細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)匯總-閱讀頁
2025-04-07 12:04本頁面
【正文】 試劑的作用：Feulgen 反應(yīng)成功與否的一個非常關(guān)鍵的因素，就是schiff 試劑的質(zhì)量。因此只能選用注明“DNA 染色反應(yīng)用”的堿性品紅才行。實(shí)驗(yàn)八：小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬現(xiàn)象的觀察【基本原理】細(xì)胞的吞噬作用在單細(xì)胞動物是攝取營養(yǎng)物質(zhì)的方式，在高等動物內(nèi)的巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等具有吞噬功能，是機(jī)體非特異性免疫功能的重要組成部分。吞噬泡的形成需要有微絲及其結(jié)合蛋白的幫助，如果用降解微絲的藥物細(xì)胞松弛素B 處理細(xì)胞，則可阻斷吞噬泡的形成；免疫抑制劑環(huán)磷酰胺（CYP）對巨噬細(xì)胞的吞噬作用也有影響。當(dāng)機(jī)體受到某些損傷因素時（如微生物或其它病原體或異物侵入），能招引巨噬細(xì)胞，同時巨噬細(xì)胞有趨化性，主動向病原體或異物游走，在接觸到病原體或異物時，細(xì)胞膜凹陷伸出偽足包圍異物，并發(fā)生胞吞作用形成吞噬泡，繼而細(xì)胞質(zhì)中的溶酶體與吞噬泡融合，消化分解異物?！痉椒ú襟E】1．實(shí)驗(yàn)前二天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉湯（含臺盼蘭，起標(biāo)記作用）1ml 以刺激腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞（此步由教師在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行完畢）。3．20 分鐘后，用頸椎脫臼法處死小鼠，迅速剖開小鼠腹部，~1ml 生理鹽水，用吸管輕輕使生理鹽水與腹腔液混勻。5．鏡檢【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】在高倍鏡下可見有許多較大的圓形和形狀不規(guī)則的巨噬細(xì)胞，因未染色細(xì)胞核不易見到，其胞質(zhì)中含有數(shù)量不等的蘭色圓形小顆粒（即吞入的含臺盼蘭的淀粉肉湯所形成）；還可見少量黃色橢圓形有明顯細(xì)胞核的雞紅細(xì)胞，慢慢移動玻片標(biāo)本，仔細(xì)觀察視野中的巨噬細(xì)胞表面，有的紅細(xì)胞已部分被吞入；有的巨噬細(xì)胞內(nèi)已吞入了一個或多個紅細(xì)胞形成吞噬泡。染色體作為遺傳物質(zhì)DNA 的載體, 對生物的遺傳、變異、進(jìn)化和個體發(fā)生, 以及細(xì)胞的增殖和生理過程的平衡控制等都具有十分重要的意義。將體細(xì)胞核中全部染色體按照其大小、著絲粒位置，以至帶型有序地排列起來，此模式圖象排列即為核型（karyotype）或染色體組型。華裔學(xué)者莊有興（Joe Hin Tjio） 合作, 利用低滲法研究胎兒肺組織的染色體標(biāo)本制做方法，終于在1956 年首次確定了人類的染色體數(shù)目是46 條，而不是前人所主張的48 條，這為后來的人類核型研究奠定了基礎(chǔ)。在正常動物體中，精巢和骨髓均為是活躍分裂的組織，可不經(jīng)PHA 處理直接用來制作染色體標(biāo)本。骨髓細(xì)胞具有高度的分裂活性，經(jīng)秋水仙素或秋水酰胺處理后，使分裂細(xì)胞阻斷在有絲分裂中期，再經(jīng)低滲處理、固定、滴片、染色等步驟，可制作較好的骨髓細(xì)胞的染色體標(biāo)本?！痉椒ú襟E】1．取青蛙，于實(shí)驗(yàn)前7~8 小時，腹腔注射秋水仙素（按每克體重6 微克）。