細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)匯總(完整版)
【正文】 凝血 ， 實(shí)驗(yàn)組凝血。本實(shí)驗(yàn)將紅細(xì)胞分別放于各種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞膜對(duì)不同溶質(zhì)的通透性不同，使得不同溶質(zhì)透入細(xì)胞的速度相差很大，有些溶質(zhì)甚至不能透入細(xì)胞。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞表面間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。]2．觀察10%的雞紅細(xì)胞懸液，可見(jiàn)該懸液為一種不透明的紅色液體3．觀察溶血現(xiàn)象 取一支試管，再加入4ml 蒸餾水， 雞紅細(xì)胞懸液，混勻后注意觀察溶液顏色的變化，可見(jiàn)溶液由不透明的紅色變成透明的紅色液體（可將試管貼靠在書(shū)上，隔著試管看書(shū)中的字，如發(fā)現(xiàn)溶血?jiǎng)t文字可被看清）。實(shí)驗(yàn)三：聚乙二醇（PEG）介導(dǎo)的細(xì)胞融合【基本原理】?jī)蓚€(gè)以上的細(xì)胞合并成為一個(gè)雙核或多核細(xì)胞稱為融合細(xì)胞。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，如研究核質(zhì)關(guān)系、繪制染色體基因圖譜、制備單克隆抗體、育種等。3．棄上清液(用吸管吸去)，％生理 鹽水5mL，用指彈法（或吸管輕吹）將細(xì)胞團(tuán)塊彈散，混勻后1000r／min 離心5min；重復(fù)上述條件，再離心洗滌1 次。實(shí)驗(yàn)四：線粒體和液泡系的超活染色與觀察【基本原理】線粒體是細(xì)胞內(nèi)一種重要細(xì)胞器，細(xì)胞的各項(xiàng)活動(dòng)所需要的能量，主要是通過(guò)線粒體呼吸作用來(lái)提供的。2．小麥（或綠豆）幼根根尖液泡系的中性紅染色觀察小麥（或綠豆）幼苗根尖（12cm）縱切面切片，1/3000 中性紅溶液1 滴染色510min，載玻片于37℃恒溫水浴，蓋上蓋玻片壓扁根尖，顯微鏡下觀察。它們對(duì)細(xì)胞形態(tài)的維持、細(xì)胞的生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)、分裂、分化和物質(zhì)運(yùn)輸?shù)绕鹬匾饔谩＃?）秋水仙素處理，能使大量細(xì)胞分裂停留在中期，有助于觀察染色體。自來(lái)水沖洗，晾干后鏡檢。DNA經(jīng)溫稀酸水解，其上的嘌呤堿和脫氧核酸之間的鍵打開(kāi)，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff試劑中的無(wú)色品紅反應(yīng)，形成紫紅色的化合物， 因此Feulgen反應(yīng)中，顯示紫紅色的細(xì)胞部位，即標(biāo)志有DNA的存在。細(xì)胞質(zhì)DNA 也會(huì)出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。但在上述固定劑中，以O(shè)sO4 和Carnoy 效果較好，OsO4（1%%)是Feulgen反應(yīng)的理想固定劑，只是因OsO4 價(jià)錢(qián)較貴，故一般多采用Carnoy 固定液。有一大類(lèi)試劑均稱為堿性品紅，它們實(shí)際上是由幾種產(chǎn)品分別組成的。含臺(tái)盼藍(lán)的淀粉肉湯，可使腹腔中有較多的吞噬細(xì)胞，以供觀察吞噬活動(dòng)。每一個(gè)物種的細(xì)胞一般都有一定數(shù)目、形狀和大小的染色體。