【正文】 為兩種類型 [25]。隨著磁共振血管成像（ Magic Resonance Angiography， MRA）的應(yīng)用與發(fā)展， GdDTPA 又成為了增強(qiáng) MR 血管成像的主要對(duì)比劑。目前國(guó)內(nèi)、外正在研究的熱介質(zhì)射頻誘導(dǎo)加溫方式十分引人注目。而且在移植的腎癌和結(jié)腸癌模型上，載藥磁性納米粒能使腫瘤完全地緩解。這些研究結(jié)果充分表明，磁性介導(dǎo)的納米給藥系統(tǒng)可使藥物有效地靶向作用部位。 一般認(rèn)為磁性納米粒作為抗腫瘤藥物的載體，至少發(fā)揮了以下作用： ① 由于納米粒在磁場(chǎng)的作用下被磁化而相互聚集，引起腫瘤組織的血管栓塞，造成腫瘤組織缺血、缺氧，對(duì)化療藥物敏感性增加；② 部分未發(fā)生聚集的納米粒進(jìn)入腫瘤組織間隙或被腫瘤細(xì)胞攝取，從而在細(xì)胞間隙活細(xì)胞內(nèi)釋放化療藥物； ③ 良好的磁靶向性以及腫瘤組織與正常組織結(jié)構(gòu)上的差別，使納米?？蛇x擇性地聚集于腫瘤組 238 織，大大提高了治療部位藥物的水平。當(dāng)磁力大于動(dòng)脈（ 10cm/s）或毛細(xì)管（ ）的線性血流速率時(shí)，磁性載體（ ＜ 1μ m＝ 被截留在靶部位，并可能被靶組織的內(nèi)皮細(xì)胞吞噬。 3．在血漿中的穩(wěn)定性 含藥脂質(zhì)體進(jìn)入血循環(huán)達(dá) 到靶部位之前，必須保持完整形態(tài)。這些資料將作為判斷樣品毒性的重要依據(jù)。 2．體內(nèi)磁導(dǎo)向定位 可選擇小鼠或家兔為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用對(duì)稱器官對(duì)比試驗(yàn)的方法，考察在自 然狀態(tài)下和附加磁場(chǎng)時(shí)樣品的聚集情況。一般磁性納米粒的含鐵量越高，磁響應(yīng)性（可用飽和磁場(chǎng)強(qiáng)度表示）越強(qiáng)，剩磁也越大。將上述溶液體積調(diào)節(jié)到 10mL，于 509nm 下測(cè)定樣品液 的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，從而確定鐵的含量。 磁性納米?；虼判灾|(zhì)體也可以繼續(xù)在其表面通過氧化還原等方法或者通過簡(jiǎn)單的吸咐等制備成免疫磁性納米?；蛞呙獯判灾|(zhì)體。 二步法文獻(xiàn)較少。合成高分子 材料作為骨架的磁性微球多用此法制備。 ） μ m 的溫敏磁性脂質(zhì)體，并且對(duì)其體內(nèi)主動(dòng)靶向性進(jìn)行了深入的考察 [9]。當(dāng)反相膠團(tuán)經(jīng)過接口時(shí)，就披上第二層類脂外衣形成雙層膜。此法適合于包裹水溶性藥物、大分子生物活性物質(zhì)。 3．超聲波分散法：水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液，加入磷脂與膽固醇及脂溶性藥物成共溶于有機(jī)溶劑的溶液，攪拌蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，殘留液經(jīng)超聲波處理 ,然后分離出脂質(zhì)體。 ④ 鹽析固化法（ Salting out coagulation method）：就是將藥物和包封材料如明膠溶于水中，在表面活性劑存在下，高速攪拌，徐徐加入鹽類沉淀劑（如硫酸鈉溶液）使鹽析，加少量溶劑化劑（ Resolving 232 agent）如乙醇、異丙醇等，至混濁剛消失，繼續(xù)攪拌并加入適量固化劑（如戊二醛水溶液）固化，經(jīng)過透析或經(jīng)葡聚糖凝膠柱除去鹽類而制成。