3．用骨剪將股骨頭的兩端剪去,用注射器吸取1mL0．075 mol/L 氯化鉀溶液；注入骨髓腔將骨髓洗出于刻度離心管中。5．離心機(jī)離心(2000 轉(zhuǎn)／分鐘)5分鐘去上清.6|. 加入新配制的卡諾固定液1ML固定20分鐘（甲醇3：冰醋酸1）。7．（視細(xì)胞多少而定）制成細(xì)胞懸液，用吸管吸取細(xì)胞懸液，滴2～ 3 滴于預(yù)冷的載玻片上，并吹散細(xì)胞。再用電吹風(fēng)將標(biāo)本吹干（或空氣干燥）。（注：雞染色體的制作方法基本相同）。【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】在顯微鏡下，染色體被染成紫紅色，胞漿完全不著色。小鼠的染色體數(shù)為40 條，多為端部和亞端部染色體，只有2 對亞中部著絲粒染色體。低滲液的量、處理時間均與細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)。 。4．固定液要隨用隨配, 固定徹底后再打散細(xì)胞團(tuán)塊, 否則細(xì)胞容易破碎, 染色體分散亦受到影響。固定（fication）目的是保持細(xì)胞自然形態(tài)，防止細(xì)胞自溶和細(xì)菌所致的腐??；固定液能沉淀和凝固細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和破下細(xì)胞內(nèi)溶酶體酶，使細(xì)胞不但保持自然形態(tài)，而且結(jié)構(gòu)清晰，易于著色。染 色染色的目的和原理：染色的日的是借助于一種或多種染料，使組織和細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)分別著不同的染色，這樣在顯微鏡下能清楚地觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，作出正確判斷。染色的化學(xué)作用是滲入組織細(xì)胞的染料與其相應(yīng)的物質(zhì)起化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生有色的化合物。這類酶按最適pH值又可分為兩類，稱為堿性磷酸酶；，稱為酸性磷酸酶。本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為材料顯示該酶的存在。C冰箱中保存，使用時水浴融化。（3） 酸性磷酸酶工作液：① ：（A液），再稱取醋酸鈉（NaAc置4176。② 3%β甘油磷酸鈉溶液：稱取β甘油磷酸鈉3g溶于100ml蒸餾水中，4176。③ 工作液：臨用時，稱取硝酸鉛25mg,，待全部溶解后，再緩慢地滴加入3%，同時快速攪動，防止產(chǎn)生絮狀物。鈣固定液：先稱取無水CaCl2 10g溶于100ml蒸餾水中配成10%氯化鈣溶液，取該液10ml和福爾馬林液10ml加入到80ml蒸餾水混勻，即成福爾馬林（5） 2%硫化銨：量取2ml硫化銨加入到98ml蒸餾水中，現(xiàn)配現(xiàn)用。C貯存，使用水浴加溫融化。在第三次注射后3~4小時，再向腹腔注射生理鹽水1ml。往預(yù)冷的蓋玻片上滴一滴腹腔液，立即用牙簽涂后放入小培養(yǎng)皿4176。冷風(fēng)吹干玻片，如室溫低于20176。往蓋玻片上滴加酸性磷酸酶工作液兩滴（或?qū)⒉Ｆ迦胧⒂兴嵝粤姿峁ぷ饕旱男∪旧字校?7176。取出蓋玻片用蒸餾水沖洗，然后立于吸水紙上吸去多余水分。鈣固定液的小染色缸內(nèi)處理5分鐘，進(jìn)行后固定。放入2%硫化銨溶液中處理3~5分鐘。1取一載玻片，往其中滴一滴明膠甘油封固劑，將帶水的蓋玻片有細(xì)胞的一面朝下，慢慢蓋向載玻片上的明膠甘油，使蓋玻片封固在載玻片上（注意避免氣泡的產(chǎn)生）。
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