【正文】 R雙阻斷法 ， （ DNA合成抑制劑 ） 此法適用于 tG＋ G2＋ （ M） tS的細胞類型 ? ： ? 細胞周期時間 （ Te） 是隨細胞類型不同而異 ， 周期內(nèi)四個期的時間亦各不相同 ， 一般規(guī)律是： ? ① S期長 、 M期短； ? ② G1時間 （ tG1） 易變 ， 但 tG2， tS和 tM都變化不大； ③tG1長短是細胞周期速率變化的基礎(chǔ) 。第十一章 細胞增殖及調(diào)控 第一節(jié) 細胞周期與細胞分裂 一 、 細胞周期： ： 細胞增殖 (proliferation)是細胞生命活動中的一個重要部分對于多細胞生物體的生長發(fā)育以及生物種群的延續(xù)都具有十分重要的意義 ， 例如一個成年人約有 1014個細胞構(gòu)成 ， 而如此多的細胞均來源一個受精卵 ， 是通過大量的連續(xù)不斷地細胞分裂增殖以及細胞分化才形成人體的 ， 此外每個人體均每秒鐘還要產(chǎn)生幾十萬個新細胞 ， 來補償體內(nèi)各種細胞 ， 維持機體細胞數(shù)量的相對平衡 。 ： ? 分裂中期阻斷法 ： （ 1） 細胞周期檢驗點： ? 細胞周期沿 G1—S—G2—M有序地進行 ， 是與細胞分裂周期有關(guān)基因 cdc的有序表達結(jié)果 ， 而 cdc基因的表達效應(yīng)是受周期中一些檢驗點 （ or 稱調(diào)控點 ） 監(jiān)控的 ， 以保持嚴(yán)格有序 ， 精確的運轉(zhuǎn) ， 而不正常的細胞會被阻止在檢驗點階段 ， 常說的有 G1/ S轉(zhuǎn)換點 ， G2/M檢驗點和中期后期轉(zhuǎn)換點等這種特異的監(jiān)控機構(gòu)可鑒別細胞周期進程中的錯誤 ， 并誘導(dǎo)產(chǎn)生特異的抑制因子 ， 阻止細胞周期進一步運行 ， 若這些檢驗點功能失控 ， 其后果是細胞癌變 or 細胞 die。 1） 分裂極的確定： ? 紡錘極決定細胞分裂的方向 ， 而其確定與中心?；顒酉嚓P(guān) ， 每個中心體由 2個相互垂直排列的中心粒構(gòu)成 ， 在 S期 ， 每個中心粒端部外側(cè)新生一個短的中心粒 ，與老中心粒垂直分布 ， 到前期 ， 兩對中心粒分別移向相對兩極 ， 有關(guān)中心粒自我裝配 ， 生長和轉(zhuǎn)移是周期性規(guī)律 。 （ 三 ） 后期 (anaphase) ? 此期主要事件是：染色體著絲粒區(qū)縱向斷裂 ，一分為二 ， 兩姊妹染色體單體分別趨向兩級 ， 其原因是 ， 著絲粒區(qū)域在 S期 chr復(fù)制時已奠定了斷裂分離的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ) ， 到后期時細胞質(zhì)中 Ca2+濃度倍增 ，誘導(dǎo)了核區(qū)域的聯(lián)接蛋白質(zhì)解體而出現(xiàn)斷裂分離 。 ? 動物細胞的胞質(zhì)分裂通過胞質(zhì)收縮環(huán)的收縮實現(xiàn) ， 收縮環(huán)由大量平行排列的肌動蛋白組成 。 1） 前期 I各期形態(tài)功能特征： 細線期：染色體是細長盤繞的單條 fibre， 其上有眾多 ch粒分布 。 ? SC主要由堿性蛋白質(zhì)組成并含有 RNA及微量的DNA， 其結(jié)構(gòu)形式為：在緊密配對的 2條同源 chr之間的間隙兩側(cè)各有一條深色的縱向分布的側(cè)生組分 ， 這 2條側(cè)生組分之間是 100nm的寬的明亮中間區(qū) ， 而中間區(qū)中央有一條較淺的縱向分布的中央組分 ， 其次 ， 在側(cè)生組分與中央組分之間又橫向排列有許多 SC—fibre所以 SC結(jié)構(gòu)像 “ 梯子 ” 。 第二節(jié) 細胞周期的調(diào)控 一、研究背景 ? 1970s Rao和 Johnson發(fā)現(xiàn)與 M期細胞 (Hela)融合的間期細胞染色體發(fā)生凝縮，稱為早熟凝集染色體 (prematurely condensed chromosome， PCC)。 Wee1 mutant CDC2蛋白激酶 被抑制 CDC2蛋白激酶 被激活 MPF=CDC2蛋白激酶 +clyclin B Weel 抑制 CDC2的活性 Cdc25 促進 CDC2的活性 ? 1980s Timothy Hunt發(fā)現(xiàn)海膽的卵裂過程中兩種蛋白質(zhì)的含量隨細胞周期振蕩 ， 命名為周期蛋白 (cyclin A和 B)。 ? PCC現(xiàn)象不受物種分類所限制 ， 即人 、 牛 、 馬 、雞 、 魚 、 昆蟲的細胞之間都能誘導(dǎo) PCC ， 因此而言 ，MPF（ 有共性的 ） 在真核細胞中普遍存在的 。 ? 所以 P34 蛋白是 MPF的催化亞單位，而周期蛋白則是 MPF的調(diào)節(jié)亞單位。含有一段約 100個氨基酸的保守序列，稱為周期蛋白框，介導(dǎo)周期蛋白與CDK結(jié)合。 ? 在 G2M期， cyclinA、 cyclinB與 CDK1結(jié)合， CDK1使底物蛋白磷酸化、如將組蛋白 H1磷酸化導(dǎo)致染色體凝縮，核纖層蛋白磷酸化使核膜解體。 – S期檢驗點： DNA復(fù)制是否完成？ – G2/M檢驗點： DNA是否損傷？細胞體積是否足夠大？ – 中 后期檢驗點：紡錘體組裝檢驗點。 ? 作用方式：旁分泌。 – 如通過 ras途徑，激活 MAPK， MAPK進入細胞核內(nèi)，激活 cmyc，myc作為轉(zhuǎn)錄因子促進 cyclin D、 SCF、 E2F等 G1S有關(guān)的基因表達，細胞進入 G1期。 – 最早發(fā)現(xiàn)于毛細血管擴張性共濟失調(diào)癥患者，人類中大約有 1%的人是 ATM缺失的雜合子，表現(xiàn)出對電離輻射敏感和易患癌癥。 – 分裂期周期蛋白 N端有一段序列與其降解有關(guān)，稱降解盒(destruction box)。 ? 已知 30余種，在脊椎動物中為 A1 B13 、 C、 D1E1 F、 G、 H等。 現(xiàn)已知有 A、 B、C、 D、 E、 F、 G、 H等多種 ， 其共同特點是細胞中呈現(xiàn)含量增長與