反應(yīng)產(chǎn)物冷卻后經(jīng)離心除去體系中的大粒子和聚集物，用 Sephacryl S300 凝膠柱進(jìn)行分離，棄去非磁 性部分，磁性組分即 Dextran MNPs，用去離子水透析后凍干封存。具體操作步驟如下： 231 向 磁流體中加入 十二烷基硫酸鈉、 丙烯酰胺、 甲叉雙丙烯酰胺，攪勻通氮?dú)夂筮M(jìn)行照射，總輻射劑量達(dá) 8000Gy 后向反應(yīng)體系中補(bǔ)加 丙烯酰胺、 甲叉雙丙烯酰胺和 烯丙胺，繼續(xù)照射 8000Gy，用水反復(fù)洗滌。 ② 磁性介質(zhì)粒子大小應(yīng)合適，一般在 10nm~20nm 之間，最大不能超過 100nm。 磁性納米粒和磁性微球還可進(jìn)一步與抗體結(jié)合，制備成免疫磁性納米粒或免疫磁性微球，它們?cè)谂R床和生物醫(yī)藥學(xué)實(shí)驗(yàn)中有很多應(yīng)用，主要是用于細(xì)胞的分離，如用于清除血液中的癌細(xì)胞等。 為了討論方便，本章將磁性納米粒制備的上述各種給藥系統(tǒng)統(tǒng)稱為磁性納米載藥系統(tǒng)。使得外磁場(chǎng)對(duì)其能夠產(chǎn)生足夠的吸引力，從而將其靶向于治療部位及其周圍組織?？刂茖?shí)驗(yàn)條件，可得到直徑不同的磁性納米?；虼判晕⑶?。還可以將所制得的 Dextran MNPs 進(jìn)行羧甲基化處理制備羧甲基葡聚糖磁性納米粒（ CDM MNPs）。 磁性脂質(zhì)體的制備 磁性脂質(zhì)體的研究 開始于二十世紀(jì)八十年代中后期。本法制備的大多為單室脂質(zhì)體。 7．復(fù)乳法：將少量水相與較多量的磷脂油相進(jìn)行乳化（第 1 次）形成 W/O 的反相膠團(tuán)，減壓除去部分溶劑，然后加較大量的水相進(jìn)行乳化（第 2 次），形成 W/O/W 型復(fù)乳，減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，即得脂質(zhì)體。 此外，還有前體脂質(zhì)體法、鈣融合法、加壓擠 出法、 pH 梯度法、噴霧干燥法等。 上述方法得到磁性脂質(zhì)體又可以選擇不同的脂質(zhì)材料制備成為磁性溫敏脂質(zhì)體。 ② 將磁性納米粒分散在高分子骨架材料的水溶液中，加入適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣谝环N疏水性溶劑中乳化成為 W/O 型乳劑，用熱固化法或交聯(lián)固化法使高分子骨架材料固化成磁性微 球 [11]。 免疫磁性微球的制備 免疫磁性微球（ Immunomagic microspheres， IMMS），或稱免疫磁珠（ Immunomagic Beads， IMB），是表面結(jié)合有單克隆抗體的磁性微球。 磁性納米載藥系統(tǒng)的質(zhì)量評(píng)價(jià) 對(duì)于得到的磁性納米載體 系統(tǒng) 要從如下一些方面考察其理化性能： 顆粒形態(tài)和粒徑檢測(cè) 采用掃描電鏡對(duì)樣品進(jìn)行表面形態(tài)的觀察（包括形狀、圓整度等）；將樣 品適當(dāng)稀釋，經(jīng)除塵或染色處理后，采用激光散射粒徑分析儀、圖像分析儀或光子相關(guān)光譜儀進(jìn)行檢測(cè)，測(cè)得樣品的平均粒徑和粒徑分布，后者可以用粒徑分布概率圖的形式給出。 磺基水楊酸法的主要操作過程如下：取上述用樣品適量，加入 10%的 NH4Cl 溶液 ， 10%的磺基水楊酸溶液 ，滴加氨水至溶液變成黃色，再加補(bǔ)加氨水 ，用蒸餾水定容后，以空白溶液為參比，于 445nm 處測(cè)定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算鐵的含量。 