細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)匯總-全文預(yù)覽
【正文】 ∣ 90℃保溫，15min ∣ ↙↓ H2o 5min ↙ 1mol/L Hcl 室溫 15min ↓ H2O漂洗 ↓ Schiff 試劑 4060min ↓ 亞硫酸水溶液沖洗三次（每次5分鐘） ↓ 自來水 ∣ 將染色后的根尖或表皮漂洗干凈?！緦?shí)驗(yàn)用品】3．試劑 1）schiff 氏試劑 堿性品紅置入三角燒瓶?jī)?nèi)沸騰的蒸餾水中，時(shí)時(shí)搖動(dòng)玻璃瓶，煮沸5min 使之充分溶解，冷卻至50℃時(shí)過濾，加入10ml 1mol/L HCl，冷至25℃時(shí)， 偏重亞硫酸鈉（Na2S2O3）無水亞硫酸鈉（NaHSO3），在室溫冷暗處至少放置24h（有時(shí)需2~3 天），使其顏色退至淡黃色，密封瓶口，藏于暗處，最好保存于4℃冰箱中（可保存數(shù)月或更長(zhǎng)時(shí)間）。其反應(yīng)機(jī)制如下圖所示。因?qū)NA 的顯示反應(yīng)具有高度專一性，故常被用來顯示細(xì)胞內(nèi)DNA的分布情況。取出，用吸管吸取34根根尖置于載玻片上，吸干水后搗碎，滴Carnoy液3滴涂開，酒精燈烤干。實(shí)驗(yàn)步驟：將小麥種子培養(yǎng)在培養(yǎng)在培養(yǎng)皿中，室溫下發(fā)芽，待胚根長(zhǎng)達(dá)12厘米時(shí)。4．戊二醛作用：良好的固定劑，使細(xì)胞結(jié)構(gòu)保持它原有狀態(tài)；5．考馬斯亮蘭作用：非專一性結(jié)合蛋白質(zhì)，使蛋白著色（藍(lán)色）。【實(shí)驗(yàn)用品】1．材料：新鮮洋蔥鱗莖2．試劑 1） M 緩沖液（pH ）各成分終濃度為：50mmol/L 咪唑(MW:)； 50mmol/L KCl(MW:)； 由于細(xì)胞經(jīng)TritonX100 抽提后剩下的主要是細(xì)胞骨架成分，使得顯現(xiàn)更清晰。當(dāng)用適當(dāng)濃度的TritonX100 處理細(xì)胞時(shí)，能溶解質(zhì)膜結(jié)構(gòu)中及細(xì)胞內(nèi)許多蛋白質(zhì)，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)卻不被破壞顯得更清晰，M緩沖液洗滌細(xì)胞，可以提高細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性，戊二醛固定能較好地保存細(xì)胞骨架成分，經(jīng)考馬斯亮藍(lán)R250 染色后，可使細(xì)胞骨架蛋白著色，而胞質(zhì)背景著色弱，有利細(xì)胞骨架纖維顯示?！痉椒ú襟E】1．線粒體的超活染色與觀察1）口腔上皮細(xì)胞線粒體的超活染色：1/5000 詹納斯綠B12 滴，口腔上皮細(xì)胞（牙簽刮取），載玻片于37℃恒溫染色1015min，顯微鏡下觀察。詹納斯綠 B（Janus green B）是線垃體的專一性活細(xì)胞染色劑，毒性很小，屬于堿性染料，解離后帶正電，由電性吸引堆積在線粒體膜上?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個(gè)同核體細(xì)胞。5．（每4 人）取懸液1mL 到1 個(gè)試管中， mL 預(yù)熱的50％PEG 混勻，置于30℃水浴中溫浴3－5min；取未融合和融合的血細(xì)胞懸液各1 滴分別滴于載玻片上的兩側(cè)，蓋上蓋玻片。2．（共2 組）取雞紅細(xì)胞懸液1mL，移人10mL 離心管， 加入4mL ％生理鹽水混勻。目前應(yīng)用最廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎?、?jiǎn)便，且融合效果穩(wěn)定。這一技術(shù)已成為研究細(xì)胞遺傳、細(xì)胞免疫、腫瘤和生物新品種培育的重要手段。人工細(xì)胞融合開始于五十年代，六十年代到七十年代作為一門新興的技術(shù)發(fā)展很快，應(yīng)用范圍極廣。膜通透性大小主要取決于分子大小和分子極性。① 氯化銨 ② 硝酸鈉 ③ 硫酸鈉 ④ 醋酸胺⑤ 草酸銨 ⑥ 葡萄糖 ⑦ 甘油 ⑧ 乙醇⑨ 丙酮【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 土豆凝集素能使雞紅細(xì)胞凝集，PBS 對(duì)照液中紅細(xì)胞分散均勻?！痉椒ú襟E】1．制備土豆凝集素液和紅細(xì)胞懸浮液，制備無血清的雞紅細(xì)胞懸液，使凝集素液和紅細(xì)胞懸液混合，靜置后，在光鏡（低倍）下觀察凝集素使紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象?？蛇x擇性地讓某些物質(zhì)進(jìn)出細(xì)胞，各種物質(zhì)出入細(xì)胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶劑，水分子可以按照物質(zhì)濃度梯度從滲透壓低的一側(cè)通過細(xì)胞膜向滲透壓高的一側(cè)擴(kuò)散，以至于在高滲環(huán)境中，動(dòng)物細(xì)胞會(huì)失水而收縮；在低滲環(huán)境中，動(dòng)物細(xì)胞會(huì)吸水膨脹直至破裂。實(shí)驗(yàn)一、二：細(xì)胞凝集反應(yīng)和細(xì)胞膜通透性的觀察【基本原理】細(xì)胞膜表面的有分支狀糖外被，細(xì)胞間的聯(lián)系、細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、免疫反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生等都和細(xì)胞表面的分支狀糖分子有關(guān)。細(xì)胞膜是細(xì)胞與外界環(huán)境進(jìn)行物質(zhì)交換的結(jié)構(gòu)。由于各種溶質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度不同，所以不同的溶質(zhì)誘導(dǎo)紅細(xì)胞溶血的時(shí)間不同，相反可通過測(cè)量溶血時(shí)間來估計(jì)細(xì)胞膜對(duì)各種物質(zhì)通透性的大小。4．觀察雞紅細(xì)胞對(duì)不同物質(zhì)的通透性（1）取一支試管， 的Nacl 溶液4ml， 雞紅細(xì)胞懸液，輕輕搖勻，用上述方法觀察是否出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如出現(xiàn)溶血，記下發(fā)生溶血所需要的時(shí)間（從加入4ml 溶液算起）（2）按上述方法分別加入下列9種溶液是否導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。醋酸銨草酸銨氯化銨乙醇甘油丙酮葡萄糖。在通常情況下，兩個(gè)細(xì)胞接觸并不發(fā)生融合現(xiàn)象，因?yàn)楦髯源嬖谕暾募?xì)胞膜，在特殊融合誘導(dǎo)物的作用下，兩個(gè)細(xì)胞膜發(fā)生一定的變化，就可促
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