【正文】 冷凍干燥變成固態(tài)后，具有更好的化學和物理穩(wěn)定性。因此樣品經照射后，可能出現(xiàn)脂質雙層組成的改變。 一年以后所有體系的 171 粒徑均增大 ， Acidan N12 SLN增大到 350nm，廿二碳烷酸 SLN增大到 120nm，硬脂酸 SLN增大到 450nm，但是沒有微米級的粒子出現(xiàn)。這種情況是由于乳化劑poloxamer空間穩(wěn)定性下降引起 。濾過滅菌要求加壓操作并且樣品的直徑不能大于 m，這對 SLN 來講是比較困難的。一般來說， SDS 和一些能形成膠束的低分子量的表面活性劑能 很快達到平衡，而高分子量的表面活性劑（如 poloxamer）和卵磷脂則需要很長時間才達到平衡。以三棕櫚酸甘油酯、磷脂和甘膽酸鈉為輔料經高壓乳勻法制備的 SLN 的平均粒徑為 205nm；如果以 Pluronic F68 代替磷脂， SLN 的平均粒徑為 ；用甘膽酸鈉代替磷脂，則粒徑為 。而用高壓乳勻制備的 SLN 結果卻相反：增加磷脂的濃度，粒徑持續(xù)下降。這是因為磷脂分子在熔化脂質中的流動性小于在溶劑中的流動性，并且脂質和乳化劑的混合液的粘度大于溶 劑，所以乳勻需要更多的能量，導致 SLN 的粒徑增大。 對于微乳來說，不但配方組成，而且溫度下降速度與 pH 值都能影響制劑的質量。現(xiàn)在人們認為微乳并不是一種由微小液滴形成的真正的乳液，而是一種臨界溶液（ critical solution）。由于低溫凝固，脂質脆性增加，更易被粉碎，通過球磨或碾缽得到的粒子粒徑一般在 50μ m~100μ m。但是并不是溫度越高就越好，因為在高溫下藥物和載體的降解速度也會 加快。 （ 2）高壓乳 勻 [2] 高壓乳勻是目前制備 SLN 的經典方法。 SLN 的水分散系統(tǒng)可以進行高壓滅菌或γ輻射滅菌，具有長期的物理化學穩(wěn)定性，也可通過冷凍干燥或噴霧干燥制成固體粉末。脂質納米粒能夠改善藥物吸收、改變藥物體內過程、具有緩釋、控釋、提高藥物穩(wěn)定性、增強療效降低毒副作用等方面的優(yōu)越性，同時在生物體內及貯存過程中較穩(wěn)定。 固體脂質納米粒 概述 固體脂質納米粒（ solid lipid nanoparticles， SLN）是近十幾年正在發(fā)展的 — 種新型的脂質載藥系統(tǒng) [1]，它以天然的或人工合成的的高熔點固體脂質（如飽和脂肪酸甘油酯、硬脂酸、混合脂質）為載體，將藥物吸附或包裹于脂質核中制成的納米給藥體系。 固體脂質納米粒的制備 1． 制備方法 （ 1）高剪切乳勻和超聲分散 167 高剪切乳勻和超聲分散是藥劑學中廣為應用的一種分散技術，可用來制備乳劑、脂質體等，也可以用于固體脂質納米粒分散體系的制備。一般初步乳化如能得到微米級粒子則更有利于乳勻。 ② 冷乳勻 冷乳勻法的制備過程同熱乳勻法一樣，也需使藥物溶解或 分散在熔融的脂質中，熔化的樣品立即在干冰或液氮中冷卻。將脂質和藥 168 物首先溶解于有機溶劑中，然后對有機相和含有表面活性劑的水相進行乳化，將有機溶劑蒸發(fā)后，即形成 SLN。 為了使微乳中的油相在室溫下是固體，需要在制備時使體系的溫度高于脂質的熔點。因此，超聲不適用于脂質濃度高的配方。 （ 3）高剪切乳化和高壓乳勻 采用高剪切乳化時，乳化劑的濃度對 SLN 粒子大小的影響較大。脂質分子鏈越長，油相的 粘度越高，得到的 SLN 粒徑相應越大。