磁導(dǎo)向定位 1．體外磁導(dǎo)向定位 最簡(jiǎn)單的方法是將磁性納米粒的水分散溶液置于試管中，在其一側(cè)加上一定大小和形狀的磁鐵，記錄磁性納米粒全部集中于試管一側(cè)所需時(shí)間，時(shí)間越短磁定位性能越好。可通過磁共振技術(shù)、藥物動(dòng)力學(xué)與組織檢查等方式進(jìn)行分析測(cè)定。 載藥量的測(cè)定 對(duì)于載藥的磁性納米粒，可通過一定的處理將藥物與載體分離，或采用同位素標(biāo)記，而后通過高效液相、 分光光度法或液質(zhì)聯(lián)用等分析手段進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定方法是將脂質(zhì)體樣品加入人血漿，于透析管中 370C 孵育，測(cè)定不同時(shí)間從脂質(zhì)體中釋出藥物的量，并同時(shí)在顯微鏡下觀察脂質(zhì)體形態(tài)的變化。已經(jīng)證明，在血流速率為 ~，在 的外磁場(chǎng)下，就足以使含有 20%（ g/g）磁性載體全部滯留。納米粒中藥物在腫瘤組織的 緩慢釋放，能夠較長(zhǎng)時(shí)間維持高濃度化療藥物水平 [17]。 磁性納米粒的水分散體在醫(yī)藥方面也有較多的研究報(bào)導(dǎo)。在此基礎(chǔ)上， Lubbe 等人 [22]在 14 位晚期實(shí)體瘤病人身上進(jìn)行了 載表阿霉素磁性納米粒的一期臨床試驗(yàn)。一般采用的熱介質(zhì)就是氧化鐵的磁性納米粒。但隨著臨床使用的增加， GdDTPA 的一些明顯的不足這處被人們所認(rèn)識(shí)，如：它在體內(nèi)消除太快（入血后可迅速通過細(xì)胞間隙，并經(jīng)腎臟排泄）；而且體內(nèi)分布沒有特異性，使MR 圖像對(duì)比不能明顯改善，同時(shí)也需要相應(yīng)的設(shè)備能夠快速掃描，其價(jià)格也較貴。一類是普通的超順磁性氧化鐵納米粒（ SPIO）：一般直徑 40nm~400nm 之間不等。 2．超順磁性氧化鐵納米粒的生物學(xué)特性 超順磁性氧化鐵 納米粒 在體內(nèi)的分布具有明顯的特異性。這是由于 USPIOs 粒 徑 較小而且表面包有較厚的葡聚糖層，與血漿蛋白和調(diào)理素的作用減弱，影響了吞噬細(xì)胞對(duì)其的攝入，血循環(huán)半衰期長(zhǎng)達(dá) 100min 以上，而在血管中停留較 長(zhǎng)時(shí)間使得其可以通過 毛細(xì)胞血管壁，更廣泛地分布于組織中，特別是可通過毛細(xì)血管末梢進(jìn)入骨髓，并可通過淋巴管，輸送到淋巴結(jié)。 AMI25 的臨床劑量稍大些 [27]，但 70kg 體重的成年人也只需接受約 80mg 的 Fe 就可滿足診斷需要。超順磁性氧化鐵納米粒分布于組織后，呈不均勻分布，造成局部磁場(chǎng)的不均勻，從而加速了質(zhì)子去相位的過程，縮短了組織的 T2 和 /或 T1 值，使組織信號(hào)降低（陰性增強(qiáng)）或增高（陽性 增強(qiáng)）。良性肝臟腫瘤的信號(hào)雖然降低，但弱于正常肝組織，而且具有一定的特征性，故良性肝臟腫瘤的檢出率仍可達(dá) 90%以上。結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有的血管在靜注 AMI227 后45min 都增強(qiáng)效果都非常明顯，并且以三種劑量下的增強(qiáng)程度沒有明顯差別。 超順磁性氧化鐵納米粒除了應(yīng)用于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)外，也有用作腦血流灌注和心肌缺血評(píng)價(jià)的報(bào)導(dǎo)。