細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)匯總-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 進(jìn)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞聚集，相接觸的細(xì)胞膜之間融合，繼之細(xì)胞質(zhì)融合，形成一個(gè)大的融合細(xì)胞。因此，融合細(xì)胞的研究為生物學(xué)無論在基礎(chǔ)理論上或生產(chǎn)實(shí)踐上開辟了一條新的道路。細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多． 常用的主要有滅活的仙臺(tái)病毒(Sendai virus) ， 聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和電脈沖?！痉椒ú襟E】1．采血及雞紅細(xì)胞懸液的制備（同教材57 頁(yè)）。4．收集最后1 次離心沉淀的血細(xì)胞，加入適量（5－8mL）的GKN 液，輕吹散，混勻。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞?；铙w染色是應(yīng)用無毒或毒性較小的染色劑真實(shí)地顯示活細(xì)胞內(nèi)某些結(jié)構(gòu)而又很少影響細(xì)胞生命活動(dòng)的一種染色方法。中性紅對(duì)液泡系的染色具有專一性，將活細(xì)胞中的液泡系染成紅色?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】口腔上皮細(xì)胞的線粒體分布 洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞線粒體分布 植物根尖液泡的中性紅染色實(shí)驗(yàn)五：植物細(xì)胞微絲束的光學(xué)顯微鏡觀察【基本原理】細(xì)胞骨架在通常情況下不穩(wěn)定：如低溫、高壓、餓酸處理等。本實(shí)驗(yàn)用普通光鏡觀察到細(xì)胞骨架，是因?yàn)楣羌芾w維成束分布、結(jié)構(gòu)經(jīng)染色后，有夸大作用。光學(xué)顯微鏡下細(xì)胞骨架的形態(tài)學(xué)觀察多用1% Triton X100 處理細(xì)胞，可使細(xì)胞膜溶解，而細(xì)胞骨架系統(tǒng)的蛋白質(zhì)被保存， 再用考馬斯亮蘭R250 染色，使得胞質(zhì)中細(xì)胞骨架得以清晰顯現(xiàn)。3．EDTA（乙二胺四乙酸）和EGTA（乙二醇雙醚四乙酸）作用：前者可螯合大部分金屬離子；后者專一性螯合Ca2＋，主要是高濃度的Ca2＋可是微管解聚，因此加入EGTA 來降低Ca2＋的濃度。（3）低滲溶液使細(xì)胞體積增大，染色體分散，容易觀察計(jì)數(shù)。水解：將根尖用自來水漂洗5次，每次3分鐘，再加入1%纖維素酶和果膠酶混合酶液1ml，在37攝氏度恒溫水浴鍋中酶解6h.取出，吸干酶液，加蒸餾水，低滲30分鐘。實(shí)驗(yàn)七：DNA 的顯示——Feulgen 反應(yīng)【基本原理】Feulgen 反應(yīng)（Feulgen reaction）是顯示DNA 的最典型的組織化學(xué)反應(yīng)，為學(xué)者Feulgen 和Rossenbeck于1924 年發(fā)明，簡(jiǎn)稱為Feulgen 法。也就是說, DNA 經(jīng)稀酸水解后產(chǎn)生的醛基，具有還原作用，可與無色品紅結(jié)合形成紫紅色化合物，從而顯示出DNA 的分布。Feulgen反應(yīng)現(xiàn)仍廣泛用于DNA的定性定位和定量的顯微測(cè)定技術(shù)上。3）1mol/L HCl（水解用）： 的鹽酸加蒸餾水1000ml 即成（應(yīng)將鹽酸緩緩加入水中）。 附：Feulgen 方法應(yīng)注意的幾個(gè)問題：1．對(duì)照切片的制做：進(jìn)行Feulgen 反應(yīng)時(shí), 一般要做一對(duì)照切片以便驗(yàn)證反應(yīng)結(jié)果。