廣大土壤中分離芽胞桿菌副本(完整版)
【正文】 養(yǎng)。將土樣放入無菌的紙袋中，并記錄采集的時(shí)間、地點(diǎn)、植被類型，4糖發(fā)酵培養(yǎng)基（做糖酵解試驗(yàn)用：葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、甘露醇）蛋白胨2 g，NaCl 5g，K2HPO4 ，1%溴麝香草酚藍(lán)水溶液3ml，待試糖10g（一般糖或醇按1%量加入，而乳糖，%的量加入），自來水1000 ml，pH ~，121℃滅菌20 min。淀粉牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基可溶性淀粉2g，牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，瓊脂15~20g，蒸餾水1000 ml，pH ~。酪素水解：脫脂奶粉（牛奶）；酪氨酸水解：L—酪氨酸 溶菌酶抗性實(shí)驗(yàn)：溶菌酶卵黃反應(yīng)：新鮮雞蛋硝酸鹽試驗(yàn)：硝酸鹽明膠液化試驗(yàn)：明膠檸檬酸鹽利用試驗(yàn)：西蒙斯氏檸檬酸鹽淀粉酶活力測(cè)定：1% 3,5二硝基水楊酸試劑 儀器； 無菌培養(yǎng)皿，接種環(huán)，土樣，三角瓶，燒杯，試管，酒精燈，無菌吸管，載玻片，吸水紙，涂布器，顯微鏡，移液管，移液槍等。（一個(gè)平板一個(gè)細(xì)菌，并且分好區(qū)），挑取一個(gè)菌株，先在平板培養(yǎng)基的一邊作第一次平行劃線34條，再轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約60176。染色步驟涂布、干燥及固定；初染：于涂片上加入23滴5%孔雀綠水溶液，加熱，用試管夾夾住載玻片在火焰上用微火加熱，邊加熱邊滴加染色液，自載玻片上出現(xiàn)蒸汽時(shí)，開始計(jì)時(shí)，約4min；脫色：傾去染液，待玻片冷卻后，水洗至孔雀綠不再褪色為止；復(fù)染：滴加沙黃染色液，染23min，水洗；鏡檢：用油鏡觀察染色結(jié)果。然后進(jìn)行一系列的鏡檢——革蘭氏染色、芽孢染色（具體步驟同上）觀察是否符合芽孢桿菌的指標(biāo)。C、45176。VP試驗(yàn)取葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基，接種37176。C恒溫箱中培養(yǎng)24h。運(yùn)動(dòng)性試驗(yàn)使用半固體營(yíng)養(yǎng)瓊脂試管，沿原穿刺線拔出接種針。淀粉水解實(shí)驗(yàn)用1824h的純培養(yǎng)物，涂布接種與淀粉瓊脂平板（一個(gè)平板可分區(qū)劃“+”字接種），于37℃培養(yǎng)2448h。 根據(jù)從伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)芽孢桿菌屬中檢索到的芽孢桿菌的生理生化特點(diǎn)，選擇能從土壤中分離到的芽孢桿菌種為標(biāo)準(zhǔn)菌種，其生理生化指標(biāo)如下表：通過對(duì)目的軍中國(guó)進(jìn)行多項(xiàng)生理生化實(shí)驗(yàn)，對(duì)比伯杰氏細(xì)菌手冊(cè)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從而鑒定出目的菌的種別； 結(jié)果與分析六、討論七、參考文獻(xiàn)。立即檢視結(jié)果，陽性（淀粉被分解）為瓊脂培養(yǎng)基呈藍(lán)色、菌落或菌苔周圍出現(xiàn)無色透明環(huán)。C溫箱中培養(yǎng)24h；觀察是否產(chǎn)生樹根狀生長(zhǎng)，若有，則菌株有鞭毛，若直立生長(zhǎng)，則菌株無鞭毛。耐鹽性試驗(yàn)將分離獲得的細(xì)菌分別接種在NaCl濃度為2%，5%，7%，10%，的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中，置于37176。C恒溫箱中保溫1530min后，若培養(yǎng)液呈現(xiàn)紅色，記為陽性（+）反應(yīng)，若不呈現(xiàn)紅色則記為陰性（）。C、55176。初染：在涂有菌種的載玻片上滴加適量的草酸銨結(jié)晶紫染色液，染色1min，傾去染液，用水沖洗至無染色液顏色為止；媒染：滴加石碳酸復(fù)紅，染12min，水洗；脫色：滴加95%乙醇，將玻片搖晃幾下傾去乙醇，重復(fù)23次，立即水洗；復(fù)染：滴加石碳酸復(fù)紅，染23min，水洗；
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