下面以免疫磁性微球?yàn)榇碚f明磁性納米粒在生物醫(yī)藥方面的應(yīng)用。直接法可以減少洗 滌和培養(yǎng)步驟，但對(duì) IgM單抗很少能適用。 2．免疫磁性微球在分子生物學(xué)上的應(yīng)用 應(yīng)用于分子生物學(xué)上的磁性微球表面不是連接抗體，而是連接親和素，通過親和素一生物素反應(yīng)與靶核酸相連。 (2) 純化 PolyA+mRNA 將 PolyT 直接共價(jià)連接于或通過親和素一生物素連接于磁性微球上即可用于分離 PolyA+mRNA，分離后的 mRNA 可以用洗脫液或加熱的方法解離下來。 Hultman 等描述了一種運(yùn)用磁性分離技術(shù)的體外誘變方法。 Cudjoe 等首先用免疫磁珠分離出培養(yǎng)基和臨床樣品中的毒素， 然后在免疫磁珠上直接用 ELISA（ IMBELISA）進(jìn)行檢測(cè)，他建立了用 IMB隊(duì) ISA 檢測(cè)食物中的沙門氏桿菌的系統(tǒng)，對(duì)于熱處理后的熟食品，增菌后的培養(yǎng)基中僅含微量競(jìng)爭(zhēng)性腸道菌群，濃縮后可直接用 IMBPCR 進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)于未經(jīng)過熱加工的生食品，其中含有較多的競(jìng)爭(zhēng)微生物，要先用免疫磁珠進(jìn)行分離，然后在 M培養(yǎng)基中短時(shí)增菌，濃縮，最后用 IMBELISA 檢測(cè)。在將樣品中的細(xì)菌濃集至合適體積的同時(shí)也除掉了非特異的 Taq 酶抑制因子。 最近，市場(chǎng)上出現(xiàn)了一種將免疫磁珠和電化學(xué)發(fā)光傳感器（ IMBECL）結(jié)合起來的自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng) ORIGEN，首先用免疫磁珠捕獲靶物質(zhì)，再用夾心的方法聯(lián)上釕的三（二吡啶）螯和物 [Ru(bpy) 3]2+標(biāo)記的 reporter 抗體，用磁場(chǎng)濃集后用電壓激發(fā)出電化學(xué)發(fā)光。其中，運(yùn)用免疫磁性微球物理 地清除癌細(xì)胞的方法具有安全、效果好、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，得到廣泛應(yīng)用。然后加入預(yù)先和羊抗鼠免疫球蛋白培養(yǎng)過的磁性微球。微球與靶細(xì)胞比例為 50:1。病人表現(xiàn)出嚴(yán)重的 T 細(xì)胞缺陷，在移植后一年內(nèi)不能檢測(cè)出 IL2 的分泌，但 NK 細(xì)胞的功能在移植后一個(gè)月正常，在第二和第三個(gè)月甚至超出一般水平。其中二人的無病存活期超過了先前的緩解期（ 20 月和 12 月）。 Shpall、 Anderson 等人將 IMMS應(yīng)用于乳腺癌病人的自身骨髓移植，對(duì)應(yīng)用 IMMS 清除乳腺癌的最優(yōu)條件進(jìn)行了探討。 Champlin 等用免疫磁珠在異體骨髓移植前只清除其中的 CD8+細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)既可以防止 GVHD，又保留了移植物抗白血病的能力。 (3) 組織分型 器官移植中的 HLAl 和 HLA2 組織分型一般采用微量細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)，首先要采用密度離心法將細(xì)胞從外周血中分離出來，步驟煩瑣費(fèi)時(shí)。 