【正文】 應用于腫瘤治療的可行性提供了重要依據(jù)。但是，在癌癥患者逐年上升的情況下，卻有一半患者得不到規(guī)范治療。DNA 免疫不僅在無法獲得純化蛋白質(zhì)的情況下開拓了研制特異性抗體的新途徑，而且逾越了抗原的低免疫原性的障礙，有效地激發(fā)宿主的特異性免疫應答。 技術(shù)優(yōu)點DNA 免疫較常規(guī)免疫產(chǎn)生的體液免疫應答強而持久，因此用 DNA 免疫制備單克隆抗體和多克隆抗體可以省時省力。目前 DNA 免疫的焦點是抗原的遞呈機制及佐劑對 DNA 免疫的影響。核糖體展示系統(tǒng)的抗體篩選過程與噬菌體展示系統(tǒng)的過程相類似。將抗體可變區(qū)與恒定區(qū)組合得到具有完整能的全人單克隆抗體。 缺點及改進方法SDR 移植抗體往往存在親和力和特異性降低的缺點。一．單克隆抗體綜述 1．1 人鼠嵌合抗體制備技術(shù) 該技術(shù)產(chǎn)生于 1980 年代中期,是應用 DNA 重組技術(shù)將人 McAb 的恒定區(qū)基因替換鼠 McAb 的恒定區(qū)基因，從而編碼產(chǎn)生的 McAb。要解決傳統(tǒng)雜交瘤技術(shù)所存在的問題,為單克隆抗體的應用提供更廣闊的空間，出現(xiàn)了嵌合抗體制備技術(shù)、噬菌體展示技術(shù)、核糖體展示技術(shù)、DNA 免疫制備抗體技術(shù)，制備單克隆抗體。生產(chǎn)出針對復雜生物混合物中的特定分子的抗體,可用于分離、分析及純化該特定分子抗原。 另一方面，鼠 McAb 還具有免疫原性，產(chǎn)生人抗鼠抗體，既降低單抗的治療效果，又誘發(fā)變態(tài)反應。抗體市場是從 2022 年之后開始蓬勃興起的，20222022 年間單抗藥物復合增長率達到 41%。1．2 人源化抗體制備技術(shù) 人源化改造主要是重構(gòu)抗體和表面重塑抗體。 技術(shù)原理它是一種基因表達產(chǎn)物和親和選擇相結(jié)合的技術(shù)，建立在噬菌體外殼具有表達抗體蛋白片段能力的基礎(chǔ)上，以改構(gòu)的噬菌體為載體，用基因工程技術(shù)克隆人抗體可變區(qū)的全套基因,然后將克隆的基因插入噬菌體編碼衣殼蛋白的基因中,這樣在噬菌體表面表達特定抗體片段,而在噬菌體核心 DNA 中則含有該抗體片段的基因，建立了噬菌體抗體文庫，形成獲得一個具有上億個體外方式制得的不同抗體的基因數(shù)據(jù)庫。 在淘選過程中會出現(xiàn)高 親和力低拷貝的特異性噬菌體抗體的丟失等。 技術(shù)原理 現(xiàn)代免疫學研究表明，機體對抗原的應答取決于兩個要素:①抗原的免疫原性。但有人把 DNA 直接注射至小鼠的股四頭肌也能很好地激發(fā)機體的免疫應答。②DNA 疫較蛋白質(zhì)免疫引起的免疫應答較遲，這可能與 DNA 免疫后需經(jīng)過特異性蛋白質(zhì)的表達才能激發(fā)機體的免疫應答有關(guān)。近 20 年來，中國癌癥死亡率上升了 %，癌癥死亡占城鄉(xiāng)居民總死亡構(gòu)成的 24%。但短期來看對目前的主流品種不會造成太大沖擊，因為如前所述，這些產(chǎn)品主要作為二線治療藥物使用，或和其他主流品種組成聯(lián)合用藥方案，并不是替代現(xiàn)有主流品種。結(jié)合到腫瘤靶細胞表面的數(shù)量多，到非靶細胞的數(shù)量少；進入靶細胞內(nèi)的數(shù)量多，進入非靶細胞內(nèi)的數(shù)量少。靜脈內(nèi)注射抗腫瘤單抗，在腫瘤部位的濃度較高，顯示特異性定位?？?eGFr 的人鼠嵌合抗體已進入臨床研究。以內(nèi)皮細胞為靶點的單抗藥物，抑制血管新生成，可能達到抑制腫瘤生長的目的；而且靜脈注射的單抗藥物也易于到達靶部位(內(nèi)皮細胞)，不需要穿越細胞外間隙到達實體瘤深部的腫瘤細胞。兩條重鏈（H）和兩條輕鏈（L） 。其二級結(jié)構(gòu)是反向平行的 β 片層輕鏈分 VL 和 CL重鏈分 VH 和 CH 。