【正文】 表格中應包括樣品名稱與編號、檢驗日期、檢測項目、檢測依據、試驗條件、使用儀器編號、觀察結果、試驗者和校核者簽名等欄目。必要的器材和試劑應重新制備或滅菌，以防產生系統(tǒng)性誤差。用于滅菌的器械應做定性殺滅試驗。對器械、耐壓或電氣性能及關鍵部件的使用壽命等的鑒定，由相關行業(yè)計量認證考核合格的檢驗機構按其標準進行檢測，提供檢驗報告。對于專用于滅菌，不作它用的消毒劑，只需做枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅試驗，可不做病毒、真菌、分枝桿菌及細菌繁殖體殺滅試驗，但對既用于滅菌，又用于消毒的消毒劑則按上述要求選擇相應微生物進行試驗；對枯草桿菌黑色變種芽孢殺滅達到消毒要求（殺滅對數值≥）的消毒劑，在不低于此濃度用作消毒時可不作病毒、真菌和分枝桿菌殺滅試驗。（3）穩(wěn)定性試驗：所有消毒劑均應進行穩(wěn)定性試驗，可用加速實驗法37℃，90d和/或54℃，14d；也可選用室溫留樣法。（8）對于經過充分清洗的消毒對象專用的消毒劑，可按其使用方法，在殺菌試驗時可減低干擾物的濃度。對多用途的消毒劑，消毒對象所涉及的微生物相同時，若使用濃度相同，選擇各種用途中最短的作用時間。（1）依據申報單位提供產品研制報告和產品的使用說明書進行檢驗。為避免污染應在相對正壓潔凈條件下進行，但有時因特殊需要，用致病菌作指示菌時，則應在生物安全柜（負壓）內進行。 生物負載 bioburden被測試的一個單位物品上承載活微生物的總數。 滅菌保證水平 sterility assurance level，SAL指滅菌處理后單位產品上存在活微生物的概率。 中和產物product of neutralization指中和劑與消毒劑作用后的產物。 消毒劑 disinfectant用于殺滅傳播媒介上的微生物使其達消毒或滅菌要求的制劑。 引言根據《中華人民共和國傳染病防治法》、《中華人民共和國傳染病防治法實施辦法》和《消毒管理辦法》制訂本規(guī)范。 滅菌劑 sterilant可殺滅一切微生物(包括細菌芽孢)使其達到滅菌要求的制劑。 菌落形成單位 colony forming unit，cfu在活菌培養(yǎng)計數時，由單個菌體或聚集成團的多個菌體在固體培養(yǎng)基上生長繁殖所形成的集落，稱為菌落形成單位，以其表達活菌的數量。SAL通常表示為10n。 暴露時間 exposed time消毒或滅菌物品受到消毒因子作用的時間。對無菌產品的無菌檢查試驗， 必須在100 級潔凈度的實驗室，或100 級層流操作柜中進行。（2）用于評價消毒劑消毒效果的實驗室試驗應以懸液定量法為主，試驗須重復3次。若使用時間相同，選擇各種用途中最低的使用濃度。 消毒產品鑒定測試項目的確定（1）有效成分含量的測定：有效成分系指具有殺菌作用的成分。以化學成分為主的消毒劑，用化學法進行穩(wěn)定性實驗；以植物為主要有效成分的消毒劑，用微生物法進行穩(wěn)定性實驗；以化學成分和植物為有效成分的消毒劑，同時用化學法和微生物法進行穩(wěn)定性實驗。表11 殺滅試驗中微生物的選擇消毒對象微 生 物 的 種 類金黃色葡萄球菌綠膿桿菌大腸桿菌白色念珠菌黑曲霉菌白色葡萄球菌龜分枝桿菌膿腫亞種枯草桿菌黑色變種芽孢脊髓灰質炎病毒手皮膚和黏膜 ++++++足+++空氣+醫(yī)療器械和用品(滅菌與高水平消毒)+醫(yī)療器械和用品(中水平消毒)++++醫(yī)療器械和用品(低水平消毒)+++一般物品表面和織物++食(飲)具++飲水和游泳池水+瓜果、蔬菜+【注】表中‘+’為必做試驗的微生物，消毒劑特指對某微生物具有殺滅作用者，則除按表中要求外，還需另選做該微生物殺滅試驗。