Brinchmann同時(shí)應(yīng)用免疫磁珠成功地從自然感染的 CD4+細(xì)胞中分離出了人類免疫缺陷病毒 (HIV)，并發(fā)現(xiàn)活化的 CD8+細(xì)胞對(duì)自然感染的 CD4+細(xì)胞中的 HIV 的復(fù)制有抑制作用，表明 CD84+細(xì)胞可以分泌一種可溶性的 HIV 復(fù)制抑制因子。 (5) 分離細(xì)胞器 [34] 傳統(tǒng)上，分離細(xì)胞器都是基于細(xì)胞器大小和密度的差異，在細(xì)胞勻漿后應(yīng)用密度梯度離心來實(shí)現(xiàn)的。 EMBL 用一對(duì)簡(jiǎn)單的抗原 /抗體模型對(duì) MFFS 的條件進(jìn)行了優(yōu)化，結(jié)果表明，它相對(duì)于傳統(tǒng)的分離方法具有收率高、非特異吸附少、對(duì)結(jié)合物損傷小等優(yōu)點(diǎn)。可以重復(fù)地檢測(cè)出樣品中小于 10pg 的 DNA（ l cell）。據(jù)報(bào)道 RNA 包入脂質(zhì)體內(nèi)的包封率可達(dá) 43%~60%。磁性納米粒還是目前國(guó)內(nèi)外高分子材料研究領(lǐng)域的熱門方向之一。理論上，理想的磁性藥物載體應(yīng)該具備以下幾個(gè)條件：具有較好的磁場(chǎng)響應(yīng)性，在靶部位置外磁場(chǎng)后，載體能夠 100%地滯留在靶部位；粒徑足夠小能夠自由通過最小內(nèi)徑的毛細(xì)血管，不會(huì)發(fā)生異位栓塞和滯留；不被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和其它正常細(xì)胞攝取或吞噬；藥物載體具有較高的載藥能力，并可以 進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)，并達(dá)到藥物的控釋。并且與陰離子脂質(zhì)體、 pH 敏感脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體、融合脂質(zhì)體相比，陽離子脂質(zhì)體在基因治療中具有穩(wěn)定性好，貯存時(shí)間較長(zhǎng)，轉(zhuǎn)染率較高以及能夠轉(zhuǎn)運(yùn)復(fù)雜的大分子物質(zhì)的特點(diǎn)等。 9 例發(fā)現(xiàn)有癌細(xì)胞的病人中， 7 人因?yàn)閺?fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移而死亡。 (6) 用免疫磁珠清除自身免疫型精子 Foresta、 Shulmand 等應(yīng)用免疫磁性微球來清除自身免疫不育病患者精液中帶有自身抗體的精子，希望用凈化的精于 進(jìn)行體外或體內(nèi)受精來治療自身免疫不育癥。另外，許多新發(fā)展起來的細(xì)胞和分子生物學(xué)技術(shù)必須用體外培養(yǎng)的細(xì)胞。獲得了l04~l06 倍富集的特異性 B 細(xì)胞。 Lie 等發(fā)現(xiàn)用此方法也可進(jìn)行血清的 BoLA 分型，并且明顯優(yōu)于傳統(tǒng)方法。 (2) 反相分離干細(xì)胞 直接移植骨髓干細(xì)胞是克服異體骨髓移植時(shí) GVHD 和 ABMT 時(shí)癌癥復(fù)發(fā)的一種可能的選擇，但最大的困難是如何分離出純的造血干細(xì)胞。 Anderson 等人聯(lián)合應(yīng)用免疫磁性微球 和化學(xué)分離法從正常骨髓中清除 CAMAl 乳腺癌細(xì)胞。其中 ll 例應(yīng)用 IMMS 進(jìn)行骨髓凈化，3l 例用 Maphosphamide 進(jìn)行骨髓凈化， 14 例沒有進(jìn)行骨髓凈化。 Ogniben 等人對(duì) IMM