在初步乳勻過程中要有足夠的乳化劑分子，以確保它能迅速包裹在新形成的粒子表面。 4．滅菌 注射給藥需要滅菌。濕熱蒸汽滅菌可以導致 o/w乳劑的組成發(fā)生改變。 Cavalli 等 [13]研究了濕熱蒸汽滅菌對 微乳法制備的 SLN的粒徑和 Zeta電位的影響。射線照射法由于射線的能量很高，在照射過程中會產生自由基，這些自由基與沒有經 過修飾的樣品重新結合或發(fā)生副反應而使樣品的結構發(fā)生化學改變。為了提高 SLN的化學和物理穩(wěn)定性，保持其原有的的粒徑，阻止 Ostwald熟化和避免水解，常用的方法是將 SLN分散液干燥成固體。冷凍防護劑 [15， 16]的加入可以減少粒子的聚合，還能使得到的干燥產品具有更好的再分散特性。冷凍防護劑和脂質的重量比 為 ~ 較合適。大量小晶體和非晶區(qū)的出現(xiàn)導致形成非常緊密的凍干粉網，因而降低了升華速 度。這些結果表明，三脂肪酸甘油酯制成納米粒后，其結晶溫度降低 20℃ ~30℃，所以三肉豆蔻酸甘油酯或 Witepsol H42 等熔點較低的脂質采用熱乳勻法所制得的納米粒，在室溫下以過冷態(tài)的形式存在。這說明要想獲得穩(wěn)定的三脂肪酸甘油酯的過冷分散體，必須要制備納米粒。 三脂肪酸甘油酯，混合脂肪酸酯納米粒的多晶型行為與單脂肪酸甘油酯不同。 上述結果表明， SLN 無論從熔化到重結晶還 是固化后晶型轉變及老化現(xiàn)象，都具有很高的可變性，貯存期間 SLN 的晶型并不能從本體的晶型來推斷，因為二者晶型轉變的動力學過程完全不同。例如，制備三棕櫚酸甘油酯 SLN 時， 174 當用 Cremophor EL 作為穩(wěn)定劑，α 晶型消失；如果用甘膽酸鈉為穩(wěn)定劑時，則該體系主要以α 晶型形式存在。 4．粒徑的影響 正如脂質在塊體材料和膠體體系中理化性質發(fā)生改變一樣，在膠體體系中， 粒徑的大小同樣能影響脂質的性質。在 ， 和 有較強的反射；另外在大多數(shù)情況下，在 處有一個小的衍射峰（圖 62[23]）。因此表面活性分子（如 SDS）會以三種形式出現(xiàn)，即：①在脂質的表面；②形成膠束；③表面活性劑單體的形式。藥物降解動力學由藥物的化學活性和藥物在水相或脂 /水界面上的濃度等因素決定。 SLN 的體內行為 納米粒進入體內后，被機體視為異物，人 體產生抗體與之吸附。這可能是由于一方面比較易于監(jiān)控 SLN 在血液中的行為以及它們可能被組織攝取，另一方面它也是治療中最常用的給藥途徑之一。低粘度的 SLN 分散體在注射針頭內會發(fā)生凝膠化，迅速變成一種高粘度的、含有會對人體造成危險的大粒子的混懸液。 SLN在體外釋藥 154h后，納米粒內的藥物仍以原形存在，說明 SLN可提高藥物的穩(wěn)定性。同時發(fā)現(xiàn)，組織中藥物 AUC和 MRT顯著高于普通溶液，尤以腦部 藥物濃度上升幅度最大。在大多數(shù)情況下， SLN 分散體被制備成軟膏或凝膠等劑型，確保使用的方便，而這個制備過程使 SLN 的濃度進一步減小。還可以調節(jié)藥物在皮膚中的釋放，從而提高藥物在特定皮膚層中的分配。 脂質納米粒的優(yōu)點在于它可以控制藥物在肺部的釋放，延長藥物在肺部的釋放時間。 脂質的化學結構也很重要，因為結晶性良好的脂質可以形成嚴密的晶格，這樣導致藥物的溢出。一般來說，長鏈脂肪酸的晶型轉變速度比短鏈脂肪酸慢。這樣形成的脂質納米粒具有一個脂質殼和藥物富集的核。 