（1）殺菌因子強度或濃度的測定殺菌因子指消毒器械所產生的具有殺菌作用的物理或化學因子。（4）安全性試驗包括電器安全試驗和消毒器械產生的化學因子的毒理學試驗。中和劑鑒定試驗，應將各組 3 次重復試驗結果平行列出， 以便對比分析。表格中每一欄目應用藍黑或碳素墨水逐項填寫。試驗組應列出其殺滅對數值，殺滅對數值≥，無須列出具體數值，當殺滅對數值≤，則應列出具體殺滅對數值。（2）實用劑量不低于模擬現場試驗或現場試驗所測得的結果。 溶液或消毒劑的有效成分含量的表示，以mg/L或mg/kg為主。 滴定液的標定及所有樣品測定均平行進行兩次。 送檢3批具有代表性的樣品。(1)第一階段 (急性毒性試驗、皮膚刺激試驗和黏膜刺激試驗)1)急性經口毒性試驗2)急性吸入毒性試驗3)皮膚刺激試驗4)急性眼刺激試驗5)陰道黏膜刺激試驗6)皮膚變態(tài)反應試驗(2)第二階段 (亞急性毒性試驗和致突變試驗)1)亞急性毒性試驗2)致突變試驗 ① 體外哺乳動物細胞基因突變試驗 (體細胞基因水平，體外試驗) L5178Y 細胞基因突變試驗 V79 細胞基因突變試驗② 體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗 (體細胞染色體水平，體外試驗)③ 小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗 (體細胞染色體水平，體內試驗)④ 哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗 (體細胞染色體水平，體內試驗)⑤ 程序外 DNA 修復合成試驗 (DNA水平，體外試驗)⑥ 小鼠精子畸形試驗 (性細胞基因和染色體水平，體內試驗)⑦ 睪丸生殖細胞染色體畸變試驗 (性細胞染色體水平，體內試驗)小鼠精原細胞染色體畸變試驗小鼠精母細胞染色體畸變試驗(3)第三階段（亞慢性毒性試驗和致畸胎試驗）1)亞慢性毒性試驗2)致畸胎試驗(4)第四階段（慢性毒性試驗和致癌試驗）1)慢性毒性試驗2)致癌試驗 各種消毒產品毒理學試驗的規(guī)定為便于對消毒劑進行毒理學評價，將消毒劑分為三類。(3)第三類消毒劑：指與國內已獲準生產的消毒劑屬于同類的產品或植物成分組配的消毒劑。使用過程中，必需接觸皮膚的其它消毒劑，也應增做完整皮膚刺激試驗。消毒劑原形是指在銷售過程中原包裝的粉劑、片劑或原液。（2）高水平消毒法：可以殺滅各種微生物，對細菌芽孢殺滅達到消毒效果的方法。（2）中度危險性物品：這類物品僅和破損皮膚、黏膜相接觸，而不進入無菌的組織內。（4）親水病毒（沒有脂質包膜的病毒），例如甲型肝炎病毒、脊髓灰質炎病毒等。但中度危險性物品的消毒要求并不相同，有些要求嚴格，例如內窺鏡、體溫表等必須達到高水平消毒，需采用高水平消毒法消毒。（4）根據消毒物品的性質選擇消毒方法選擇消毒方法時需考慮，一是要保護消毒物品不受損壞，二是使消毒方法易于發(fā)揮作用。(1) 熱力滅菌：干熱滅菌時應防止燃燒；壓力蒸汽滅菌應防止發(fā)生爆炸事故及可能對操作人員造成的灼傷事故。