tlc基本原理(完整版)
【正文】 點(diǎn)樣 點(diǎn)樣用的毛細(xì)管為內(nèi)徑＜ lmm 的管口平整的毛細(xì)管，將樣品溶于低沸點(diǎn)的溶劑（乙醚、丙酮、乙醇、四氫呋喃等）配成 1％溶液。 粘結(jié)劑：一般用所羧甲基纖維素鈉（ CMC），也有用淀粉的。先將選擇的展開(kāi)劑放入色譜器中（小板可用廣口瓶代替），使色譜器內(nèi)空氣飽和 5－ 10min，再將點(diǎn)好試樣的薄層板放入色譜器中進(jìn)行展開(kāi)，點(diǎn)樣的位置必須在展開(kāi)劑液面之上，當(dāng)展開(kāi)劑上升到薄層的前沿（離前端 5－ 10mm）或多組分已明顯分開(kāi)時(shí)，取出薄層板放平晾干，用鉛筆劃溶劑前沿的位置后，即可顯色。 一般來(lái)說(shuō)，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再 根據(jù)需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來(lái)調(diào)節(jié)溶劑系統(tǒng)的極性，以達(dá)到好的分離效果，適合于生物堿、黃酮、萜類(lèi)等的分離；中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類(lèi)的分離；強(qiáng)極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)，適合于極性很大的生物堿類(lèi)化合物的分離。溫度，濕度對(duì)分離效果影響也很明顯，在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)有時(shí)同一展開(kāi)條件，上下午的 Rf 截然不同。一 般把兩種溶劑混合時(shí) ,采用高極性 /低極性的體積比為 1/3 的混合溶劑 ,如果有分開(kāi)的跡象 ,再調(diào)整比例（或者加入第三種溶劑） ,達(dá)到最佳效果；如果沒(méi)有分開(kāi)的跡象（斑點(diǎn)較“拖”），最好是換溶劑。洗脫劑的選擇，須根據(jù)被分離物質(zhì)與所選用的吸附劑性質(zhì)這兩者結(jié)合起來(lái)加以考慮在用極性吸附劑進(jìn)行層析時(shí)，當(dāng)被分離物質(zhì)為弱極性物質(zhì)，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質(zhì)為強(qiáng)極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。介電常數(shù)高，洗脫能力就大。要根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)，吸附劑的吸附強(qiáng)度，與溶劑的性質(zhì)這三者的相互關(guān)系來(lái)考慮。如對(duì)于 C27 甾體皂甙元類(lèi)成分，能因其分字中羥基數(shù)目的多少而獲得分 離：將混合皂甙元溶于含有 5％氯仿的苯中，加于氧化鋁的吸附柱上，采用以下的溶劑進(jìn)行梯度洗脫。主要區(qū)別在于薄層層析要求吸附劑（支持劑）的粒度更細(xì)，一般應(yīng)小于 250 目，并要求粒度均勻。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。 TLC 的通用顯色方法 理想的顯色希望靈敏度高，斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好，斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有： 紫外照射法：方便、不破壞樣品； 碘蒸氣法：通用性強(qiáng)，與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用； 熒光試劑：制造熒光背景，使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別，有熒光物質(zhì)更明顯； 硫酸溶劑：對(duì)絕大多數(shù)有機(jī)物有效，但有破壞性。但應(yīng)注意 更換樣品時(shí)，應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。而展開(kāi)距離則隨薄層的粒度粗細(xì)而定，薄層粒度越細(xì)，展開(kāi)距離相應(yīng)縮短，一般不超過(guò) 10 厘米，否則可引起色譜擴(kuò)散影響分離效果。這一例子說(shuō)明，同樣的中草藥成分在不同的吸附劑中層析時(shí)，需用不同的溶劑才能
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