后來發(fā)現(xiàn)含醛基或氧化劑的固定劑對(duì)反應(yīng)的專一性并沒有影響。在Feulgen 反應(yīng)中，不能單獨(dú)使用Bouin 定液，因?yàn)樗荈eulgen 反應(yīng)的最壞固定劑，但經(jīng)Aller 改進(jìn)后的BouinAller 固定液效果卻較好。適當(dāng)?shù)乃鈺r(shí)間一般為8~12min。因此只能選用注明“DNA 染色反應(yīng)用”的堿性品紅才行。吞噬泡的形成需要有微絲及其結(jié)合蛋白的幫助，如果用降解微絲的藥物細(xì)胞松弛素B 處理細(xì)胞，則可阻斷吞噬泡的形成；免疫抑制劑環(huán)磷酰胺（CYP）對(duì)巨噬細(xì)胞的吞噬作用也有影響?！痉椒ú襟E】1．實(shí)驗(yàn)前二天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉湯（含臺(tái)盼蘭，起標(biāo)記作用）1ml 以刺激腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞（此步由教師在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行完畢）。5．鏡檢【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】在高倍鏡下可見有許多較大的圓形和形狀不規(guī)則的巨噬細(xì)胞，因未染色細(xì)胞核不易見到，其胞質(zhì)中含有數(shù)量不等的蘭色圓形小顆粒（即吞入的含臺(tái)盼蘭的淀粉肉湯所形成）；還可見少量黃色橢圓形有明顯細(xì)胞核的雞紅細(xì)胞，慢慢移動(dòng)玻片標(biāo)本，仔細(xì)觀察視野中的巨噬細(xì)胞表面，有的紅細(xì)胞已部分被吞入；有的巨噬細(xì)胞內(nèi)已吞入了一個(gè)或多個(gè)紅細(xì)胞形成吞噬泡。將體細(xì)胞核中全部染色體按照其大小、著絲粒位置，以至帶型有序地排列起來，此模式圖象排列即為核型（karyotype）或染色體組型。在正常動(dòng)物體中，精巢和骨髓均為是活躍分裂的組織，可不經(jīng)PHA 處理直接用來制作染色體標(biāo)本。【方法步驟】1．取青蛙，于實(shí)驗(yàn)前7~8 小時(shí)，腹腔注射秋水仙素（按每克體重6 微克）。5．離心機(jī)離心(2000 轉(zhuǎn)／分鐘)5分鐘去上清.6|. 加入新配制的卡諾固定液1ML固定20分鐘（甲醇3：冰醋酸1）。再用電吹風(fēng)將標(biāo)本吹干（或空氣干燥）?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】在顯微鏡下，染色體被染成紫紅色，胞漿完全不著色。低滲液的量、處理時(shí)間均與細(xì)胞的數(shù)量有關(guān)。4．固定液要隨用隨配, 固定徹底后再打散細(xì)胞團(tuán)塊, 否則細(xì)胞容易破碎, 染色體分散亦受到影響。染 色染色的目的和原理：染色的日的是借助于一種或多種染料，使組織和細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)分別著不同的染色，這樣在顯微鏡下能清楚地觀察細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，作出正確判斷。這類酶按最適pH值又可分為兩類，稱為堿性磷酸酶；，稱為酸性磷酸酶。C冰箱中保存，使用時(shí)水浴融化。置4176。③ 工作液：臨用時(shí)，稱取硝酸鉛25mg,，待全部溶解后，再緩慢地滴加入3%，同時(shí)快速攪動(dòng)，防止產(chǎn)生絮狀物。（5） 2%硫化銨：量取2ml硫化銨加入到98ml蒸餾水中，現(xiàn)配現(xiàn)用。在第三次注射后3~4小時(shí)，再向腹腔注射生理鹽水1ml。冷風(fēng)吹干玻片，如室溫低于20176。取出蓋玻片用蒸餾水沖洗，然后立于吸水紙上吸去多余水分。放入2%硫化銨溶液中處理3~5分鐘。
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