三．單克隆抗體產(chǎn)品介紹（一）. 美羅華美羅華( rituximab 。美羅華的臨床試驗始于 1993 年。與骨髓受侵、結(jié)外受侵、巨塊型患者相比,腫瘤負荷小的療效更好。這是一種血循環(huán)中B 淋巴細胞上特異性抗原抗體結(jié)合反應的結(jié)果,并不是抗體本身的問題。對美羅華有效的患者再次治療時的安全有效性　一組 60 例患者的研究表明,初次接受美羅華治療后達到完全緩解或部分緩解者,復治有效率達 41 % ,中位有效期大于 10 個月。在一項 31 例腫瘤直徑大于 10cm 的患者研究中,總有效率 48 % ,其中 55 %為濾泡型淋巴瘤,占治療組的大部分。這是一項隨機的Ⅱ期試驗,2 組患者均接受 8 周的抗體的治療。美羅華對慢性淋巴細胞性白血病( CLL) 的療效關(guān)于這方面從理論上涉及 2 個問題。而且,盡管這組患者通常血中惡性 B 淋巴細胞克隆增加,但淋巴細胞的數(shù)量遠不象 CLL 中那么多?；A(chǔ)資料是用該藥治療轉(zhuǎn)移性乳腺癌中高度表達 Her22Pneu 受體的患者。此外,還可以在體外介導抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)。Herceptin 和順鉑聯(lián)合治療了 37 例轉(zhuǎn)移性乳腺癌,抗體首次劑量為 250mg ,然后 100mg 每周 1 次靜脈注射共 9 周。kg 1 。共 6 例 CR ,20 例 PR ,有效率 30 %。圖表 14 　HER22 表達與轉(zhuǎn)移性乳腺癌的療效和無進展生存時間的關(guān)系估計僅 25 %～30 %轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者過度表達 Her22。當這些細胞進入循環(huán)中,因為細胞表面抗原極少,它們在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)中不被清除。在過度表達 Her22Pneu 的患者中行大劑量化療加干細胞移植后使用 Herceptin 也可能是合理的。因為它是一個鼠源單抗,在輸注給人體后產(chǎn)生人抗鼠抗體的幾率較高。遺憾的是,在轉(zhuǎn)移性大腸癌患者中很少觀察到腫瘤緩解。中位隨訪 7 年,抗體治療組復發(fā)率仍減少 23 % ,死亡率減少 32 %。這些單抗適合的給藥方法和劑量以及確定它們與其他生物和化學治療的最佳聯(lián)合方式連續(xù)長時間的臨床試驗以確定。：國外并購布局，國內(nèi)政策支持 單克隆抗體高投入、高利潤 單克隆抗體的特點為：高投入，高價格，高利潤。目前已有四個涉單抗類藥企上市，還有四個正在臨床試驗中。中國抗體藥物基數(shù)小，發(fā)展?jié)摿薮蟆? 基因泰克的經(jīng)驗表明，高研發(fā)投入、合作研發(fā)策略、不斷豐富的產(chǎn)品線和雄厚的資金實力是企業(yè)成功的要素，因此要選擇具有完備的高水平技術(shù)平臺以及融資機會的企業(yè)，此外，還應關(guān)注國內(nèi)相關(guān)政策。另外，中美合資的單克隆抗體研制項目于 2022 年 5 月在無錫(馬山)生物醫(yī)藥研發(fā)服務(wù)外包區(qū)奠基,按照規(guī)劃,這一項目將在 2 年內(nèi)生產(chǎn)單克隆抗體 2 萬個,成為全球最大試劑型單克隆抗體研制基地。 　　 　　按照規(guī)劃,無錫單克隆抗體有限責任公司將在 2 年內(nèi)生產(chǎn)單克隆抗體 2 萬個,成為全球最大試劑型單克隆抗體研制基地。四．國內(nèi)外抗體藥物及公司概況對比 21 世紀，生物技術(shù)將與信息技術(shù)一起為全球經(jīng)濟發(fā)展提供強大的動力，成為全社會最重要并可能改變未來工業(yè)和經(jīng)濟格局的技術(shù)。