對(duì)于骨髓染色體標(biāo)本的制作，一般包括以下幾個(gè)要點(diǎn)：1）用一定劑量的秋水仙素破壞紡錘絲的形成，使細(xì)胞分裂停滯在中期，使中期染色體停留在赤道面處；2）用低滲法使將細(xì)胞膨脹，再經(jīng)固定液固定，盡可能使染色體的結(jié)構(gòu)保持不變，在滴片時(shí)細(xì)胞被脹破，使細(xì)胞的染色體鋪展到載片上；3）空氣干燥法可使使細(xì)胞的染色體在載片上展平，經(jīng)Giemsa 染色后便可觀察到染色體的顯微圖象。將載玻片在酒精燈上微烤。[附] 染色體標(biāo)本制做質(zhì)量不佳的可能原因：1． 秋水仙素用量太多或處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，都會(huì)導(dǎo)致染色體的過(guò)分縮短或著絲點(diǎn)迅速裂解，最終使染色體被破壞或溶解。因此標(biāo)本愈新鮮，固定愈及時(shí)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)愈清晰，染色效果愈好。試劑的配制（1） 6%淀粉肉湯：、蛋白胨1g、再加入可溶性淀粉6g，溫浴溶解，煮沸15分鐘滅菌，置4176。C保存?！?內(nèi)容與方法 】取20g左右小白鼠一只，每日往其腹腔注射6%淀粉肉湯1ml，連續(xù)三天。C溫育30分鐘。1觀察：將制備好的標(biāo)本置于光鏡下，在高倍鏡下可見(jiàn)許多呈陽(yáng)性反應(yīng)的巨噬細(xì)胞，其細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)許多大小不等的棕色或棕黑色顆粒和斑塊，這便是酸性磷酸酶存在的部位（溶酶體），有些細(xì)胞內(nèi)酸性磷酸酶極為豐富，故整個(gè)細(xì)胞質(zhì)都呈現(xiàn)出黑色沉淀。放入盛有10%福爾馬林過(guò)3~~（注意抽取部位要盡量與注射部位相一致，否則難以抽出）或用頸椎脫臼法處死小白鼠后，打開(kāi)腹腔，用注射器（不裝針頭）直接吸取腹腔液。（4） 福爾馬林（2） %生理鹽水：。染色的物理作用是利用毛細(xì)管現(xiàn)象，滲透、吸收和吸附作用，使染料的色素顆粒牢固地進(jìn)入組織細(xì)胞，并使其顯色。低滲過(guò)度時(shí), 細(xì)胞會(huì)破裂，成膜上??；不足時(shí)則染色體積在一起，因此，低滲處理直接影響染色體分散之好壞。8．滴Giemsa 染液6～8 滴于載玻片上，室溫下染色3 分鐘左右，自來(lái)水沖洗，用電吹風(fēng)吹干（或空氣干燥）。2．處死青蛙，取其股骨及肱骨，去掉骨上的肌肉。核型分析均是以中期染色體為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)制作出的染色體標(biāo)本進(jìn)行照相以獲得染色體的顯微圖象，并將其剪裁排列即成。2．實(shí)驗(yàn)時(shí)，每組取一只上述處理的小鼠，腹腔注射1% ~1ml，注射后輕揉小鼠腹部以使紅細(xì)胞懸液分散均勻。此外，Schiff 試劑的配制方法也可影響DNA 的染色反應(yīng)。3．水解時(shí)間：Feulgen 反應(yīng)通常用稀酸進(jìn)行水解，但水解的時(shí)間一定要適當(dāng)。對(duì)照切片應(yīng)不經(jīng)水解直接放在schiff 劑內(nèi)，且應(yīng)為負(fù)反應(yīng)。【實(shí)驗(yàn)用品】3．試劑 1）schiff 氏試劑 堿性品紅置入三角燒瓶?jī)?nèi)沸騰的蒸餾水中，時(shí)時(shí)搖動(dòng)玻璃瓶，煮沸5min 使之充分溶解，冷卻至50℃時(shí)過(guò)濾，加入10ml 1mol/L HCl，冷至25℃時(shí)， 偏重亞硫酸鈉（Na2S2O3）無(wú)水亞硫酸鈉（NaHSO3），在室溫冷暗處至少放置24h（有時(shí)需2~3 天），使其顏色退至淡黃色，密封瓶口，藏于暗處，最好保
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