（4）各類傳染病(包括非法定傳染病)爆發(fā)流行時應在當地疾病預防控制和監(jiān)督機構的監(jiān)督指導下，由有關單位及時進行消毒，或由當地疾病預防控制和監(jiān)督負責對其進行消毒處理。常用消毒劑有過氧乙酸、含氯消毒劑、碘伏等。加強易感人群的保護。3)對脫掉外衣應放在自帶的布袋中（不要放在污染或可能受到污染的地方）。8)消毒前應關閉門窗，將水缸蓋好，將未被污染的貴重衣物、飲食類物品、名貴字畫及陳列物品收藏好。13)室內消毒后，必要時對廁所、垃圾、下水道口、自來水龍頭、缸水和井水等進行消毒。(4)消毒人員注意事項1）出發(fā)前，要檢查應攜帶的消毒工具是否齊全無故障，消毒劑是否足夠。凡應消毒的物品，不得遺漏。 菌懸液與菌片的制備 適用范圍制備消毒劑殺菌試驗用細菌懸液與菌片，以供消毒劑殺菌試驗時使用。（7）革蘭染色液：見附錄A。 細菌懸液制備程序（1）細菌繁殖體懸液的制備1）取凍干菌種管，在無菌操作下打開，以毛細吸管加入適量營養(yǎng)肉湯，輕柔吹吸數次，使菌種融化分散。應當天使用不得過夜。當芽孢形成率達 95% 以上時，即可進行以下處理。水洗，待干后鏡檢。棄上清液，加蒸餾水吹吸使芽孢重新懸浮。 菌片的制備程序（1）消毒試驗中使用的菌片是以菌液滴加于載體上制成。在剪開前，先將脫脂的布塊按載體規(guī)定的大小，抽去邊緣一周的經緯紗各一根，再按抽紗痕剪開。菌液滴加量每片為10μl。此時，應提高初始菌濃度，以便達到所需的菌量。（4）電動混合器 操作程序本規(guī)范要求在殺菌試驗中的活菌培養(yǎng)計數統(tǒng)一使用傾注法。（2）將試管按需要數量分組排列于試管架上， 每管加入 稀釋液。一般需接種2個～3個不同稀釋度。（10）計數菌落時，一般以肉眼觀察，必要時用放大鏡檢查。（1）平板間誤差率計算公式：（2）稀釋度間誤差率計算公式： 注意事項（1）嚴格無菌操作，防止污染。勿使培養(yǎng)基外溢，以免影響結果的準確性和造成環(huán)境的污染。（3）不破壞培養(yǎng)基的營養(yǎng)成份，不影響其透明度。多用于難以找到適宜中和劑的消毒劑試驗中，如以植物提取物制備的消毒劑。操作要點：①對接觸消毒劑的微生物樣本，在達到規(guī)定作用時間后，即時以對微生物無害的稀釋液稀釋，稀釋比例隨試驗需要決定；②電動混合或敲打振蕩，使之混勻；③吸取稀釋樣液進行隨后培養(yǎng)檢測。 中和劑鑒定試驗 目 的確定所選中和劑是否適用于擬進行的細菌和真菌殺滅試驗。（2）在確定用何種中和劑進行鑒定試驗有困難時，可對多個中和劑進行初選以確定（見本款文后【附】）。對細菌繁殖體，在大腸桿菌（8099）、金黃色葡萄球菌（ATCC 6538）、銅綠假單胞菌（ATCC 15442）中任選其一進行試驗即可；對細菌芽孢，以枯草桿菌黑色變種（ATCC 9372）芽孢進行。當3組平板上長出的菌落數接近，如果以陽性對照組為標準（X），前兩組長菌數為（X177。 中和劑懸液定量鑒定試驗操作程序 根據試驗分組，準備足量試管和平皿，依次進行編號。1℃ 水浴中 5min 后，混勻。如平板生長菌落數均超過 300 個，應以稀釋液對上述最終樣液作適宜稀釋后，再次進行活菌培養(yǎng)計數。1℃ 水浴中 5min 后，（，作用 10min 配制而成）于試管內，混勻。如出現細菌生長，可能提示試驗材料或操作過程中有污染。用電動混合器混合20s，或將試管振打80次，吸取該最終樣液 ，接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計數。