蛋白濃度測定[完成](完整版)
【正文】 廣： BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是10－2000ug/ml； 2. 快速：45分鐘內(nèi)完成測定，比經(jīng)典的Lowry法快4倍而且更加方便。常用的測定蛋白質(zhì)含量方法的比較方 蛋白質(zhì)是一種十分重要的生物大分子：它的種類很多，結(jié)構(gòu)不均一，分子量又相差很大，功能各異，這樣就給建立一個理想而又通用的蛋白質(zhì)定量分析的方法代來了許多具體的困難。試驗一：BCA法BCA法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質(zhì)的影響。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。20ul體系蛋白濃度mg/ml加入C液量ul補足PBS量ul0020218141661428121010312814641645200注意事項1. 在低溫條件或長期保存出現(xiàn)沉淀時，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發(fā)現(xiàn)細菌污染則應(yīng)丟棄。二、考馬氏亮藍G－250染色法（Bradford法）此方法是1976年Bradform建立。血清蛋白質(zhì)測定稀釋血清（或其它蛋白樣品溶液），置入50ml容量瓶中，用生理鹽水稀釋至刻度（此為稀釋500倍，其它蛋白樣品酌情而定）。顏色的吸附對本次測定影響很大。所以同時測定280及260nm兩種波長的吸光度，通過計算可得較為正確的蛋白質(zhì)含量。 算】當?shù)鞍讟悠返奈馐毡戎礎(chǔ)280／，可用下面的公試進行計算：蛋白質(zhì)濃度（mg/ml）＝（ －）K（稀釋倍數(shù)）也可以先計算出A280／A260的比值后從下表中查出校正因子 “F”值，由下面的經(jīng)驗公式計算出溶液的蛋白質(zhì)濃度。四、雙縮脲法【原總蛋白與白蛋白含量之差即球蛋白的含量。另用一支1ml刻度吸管吸取標準血清1ml，置管“2”中（標準管）。肝臟疾病、慢性腎炎以及慢性傳染病有大量抗體生成時，白／球比值變小，甚至倒置。雙縮脲試劑：稱取硫酸銅（CuSO4【原加入5ml的堿性酮試劑，混勻后室溫放置20分鐘后。無標準曲線時，可以與測定管同樣操作的標準管按下式計算蛋白含量：血清蛋白含量（g%）＝【試劑配制】堿性酮溶液：甲液：?！咀⒁馐马棥縏ris緩沖液、蔗糖、硫酸胺、基化物、酚類、檸檬酸以及高濃度的尿素、胍、硫酸鈉、三氯乙酸、乙醇、丙酮……等均會干擾Folin酚反應(yīng)。用一些事情，總會看清一些人。學習參考。既糾結(jié)了自己，又打擾了別人。由于這種呈色化合物組成尚未確立，它在可見光紅外光區(qū)呈現(xiàn)較寬吸收峰區(qū)。取甲液50ml，乙液1ml混合。血清蛋白質(zhì)測定。4H2O）6克，分別用適量蒸餾水溶解，混合后加入10％NaOH溶液300ml，最后加蒸餾水至1000ml。刻度吸管：、5ml、10ml、1ml。在室溫下放置10分鐘后，以管“1”（空白管）調(diào)零，在540nm的波長下進行比色，分別記錄“2”、“3”、“4”管的光密讀數(shù)【計【操三、紫外分光光度法紫外光譜吸收法測定蛋白質(zhì)含量是將蛋白質(zhì)溶液直接在紫外分光光度計中測定的方法，不需要任何試劑，操作很簡便，而且樣品可以回收。 劑】考馬氏亮藍G－250染色液：稱取100mg考馬氏亮藍G－250溶解于50毫升95％的乙醇中，加入100 毫升85％的磷酸，加入稀釋到1升?；靹蚝笫覝胤胖?5分鐘，在5
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1