值得注意的 是，納米粒粒徑對藥物釋放的影響很小，藥物釋放曲線形狀主要受制備材料和制備條件的影響，如表面活性劑濃度、制備溫度和脂質基質的性質。聚集在脂質核外層或表面的藥物以藥物突釋的形式釋放出來，分散在脂質核內的藥物則緩慢地釋放。 綜上所述看出： SLN的明顯優(yōu)點是其成分都是生物相容的，制備方法快速有效，可以大規(guī)模生 181 產，避免使用有機溶劑和有可能生產出高濃度的產品等方面。 6. 2 脂質體 概述 早在 60 年代初，英國 Bangham 等發(fā)現(xiàn)，磷脂分散在水中能形成多層微囊，每一層均為磷脂雙分子層，各層之間被水相分開，這種具有類似生物膜的磷脂雙分子結構稱為脂質體。 5． 擴大性：如果藥物是抗原，脂質體還可作為疫苗的免疫佐劑。根據(jù)用途對脂質體粒徑的特定要求，不同大小脂質體?？梢圆捎貌煌闹苽浞椒?。 另外，有的文獻也按制備方法來分類，如 REV（ reverseevaporation vesicles）指用逆相蒸發(fā)法制備的脂質體； DRV（ driedreconstituted vesicles）指干燥重建法制得的脂質體； MVL（ multivesicular liposomes）即多室脂質體等等。脂質衍生物主要是由磷脂酰乙醇胺、膽固醇、二?；视偷韧ㄟ^一個可降解的酯鏈接上一個陽離子基團而形成，帶正電。基因治療（ Gene therapy）是指將遺傳物質（即 DNA）轉入人體細胞，并整合至染色體中，取代突變基因，補充缺失基因或關閉異?；颍瑥亩_到治療機體疾病或有益于治療的目的。 許多陽離子脂質體，特別是由單價脂質組成的陽離子脂質體，無法濃縮 DNA，從而導致脂質 DNA復合物異質分布，影響脂質體的轉染效率 。 首先，陽離子脂質體與帶負電的基因通過靜電作用形成脂質體 基因復合物，此復合物因陽離子脂質體的過剩 而帶正電；帶正電的脂質體 DNA 復合物由于靜電作用吸附于帶負電的細胞表面，然后 185 通過與細胞膜融合或細胞的內吞作用進入靶細胞。它能被某些因素所誘發(fā)，如一些脂質、肽類或 pH 值變化。從 Lα 到 HH 相轉變過程中，脂質最有利的分子構型是錐狀，如小的極性頭和大的疏水烴鏈，而圓柱狀的脂質有利于形成層狀構型，細胞融合 吞飲作用 DNA 放釋放 溶酶體 核內體 細胞融合 吞飲作用 核內體 溶酶體 DNA 釋 放 轉錄 核攝取 核內體 翻譯 陽離子脂質體 復合物 蛋白質 圖 65 陽離子脂質體轉移基因圖 186 反錐狀的脂質（大的極性頭部和小的疏水鏈）則形成膠束結構。 （ 2） 陽離子脂質體 DNA 復合物與細胞外物質的相互作用 當陽離子脂質體 DNA 復合物進入體內后，它將同細胞外的一些物質發(fā)生相互作用。目前認為陽離子脂質 體 DNA 復合物進入細胞有三種模式： (1)與細胞表面發(fā)生非特異性結合； (2)通過細胞內吞作用進入，隨后與核內體膜發(fā)生融合； (3)通過細胞質膜上形成的小孔進入。在胞質內，細胞通過微管網狀結構或肌動蛋白微絲等主動轉運系統(tǒng)將含 DNA的微粒系統(tǒng)轉移至核周圍。 3．聚陽離子脂質體（ PCL） [47] 同陽離子脂質體相比，聚陽離子脂質體可以更有效地將陽離子脂質體 DNA 復合物轉運到胞內，且細胞毒性和溶血活性小。因此，必須開發(fā)新型的具有特異靶向性的載體系統(tǒng) [48]。 