【正文】 粉酶菌株的原理及方法； 掌握微生物的搖瓶培養(yǎng)方法及淀粉酶活力測定的原理及方法； 培養(yǎng)學生自行設(shè)計實驗方案流程、綜合分析解決問題及判斷實驗結(jié)果的能力； 對所學習過的微生物實驗方法井陘綜合技能訓練； 從不同環(huán)境土壤樣品中篩選出能產(chǎn)淀粉酶的芽孢桿菌，并分析比較各種淀粉酶菌株的產(chǎn)淀粉酶活力及總結(jié)各芽孢桿菌在土壤中的分布情況；三、實驗原理 土壤是微生物生活的大本營，它所含微生物無論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的。 芽孢桿菌屬實一類好氧或兼性厭氧、產(chǎn)生抗逆性內(nèi)生孢子的桿狀細菌。待冷至45—50℃時，將兩液混勻倒平板，即成牛奶平板。置于100℃沸水10 min,以殺死非芽孢桿菌。取一個平板，馬上加碘液，立即觀察記錄是否有透明圈出現(xiàn)。C、60176。C下培養(yǎng)，觀察生長情況，并做記錄。陰性反應則無透明環(huán)。C培養(yǎng)24h；記錄菌落周圍是否由透明圈，若有則證明該菌株能夠分解酪氨酸。檸檬酸鹽利用試驗取裝有西蒙斯氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面的試管，分別將少量菌苔接種于各支相應的管中，然后置于37176。C、40176。將純化得到的單菌落分為兩部分，其中一部分接種到培養(yǎng)基內(nèi)，用以保存菌種，另一部分用來做其他試驗。 乙液（ + 5mol/醋酸100ml）。葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基（VP和MR試驗用）蛋白胨5 g，葡萄糖5 g，NaCl 5g，自來水1000 ml，pH ~，121℃滅菌20 min。獲取單個菌落的方法可通過稀釋涂布平板法或平板劃線等技術(shù)完成。其基本原理是選擇適合與待分離微生物的生長條件，如營養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。淀粉篩選培養(yǎng)基淀粉20 g，蛋白胨10 g，NaCl g，瓊脂10 g，自來水1000 ml，pH自然。革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏碘液、95%乙醇，%沙黃染色液；芽孢染色：5%孔雀綠染色液，%石碳酸復紅。染色步驟涂片、干燥、固定；染色：在涂有菌種的載玻片上滴加草酸銨結(jié)晶紫或石碳酸復紅蓋住有菌的部分，染色，12min，傾去染液，用水沖洗直至無染色液為止。C、25176。C培養(yǎng)兩天；取出以上試管，每管分別加入甲基紅2滴（向另一半葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液內(nèi)加入甲基紅2d)，震蕩，若培養(yǎng)液呈紅色，記為陽性（+）反應，若不呈紅色，記為陰性（）。37176。觀察如菌落四周和下面有不透明區(qū)域出現(xiàn)，則表示卵磷脂分解生成脂肪，說明有卵磷脂酶。明膠液化試驗穿刺接種，深度至明膠層2/3處，于37176。糖類發(fā)酵試驗（葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇）直接觀察記錄取斜面培養(yǎng)菌種接種于37176。每種要菌接3管，加塞、包扎好到37℃倒置培養(yǎng)24h。每個稀釋度2 個重復，37℃倒置培養(yǎng)24h。制法（溶解，校正pH，分裝試管，每管約5mL，121℃高壓滅菌15min。 實驗材料與方法 實驗材料選取廣大理南前面、廣大生化樓前小河附近兩處的土壤，五點法采集，邊長15cm。綜合性實驗方案土壤中產(chǎn)淀粉酶芽孢桿菌的篩選及淀粉酶活力的測定