狀齒 形鋸 齒 狀四、微生物鑒定 形態(tài)學觀察 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 生理生化 碳源和氮源 運動性 細胞壁組成 滲透耐性 能源 氧關(guān)系 發(fā)酵產(chǎn)物 最適 pH和生長范圍 一般營養(yǎng)類型 光合作用色素 最適生長溫度和范圍 鹽需求及耐性 發(fā)光 次級代謝產(chǎn)物形成 能量轉(zhuǎn)換機制 對代謝抑制劑和抗生素的敏感性 貯藏內(nèi)含物 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 生理生化 Division based on membrane position: a) gramnegative – have outer and inner membranes and a thin cell wall (Escherichia coli) b) grampositive – have no outer membrane, but have a thicker cell wall (Bacillus subtilis) c) neither gram nor gram+ no cell walls (mycoplasm) 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 生理生化 ? API (bioMerieux)(biochemical) 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 生理生化 ? BBL Crystal (Becton Dickinson) ? 將傳統(tǒng)的生化反應、酶 —底物呈色反應與熒光增強顯色技術(shù)結(jié)合，設(shè)計鑒定反應最佳組合。 , Bea180。 巴西曲霉 (Aspergillus brasiliensis） 黑曲霉 (Aspergillus niger) 黑曲霉 四、微生物鑒定 鑒定實例 2 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 ? 形態(tài)學鑒定 ? CYA培養(yǎng)基 , 25176。 C 5 min。 四、微生物鑒定 鑒定實例 2 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 ? 形態(tài)學鑒定 圖 25176。 v: 可變 . Note: ?: No growth。 140 166 17 173 四、微生物鑒定 鑒定實例 2 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 ? ITS rDNA區(qū)序列 分析 圖 基于 ITS區(qū) rDNA序列的黑色組曲霉的 NJ系統(tǒng)發(fā)育樹 Fig A Neighbor Joining Tree of Aspergillus section Nigri. based on Their ITS DNA Sequences 注 : 圖中發(fā)育樹節(jié)點只顯示 Bootstrap值大于 50%數(shù)值 , 圖例為遺傳距離 . Note: Numbers above branches are bootstrap values. Only values above 50% are indicated. Bar, geic distance. CMCC(F)98003與與 A. niger ATCC 16888聚類在分類距離最近的一個分支上 , 序列相似性達 100% 。 《 中國微生物菌種保藏管理條例 》 五、微生物保藏 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 ? 制訂專門菌種保藏管理制度； ? 同一株菌種采用兩種以上保藏方法保存； ? 對只能采用一種保藏方法的菌株備份存放于兩個以上的保藏設(shè)備中； ? 對菌種的入庫和出庫記錄入檔，實行雙人負責制管理； ? 設(shè)專人負責管理菌種保藏設(shè)施正常運行，定期檢修維護。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 液體石蠟法 ? 操作簡單，使用比較方便； ? 對設(shè)備要求不高，對人員操作水平有一定要求； ? 用長毛細滴管將菌懸液分裝到安瓿管內(nèi)， ～ ，操作時要把帶有菌懸液的長毛細滴管直接插入安瓿管的底部，勿使菌液沾在管壁上。 準備冷凍管 準備保護劑 （ 10%15%甘油） 準備菌懸液（細胞、孢子或芽孢懸液） 制備冷凍管（取菌懸液和保護劑至冷凍管） 保藏（ 80℃ ， 2～ 5年） 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 Microbank 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 80℃ 冰箱凍結(jié)法 ? 使用方便； ? 保藏時間較長； ? 對設(shè)備要求高 (80℃ 冰箱 )； ? 運輸不方便。 China39。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 操作步驟 ? 冷凍管準備 ? 保護劑制備 ? 保藏培養(yǎng)物準備 ? 預凍 — 將程序降溫系統(tǒng)預冷到 4℃ ，將制備好的冷凍管放入其中，以 1℃ /min降溫速率降至 35℃ ； — 使用程序降溫盒。 ? 終止干燥時間應根據(jù)下列情況判斷 ： ? 安瓿管內(nèi)凍干物呈酥塊狀或松散片狀 ? 真空度接近空載時的最高值 ? 樣品溫度與管外溫度接近 ? 選用 1～ 2支對照管 ， 其水份與菌懸液同量 ， 當其水分完全蒸發(fā)時視為干燥完結(jié) 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 預凍 ? 制備菌懸液、經(jīng)分裝到進行預凍之間的時間不宜超過 1h； ? 分裝完成后將安瓿管立刻放入－ 35～－ 40℃ 冰箱預凍 1h，使菌液完全凍結(jié)； ? 可采用分段式預凍，先將分裝好的安瓿管置－ 20℃ 凍 30分鐘，再放入－ 80℃ 冰箱凍 30min； ? 采用離心式凍干裝置時勿需預凍。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 真空冷凍干燥法 ? 指將保藏的菌種細胞或孢子懸浮于保護劑中，經(jīng)預凍后在真空條件下使水分升華，再經(jīng)真空封存后保存的一種長期菌種保存方法。 ?基本措施 是低溫、真空、干燥 。 四、微生物鑒定 鑒定實例 2 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 ?β微管蛋白基因序列 分析 圖 基于 β微管蛋白基因序列的黑色組曲霉的 NJ系統(tǒng)發(fā)育樹 Fig Neighbourjoining tree based on βtubulin sequence data of Aspergillus section Nigri 注 : 圖中發(fā)育樹節(jié)點只顯示 Bootstrap 值大于 50%數(shù)值 , 圖例為遺傳距離 . Note: Numbers above branches are bootstrap values. Only values above 50% are indicated. Bar, geic distance. CMCC(F)98003與黑曲霉 A. niger 序列同源性為 100%。 w: Weak growth。 C, 7 d 注 : A菌落形態(tài) 。 C 1 min, 55176。 DNA模板 1 μL 。 th, et al. Aspergillus brasiliensis sp. nov., a biseriate black Aspergillus species with worldwide distribution. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology, 2022, 57: 1925–1932 圖 : RepPCR條碼系統(tǒng)發(fā)育樹 (DiversiLab平臺 ) Figure 2: Dendrogram of RepPCR Barcoding (DiversiLab Platform) . 注：圖片來源于 Reclassification of ATCC174。 BOXPCR 根據(jù) BOX插入因子 (大小為 154 bp, 由保守性不同的 box A(57 bp) 、 box B(43 bp) 和 boxC(50 bp)等亞單位組成 )設(shè)計引物 , 擴增微生物基因組 DNA 的重復性片段 , 最后經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測其多態(tài)性 。 將 培養(yǎng)物 劃線接種于葡萄糖 酵母提取物 蛋白胨固體培養(yǎng)基上， 25℃ 培養(yǎng)2～ 3 d后，進行菌落形態(tài)觀察，菌落質(zhì)地 、 菌落顏色 、 菌落表面是否為反光或暗淡 、 菌落是平伏還是隆起 、 菌落邊緣 等 。 ? 營養(yǎng)肉湯： 用于標本及各類細菌的增菌 ? 巧克力血平板： 其中含有 V和 X因子，適于接種疑有 嗜血桿菌、奈瑟菌 等的標本。 醫(yī)療器械無菌檢驗員操作實務與潔凈室管理，北京， 2022 稀釋搖管法 ? 適合厭氧菌的純培養(yǎng)分離 無菌瓊脂培養(yǎng)基試管加熱 使瓊脂熔化后冷卻并保持在 50℃ 左右 梯度稀釋后的待分離菌株加入試管中 搖勻、冷凝 在瓊脂