目前，全球哺乳動物細胞培養(yǎng)能力估計在 40～50 萬升之間，主要控制在 Genentech，Boehringer Ingelheim和 Lonza Biologics 三家公司手中，生產(chǎn)能力已趨飽和。據(jù)統(tǒng)計目前世界市場上銷售的 MAbs 產(chǎn)品中大約有 90%為美國公司開發(fā)上市，而其它國家僅占 10%左右，至于第三世界國家所開發(fā)生產(chǎn)的 MAbs 產(chǎn)品在市場上可能不到 1%份額。(3)病原微生物：如流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒等病毒抗原；痢疾桿菌脂多糖，沙門氏菌等細菌抗原；惡性瘧原蟲、血吸蟲等寄生蟲抗原；大腸桿菌內(nèi)毒素、破傷風類毒素等微生物毒原抗原。以后，又利用 CDR 區(qū)移植的方法獲得抗 CD3 改形抗體（或稱重構(gòu)抗體） 。例如：用鏈替換（Chain Shuffling）方法，以親本抗體的一條鏈（輕鏈）與另一條鏈（重鏈）的文庫組合，構(gòu)建抗體庫，篩選高親和力的克隆，再固定重鏈，用同樣方法選擇具有高親和力的輕鏈。3 個批準上市的治療性抗體藥物為我國自行開發(fā)的單抗。該公司在開發(fā)以抗非典病毒抗體為基礎(chǔ)的診斷、預防和治療產(chǎn)品方面已取得重大突破，現(xiàn)已申報一項美國專利和一項中國專利。國內(nèi)很多實驗室，真核細胞中抗體表達量在 1mg/L 以下，很難用于生產(chǎn)。目前正在研發(fā)的主要產(chǎn)品有：131I 人鼠嵌合腫瘤細胞核單抗注射液（131I chTNT）治療腦膠質(zhì)瘤（臨床） 、131I 惡性淋巴瘤特異性單克隆抗體注射液（131I chLym1）和重組人腫瘤壞死單抗白介素 2 融合蛋白 rhTNTIL2（將于近期申報臨床） ?，F(xiàn)在有 7 個治療性產(chǎn)品處在臨床研究階段，包括：濟南天康生物制品有限公司的注射用鼠抗人 T 淋巴細胞 CD3 表面抗原單克隆抗體，用于抗移植排斥；武漢生物制品所與第四軍醫(yī)大學合作研制的注射用抗腎病綜合癥出血熱病毒單克隆抗體（I 型） ，用于出血熱的治療；第四軍醫(yī)大學細胞工程研究中心研制的國家Ⅰ類新藥碘［131I］肝癌片段抗體注射液，用于原發(fā)性肝癌的靶向治療，已完成臨床研究，臨床有效率（CR+PR+MR）為 %，臨床獲益率(CR+PR+MR+SD)達 %，21 個月的生存率為 %，適用于各期肝癌的治療，有望 2022 年上市。國內(nèi)也有實驗室采用計算機輔助設(shè)計下，將鼠抗體表面氨基酸殘基“人源化” ，主要將鼠 Fv 段表面暴露的骨架區(qū)殘基中與人 Fv 不同者改為人源性，使 Fv 的表面人源化，但仍保留其與抗原結(jié)合的特性。九十年代后又開始了雙特異性抗體和其它小分子抗體的研制，如 SZ51HuscuPA 雙特異性抗體，它兼有抗人活化血小板特性和纖溶酶原激活劑特性的雙重功能，成為導向溶栓劑，與單獨的 uPA 進行比較，溶栓效率提高 4 倍。針對上述抗原的鼠單抗大部分被用于實驗研究，如抗原分類、鑒定和功能研究、抗原基因克隆、蛋白分離純化等，有一部分抗體用于檢驗、疾病診斷、預后判斷等，少部分鼠單抗也被用于人類疾病治療研究。近幾年來，國外在用單抗制作“生物導彈”的技術(shù)方面又有重大進展(主要是單抗與抗腫瘤劑的整合技術(shù))。Datamonitor 指出，2022 年有近 160 個單克隆抗體產(chǎn)品正在進行臨床研究，吸引了制藥行業(yè)和生物行業(yè)的廣泛投資，截至 2022 年已有 22 個產(chǎn)品上市，超過 35 個產(chǎn)品進入了Ⅱ期臨床研究階段。單克隆抗體由于可精確的攻擊靶分子，且具有較少的毒副作用而成為人們期望中的理想藥物。