1℃ 水浴中 5min 后，用無菌鑷子夾入 1 菌片，并使浸透于中和劑內，作用 10min。（5）第 5 組。應重新進行試驗。否則，說明試劑有污染，應更換無污染的試劑重新進行試驗。（2）離心沉淀法需用離心機與離心管。濃度過低不足以顯示能否將高濃度消毒劑全部去除。通常，懸液鑒定試驗結果可用于載體試驗。1℃中水浴）于試管內，混勻，作用至試驗預定時間。3） 第 3 組。2） 第 2 組有遠較第 1 組為多，但較第 4（組）為少的試驗菌生長。此外，根據消毒劑特定用途或試驗特殊需要，準備其他菌種的懸液或菌片。懸液試驗用3%BSA溶液，載體試驗直接用TSB(見附錄A)。 試驗分組試驗中應分以下各組：（1）試驗組。根據各種試驗的規(guī)定，用稀釋液代替消毒劑溶液，按上述同樣的步驟進行試驗。（4）待試驗菌與消毒劑相互作用至各預定時間， 經滅菌的中和劑中，混勻。按每片 的量，吸取相應濃度的消毒劑溶液注入平皿中。1℃ 水浴箱內 5min 后，用無菌鑷子分別放入預先制備的菌片 3 片，并使之浸透于消毒液中。如平板上生長的菌落數較多時，可進行系列10倍稀釋后，再進行活菌培養(yǎng)計數。 懸液定量殺菌試驗操作程序（1）首先按產品說明書要求配制消毒液。第一種適用于消毒產品鑒定。（7）含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（中和劑TSB），中和劑經鑒定合格。消毒劑溶液濃度應以所含有效成份為準。3） 第 4 （組）測定的結果，微生物數量應在 1107 cfu/ml～5107 cfu/ml 之間，其組間差不得超過兩組回收菌數平均值的50%。1℃ 水浴中 5min 后，混勻。吸取最終樣液 接種于平皿內，做活菌培養(yǎng)計數。2）（菌懸液 + 消毒劑） + 過濾沖洗法處理 → 培養(yǎng)觀察所用去除消毒劑處理后，受到消毒劑作用后的試驗菌是否能恢復生長。此時可增加處理時間或次數，亦可適當縮短作用時間再試。（4）無菌稀釋液、沖洗液。 注意事項（1）試驗所分各組均有其特定意義，不得任意刪減。（2） 第 2 組有較第 1 組為多，但較第 5（組）為少的試驗菌菌落生長，并符合表 21 要求者。1℃ 水浴中 5min 后， 用無菌鑷子夾入 1 菌片，并使浸透于稀釋液中。吸取該最終樣液 ，用中和劑做 10 倍系列稀釋，選適宜稀釋度懸液，吸取 ，分別接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計數。吸取消毒劑 于無菌小平皿內，將其置 20℃177。 中和劑載體定量鑒定試驗操作程序根據試驗分組，準備足量試管和平皿，依次進行編號。（5）第5組。置 20℃177。接種于平皿中，做活菌培養(yǎng)計數。1℃水浴中待用。 試驗分組第1組 消毒劑 + 菌懸液 →培養(yǎng)觀察消毒劑對試驗菌有無殺滅或抑制能力。（6）鑒定時根據所用殺菌試驗方法，使用相應的懸液或載體定量試驗。濃度過低，則不足以顯示能否將高濃度消毒劑全部中和。（2）刻度吸管（、）。（2）每次吸液，均須更換一支無菌吸管，以防交叉污染。操作要點：①準備好裝有相應孔徑微孔濾膜的濾器；②濾膜及濾器需先經滅菌處理；③初次過濾后，應使用一定量對微生物無害的稀釋液進行沖洗，沖洗次數一般以洗凈消毒劑為準；④最后一次沖洗、濾凈后，將微孔濾膜以無菌操作法取出，進行隨后的培養(yǎng)檢測。 除藥的方法（1）化學