糖基化脂質體的制備可以采用脂蛋白包衣或者是將糖脂融合到脂質體的表面，糖脂的化學結構、分子量和理化性質對轉染效率的影響很大。雖然可以預先用空白脂質體或硫酸葡聚糖等巨噬細胞抑制劑抑制 巨噬細胞的吞噬作用，從而降低肝臟對脂質體的攝取，但這對機體防御功能不利。吞噬過程很復雜，至少包括兩個階段，即激發(fā)階段和胞飲階段?？墒窃摲肿永湵旧砭哂猩砘钚裕ㄈ缱R別糖脂，和天然凝集素鍵合等），從而影響脂質體的生物功能。實驗證明，含5％ ~15％摩爾 GM1 的脂質體血中滯留量明顯增高，半衰期大大延長。在長循環(huán)脂質體研究中，聚乙二醇化 (PEGs)脂質體的長循環(huán)機制之一即是立體位阻效應。 （ 5）特異性配體的缺乏 機體對外來異 物作用時，除非特異性吞噬作用外，還存在特異性的受體 (包括免疫球蛋白、補體等 )介導的過程。高表面密度和長的 PEG 鏈對降低蛋白質對脂質體的吸附是必要的，表面密度在空間位阻和范德華力上的影響比鏈的長度影響更大。 4． 研究現(xiàn)狀 （ 1） 高分子 表面修飾的脂質體 [55] 常用的高分子有聚乙二醇（ PEG）、混合磷脂、非離子表面活性劑、 IgA 及血清成分等，其主要目的是提高脂質體表面的親水性，降低脂質體與調理素間的相互作用。 191 （ 3）調整ζ電位 一般來講，極性微粒不易被吞噬，ζ電位 越高，被吞噬越少。有人將神經節(jié)苷酯摻入二硬脂酸胞苷，所制備的脂質體在磷酸緩沖液和血漿中 24 小時后僅釋放包封藥物的25％。 分子拉鏈的保護機理可以用化學動力學和熱力學來解釋。然而整個吞噬過程同酶催化反應相似。所謂長循環(huán)脂質體就是靜脈注射給藥后，能夠躲避 RES 的攝取而在血液循環(huán)系統(tǒng)中長時間滯留，進而可到達非 RES 系統(tǒng)的靶向載藥系統(tǒng)。 GalC4chol/DCchol/DOPE(2： 2：6) DNA 復合物通過人體肝 HepG2 細胞中唾液酸糖蛋白缺乏受體高效識別，其轉染效率和 DNA 攝取率明顯高于 DCchol/DOPE（ 4:6） DNA 復合物。可以將外源 DNA 轉運到特定的細胞中，所使用的配體包括半乳糖、甘露糖、 188 乳糖、轉鐵蛋白、內皮細胞生長因子和抗原等等。因此在具體研究中，必須對其分子量進行篩選。如果將陽離子脂質體DNA 復合物微量注射至細胞核內，或將裸露的 DNA 直接注入胞漿中部不能對細胞有效轉染，而將質粒 DNA 直接注入細胞核中卻獲得很高的基因表達。 ②陽離子脂質體 DNA 復合物脫離核內體 質粒 DNA 通過細胞內吞作用進入細胞后必須從核內體 (endosome)中脫離出來才能對細胞進行轉染，否則 DNA 將隨核內體移至溶酶體，被大量的核酸酶降解，使轉染失敗。已知血漿中的白蛋白會吸附到陽離子脂質體 DNA 復合物上，使復合物的 Zeta 電位降低，減少復合物之間的電荷排斥力，導致復合物的聚集 [45]。絕大多數(shù)陽離子脂質體需要一種中性的脂質（如 DOPE）來達到最佳的轉染效果。 Liczinger 等 [43]研究了脂質體在水中的多種形態(tài)，證明脂質最重要的兩種形態(tài)是 Lα 相和 HH 相，Lα 相是一種具有流動性烴鏈的層狀結構，而 HH 相是一種二維的六方晶相結構。為了使 DNA 在細胞內高效表達，體外陽離子脂質體 基因復合物的正負電荷比約為 2： 1。其原理可能是因為 PLL和 DNA 之間的相互作用很強，可以形成濃縮