產(chǎn)的單抗產(chǎn)品公司名稱 商品名 通用名 適應癥武漢生物制品研究所 注射用抗人 T 細胞 CD3 鼠單抗器官移植排異東莞宏逸士生物技術(shù)藥業(yè)抗人白細胞介素/8 單克隆抗體乳膏 銀屑病恩博克大連亞維藥業(yè) 抗人白細胞介素/8 單克隆抗體乳膏 銀屑病上海中信國健藥業(yè) 益賽普 注射用重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體/抗體融合蛋白類風濕關(guān)節(jié)炎等上海美恩生物技術(shù) 唯美生 碘 131I 腫瘤細胞核人鼠嵌合單克隆抗體注射液 肝癌治療百泰生物藥業(yè) 泰欣生 尼妥珠單抗注射液 結(jié)直腸癌上海賽金生物醫(yī)藥 強克 注射用重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體/抗體融合蛋白 強直性脊柱炎上海中信國健藥業(yè) 健尼哌 重組抗 CD25 人源化單克隆抗體注射液 抗排斥究的單抗品公司名稱 通用名 適應癥上海張江生物技術(shù)重組抗 EGFR 人鼠嵌合單克隆抗體注射液結(jié)直腸癌注射用重組抗 CD25 人鼠嵌合單克隆抗體移植排斥重組抗 CD52 人源化單克隆抗體注射液慢性 B 細胞白血病注射用重組人 LFA3抗體融合蛋白銀屑病重組人腫瘤壞死因子受體－Fc融合蛋白類風濕關(guān)節(jié)炎注射用重組抗 TNF 人鼠嵌合單克隆抗體深圳龍瑞藥業(yè) 重組人 CD22 單克隆抗體注射液 腫瘤上海復旦張江生物醫(yī)藥重組人腫瘤壞死因子受體－Fc融合蛋白類風濕關(guān)節(jié)炎上海美燁生物折射用重組人促紅細胞生成素Fc 融合蛋白腎性貧血華北制藥集團重組人源抗狂犬病毒單抗注射液狂犬病上海美恩生物 腫瘤細胞核人鼠嵌合單克隆抗 腫瘤體注射液惡性淋巴瘤嵌合單抗注射液 惡性淋巴瘤東莞寶麗健生物工程研究重組人紅細胞生成素(Fc)融合蛋白注射液腎性貧血腎性貧血北京迪威華宇凍干注射用重組抗腫瘤融合蛋白腫瘤海正藥業(yè)注射用重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體抗體類風濕關(guān)節(jié)炎武漢生物制品研究所注射用抗腎綜合征出血熱病毒單克隆抗體出血熱 中國已經(jīng)上市的抗體只有 20 多個（截止到 2022 年 7 月），絕大多數(shù)在臨床研究或已經(jīng)上市的品種為完全仿制國外上市的產(chǎn)品,年銷售約 1 億美元，生產(chǎn)水平低、規(guī)模小，制約了單抗藥物在中國的發(fā)展，中國政府和企業(yè)已經(jīng)逐漸意識到抗體藥物的安全性和有效性以及巨大的市場效益，在抗體新靶標發(fā)現(xiàn)、抗體大規(guī)模表達等產(chǎn)業(yè)化等方面發(fā)展迅速，投入逐漸增加，有望在 5～10 年內(nèi)達到國際先進水平。 　　據(jù)介紹,單克隆抗體對診斷、醫(yī)治人類疑難雜癥具有不可替代的作用。“十二五” 和“十三五”是我國抗體產(chǎn)業(yè)發(fā)展的黃金期，到了“十三五” 期間，目前居全球前十位的抗體藥物基本都能在我國實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。緊隨其后的是強生、安進公司和葛蘭素史克，它們依托強大的生物技術(shù)平臺，在近幾年推出了新產(chǎn)品，并且在研產(chǎn)品儲備豐富，未來有望持續(xù)的推出新的單抗類產(chǎn)品。 全球范圍內(nèi)羅氏、安進、強生、雅培、諾華、禮來等抗體生產(chǎn)公司基本都是世界 500 強公司，它們中很多大型企業(yè)的單抗產(chǎn)品線都是通過收購而獲得的。大規(guī)模抗體生產(chǎn)成本大約為 200 美元/克，售價高達 5000 美元/克，生產(chǎn)成本只占售價 1/25。 自 1986 年美國 FDA 首次批準治療性、鼠源性單抗 OKT3 上市以來，每年進入臨床試驗的單抗產(chǎn)品數(shù)量從總體上看呈上升之勢。北美的一些試驗正在比較 5Fu + 左旋咪唑或 5Fu + CF 與 5Fu + 1721A 治療 Duke’s C 期結(jié)腸癌。入組患者均